菌种活化传代.docx

菌种活化与传代一、菌种活化下列步骤请在无菌环境下操作1、 把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼 脂斜面数支，移入接种室或净化工作台2、 先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇 擦洗消毒、稍干，用 75% 乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干点燃酒精灯， 将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌滴管吸取营养肉汤培养基，滴 在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂有些商品化的产品打开更方便）3、 取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取 1 支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许（无菌水也可），加至菌种管底部，将 冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤 内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行 培养 a ） 适用细菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基或无菌水，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮 b ） 适用霉菌、酵母菌用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以 无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置 30至60分钟。

4、 某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 较长，必须等培养二倍时间后才 能长出，且再经过一、二次继代培养才能正常生长经过以上的努力后仍培养失 败，才视为不能活化二、菌种传代1、 培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用标签上写上菌 名及接种日期至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡 后再移入接种室或超净工作台2、 点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒 后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通 过3次左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞， 拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔 上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁3、堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开 棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表 面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上 •4、取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种 棒在火焰上烧灼灭菌将已接种毕的细菌管培养22~24小时，霉菌管一般置霉菌 培养箱内培养7日。

取出后放人冰箱保存，一般2－3个月转种一次附一：菌种的培养与保存1、菌种活化:用无菌水溶解冻干粉菌液（一的操作），用无菌微量吸管滴入固态指定培养 基某一边缘附近，以划线法接种2、划线法简介：（1） 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断 来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养 基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖1/3培养基为止（I区）2） 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条 线到未接种的区域（II区）3） . 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区4） 灼烧接种环，将接种环归位附三培养温度1、大肠杆菌35~37°C培养48小时金黄色葡萄球菌30~35°C培养48小时 枯草芽抱杆菌30~35C培养48小时 白色念珠菌23~28C培养7天黑曲霉23~28C培养7天附四：接种图片(1)金属接种环塑醪握柄(2)平板划线法。