银杏达莫注射液中总银杏酸HPLC检测法的建立及其含量分析.doc

银杏达莫注射液中总银杏酸HPLC检测 法的建立及其含量分析杨广安TOM MS铜仁职业技术学院贵州省生化工程中心摘要：采用高效液相色谱仪检测银杏达莫注射液中总银杏酸，建立Y检查方法并对含 量进行了分析通过对白果新酸(C13 : 0)在11.088 . 0 11*1111?呈良好线性关 系，回归方程为:Y=8558.8X+8. 5854 (R2=0. 999 8)，平均添加回收率为103. 02% (RSD=0. 72%),精密度的RSD为0.89%,稳定性的RSD为1. 09%,银杏达莫注射 液中银杏酸的最低检出量为2. 2 ng • mlA银杏达莫注射液中未检测到总银杏酸, 表明样品符合银杏达莫注射液质量标准所建立的以白果新酸为标准品测定总银 杏酸的HPLC法具有较好的精密度和重现性，可用于银杏达莫注射液的质量控制， 为银杏达莫注射液现行质量标准的提高提供可靠的理论依据关键词：HPLC;银杏达莫注射液;总银杏酸;內果新酸;作者简介：马海霞(1989-),女，讲师，硕士研究生，山东省菏泽市人，2016 年毕业于贵州大学学校药物化学专业，研宄方向：天然药物分析收稿日期：2017-09-20Establishment of HPLC Method for Determination of Total Ginkgolic Acid in Ginkgo Biloba Injection and Its Content AnalysisMA Hai-xia YANG Guang-an TAN Qi-ming HE TunTongren Polytechnic College; Research Center ofBiochemistry Engineering of Guizhou Province;Abstract：The total ginkgolic acid in ginkgo biloba injection was detected by high performance liquid chromatography (HPLC) ， and the determination method and ginkgolic acid content were analyzed. The regression equation was Y =8558.8 X + 8.5854 (R2 = 0.9998) , and the average recovery was 103.02% (RSD = 0.9998)，and the precision RSD was 0. 89%, the stability RSD was 1. 09%, and the lowest detection rate of ginkgolic acid was 2. 2 ng • mL1 in Ginkgo biloba. No total ginkgolic acid was detected, indicating that the sample meets the quality standards of Ginkgo biloba injection. The HPLC method for the determination of total ginkgolic acid by using ginkgo acid as the standard has good precision and reproducibility, so it can be used for the quality control of ginkgo dipyridamole injection.Keyword：total ginkgolic acid; ginkgolic acid (C13 •• 0) ; ginkgo leaf extract and dipyidamole injection; HPLC;Received： 2017-09-20银杏达莫注射液由银杏叶提取物和双嘧达莫制备而成的中药复方剂，因含有较 高的总黄酮醇苷、萜类内酯等，具有降血糖、软化血管及抗氧化、增强免疫等功 效m,临床上主要用于抗血小板聚集、预防和治疗动脉硬化及高血压引起的冠 状动脉供血不足、心绞痛、心肌梗塞等疾病，是心脑血管及外周循环障碍的冇效 治疗药m。

但相关研宄证实y该类制剂具有致敏性、免疫毒性、细胞毒性等不 良反应［3-5］，孙锴边1等研宄表明银杏酸可呈剂量依赖性地抑制肝细胞线粒体 活力，造成肝损伤其原因主要与EGb中残留的银杏酸有关，因此在制剂中必须 限定其含量银杏达莫注射液中黄酮类和萜类内酯含量测定报道居多m，然而对银杏酸的 分析方法报道很少如李兰崇21等使用11PLC法检测考察银杏叶片、银杏茶及银 杏胶囊中银杏酸的含量;杜小伟等使用HPLC对舒血宁注射液中总银杏酸做 了限量检查目前，笔者未见对银杏达莫注射液中银杏酸含量测定的文献报道 木文以白果新酸(C13 : 0)作为标准品对银杏达莫注射液中银杏酸含量测定， 为银杏达莫注射液质量标准的提高提供可靠的依据1实验部分1.1实验试剂和仪器 银杏达莫注射液，山西普德药业股份有限公司提供标淮品：白果新酸（C13 : 0） （批号：111690-200702，中国药品生物制品检定所）银杏总酸试剂：（批 号：111594-200603，中国药品生物制品检定所）：甲醇（色谱纯，天津市科密欧 化学试剂有限公司）；磷酸（分析纯，贵阳高新技术开发区华通化学试剂厂）； 其他试剂均为分析纯分析型HPLC: （1100 scries） Agilent Technology, U.S;C18高效液相色谱柱（大连依利特分析仪器有限公司）；BSA124S电子天平 （赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；RE-52A旋转蒸发仪（上海亚荣牛.化仪 器厂）：SHB-III循环水式多用真空泵（郊州长城科工贸有限公司）：SG2200HE超 声波清洗器（上海冠特超声仪器公司）：其他为一般常规仪器。

1.2实验方法1.2.1色谱条件色谱柱:Hypersil ODS-2 C18 （4.6X150 mm）;流动相：甲醇_0. 4%磷酸溶液 （85:15）;流速：1. 0m L • min;检测波长:310 nm;柱温：（450. 1） C1.2.2溶液的制备标准品溶液制备:精密称取标准品白果新酸适量，加甲醇制成每1 mL含88pg 的溶液，作为标准品储备液另取总银杏酸标准品适量，加中醇制成每ImL 含20 u g的溶液，作定位用定位标准品溶液样品溶液制备:取50 m L银杏达莫注射液，混匀，浓缩至4 m L左右，加甲醇定 容至5 m L，作为样品熔液阴性样品样液制备:按处方称取双嘧达莫和丙二醇，按样品溶液制备，作阴性样 液1.2.3系统适用性试验精密量取标准品溶液2.5 m L置5 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为 标准品溶液分别取标准品溶液、样品溶液和阴性样品样液进行HPLC分析，记 录色谱阁1.2.4线性关系考察精密量取白果新酸标准品溶液1.25, 2.5，5.0, 6.6 m L分别置于10 m L量瓶 中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成标准品溶液，在HPLC上进样分析并记录 色谱图。

1.2.5检测限 以白果新酸测定检测限，采用测量基线噪声的色谱条件、测量基线噪声1.2.6精密度试验直接取标准品溶液20 P L重复进样分析5次，记录色谱图1.2.7稳定性试验直接取标准品溶液20 uL分别在0，2, 4, 8，12, 24 h,记录峰面积1.2.8重复性试验取08140920、08140921、081409样品22批样品，按1. 2. 2项制备3份样液，分 别平行6份，每次进样20 PL，记录峰面积1.2.9添加回收试验取5瓶10 m L装银杏达莫注射液，混匀，分别加入标准品，按溶液制备项下方 法操作，制成样品溶液将上述溶液在液相色谱仪上测定2次，计算加样回收率， 重复试验3次1.2.1 0样品含量测定取3批银杏达莫注射液样品，按1.2. 2项下制备样品溶液进样20 PL测定，采用 外标法，以闩果新酸为标准品，计算总银杏酸的含量2结果与分析2.1系统适用性试验分别取标准品溶液、样品溶液和阴性样品样液进行HPLC分析，记录色谱图如图 1所示样液、阴性样品谱图（如图3、图4所示）中在上述组分的峰位处均无 干扰峰出现图1白果新酸标准品HPLC图谱 下载原图阁2总银杏酸标准品HPLC阁谱 下载原阁图3银杏达莫样品HPLC图谱 下载原图图4银杏达莫阴性对照(双嘧达莫)HPLC图谱 下载原图2. 2检测限以白果新酸测定检测限。

结果检测限(信噪比S/N=3):检出浓度为1.1X10 mg • m L，折算成银杏达莫注射液的最低检出量为2. 2 ng • m L2.3线性关系考察以白果新酸标准品的质量的对数值为横坐标，以峰面积的对数值为纵坐标，进 行回归分析回归方程分别为:Y=8 558. 8X+8. 585 4 (R=0. 999 8)线性范围 11.0〜88. Oug • m L，见表 1表1线性关系考察 下载原表2.4精密度试验直接取标准品溶液重复进样分析5次，记录色谱图测得G果新酸的峰而积的 RSD为0.89%，表明进样精密度很好，结果见表2表2精密度实验(n=5) 下载原表2.5稳定性试验直接取标准品溶液分别在0、2、4、8、12、24h记录峰面积表明溶液在24 h 内稳定，测得白果新酸的峰面积的RSD为1.09%，实验结果见表3表3稳定性实验 下载原表2.6重复性试验取08140920批样品,按1.2. 2项制备样液,分别平行6份，进样20 y L,结果 均未检出银杏酸2.7添加回收试验取5瓶10 m L装银杏达莫注射液，混匀，按表1所示量分别加入标准品，照样 品溶液制备项下方法操作，制成样品溶液将上述溶液在液相色谱仪上测定2 次，计算加样回收率，重复试验3次。

结果白果新酸回收率为103. 02%(RSD=0. 72%)见表 4表4回收实验结果(n=3) 卜载原表2.8样品含量测定取3批银杏达莫注射液样品，按1.2. 2项下制备样品溶液进样20 uL测定，采用 内标法，以白果新酸为标准品，计算总银杏酸的含量结果均未检测出银杏酸， 见图3结果表明，该批次银杏达莫注射液为检测出总银杏酸，符合其产品要求 质量标准3讨论木实验中釆用样液浓缩直接进样方法，减少了有机试剂的使用，操作更加方便、 有效，安全性更高但由于样品易起泡，因此在真空浓缩吋要加入少量的无水乙 醇，能有效地去泡银杏达莫注射液的质量标准规定每1 m L含总银杏酸不得超过10 ng以白果新 酸测定检测限，结果检测限(信噪比S/N=3):检出浓度为1. lX10mg*m L，折 算成银杏达莫注射液的最低检出量为2. 2 ng • m L,因此采用所建立HPLC法检 测银杏达莫注射液均未检测出银杏酸，表明样品中银杏酸符合质量要求，该方 法具有一定的可行性4结论所建立的以白果新酸为标准品测定总银杏酸的HPLC法具有较好的精密度和重现 性，可用于银杏达莫注射液中有害杂质银杏酸的质量控制，为银杏达莫注射液 现行质量标准的提高提供可靠的理论依据。

参考文献[1] 赵艳平.银杏叶提取物的药理研究状态综述[J].中国医药指南，2010，8 (3) :44.[2] 宾驰.银杏达莫注射液的药理作用及临床应用研究进展[J].中国药业杂志， 2010，19 (14) :81.[3] 韦丽华，李懿.银杏叶制剂的药理作用及。