牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）.doc

GB ×××××—×××× 食品安全国家标准牛奶中氯前列醇残留量的测定液相色谱-串联质谱法National food safety standards-Determination of cloprostenol residues in milk — Liquid chromatography-tandem mass spectrometric method（征求意见稿）xxxx-xx-xx实施xxxx-xx-xx发布中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局中华人民共和国国家标准发布GB ×××××—××××前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则起草本标准系首次发布I GB ×××××—××××食品安全国家标准牛奶中氯前列醇残留量的测定 液相色谱-串联质谱法1　 范围本标准规定了牛奶中氯前列醇残留量检测的制样和液相色谱－串联质谱测定方法本标准适用于牛奶中氯前列醇残留量的检测。

2　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3　 原理试样中残留的氯前列醇，用乙腈提取，混合阴离子交换固相萃取柱净化，2%甲酸乙腈溶液洗脱，液相色谱-串联质谱负离子模式测定，外标法定量4　 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂；水为符合GB/T 6682规定的一级水4.1 试剂4.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯4.1.2 氨水（NH3·H2O）4.1.3 甲酸（CH2O2）4.1.4 无水硫酸钠（Na2SO4）4.1.5 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯4.2 标准品4.2.1 氯前列醇（Cloprostenol ，C22H29ClO6，CAS号40665-92-7）：含量≥98%4.3 溶液配制4.3.1 0.1%甲酸溶液：取甲酸1 mL，用水稀释至1000 mL，混匀4.3.2 5%氨水溶液：取氨水50 mL，用水稀释至1000 mL，混匀4.3.3 2%甲酸乙腈溶液：取甲酸20 mL，用乙腈稀释至1000 mL，混匀。

4.3.4 0.1mol/L乙酸铵溶液：称取乙酸铵7.70 g，用水溶解并稀释至1000 mL，混匀4.3.5 5m mol/L乙酸铵溶液：取0.1mol/L乙酸铵溶液50 mL，用水稀释至1000 mL，混匀4.3.6 乙腈乙酸铵溶液：取乙腈30 mL，加0.005 mol/L乙酸铵溶液至100 mL，混匀4.4 标准溶液制备4.4.1 标准储备液：取氯前列醇钠对照品约10 mg，精密称定，加乙腈适量使溶解并稀释定容至10 ml容量瓶，配制成浓度为1 mg /mL的氯前列醇标准储备液18℃以下保存，有效期3个月4.4.2 标准中间液：准确量取标准储备液0.1 mL，于10 ml容量瓶，用乙腈稀释至刻度，配制成浓度为10 µg/mL的标准中间液2℃~8℃保存，有效期1个月4.4.3 系列标准工作液：准确量取标准中间液适量，用乙酸铵乙腈稀释配制成浓度为5、10、20、50、100、500 ng/mL的系列标准工作溶液现配现用4.5 材料4.5.1 混合阴离子交换固相萃取柱：3 mL，60 mg，或其性能相当者4.5.2 滤膜：0.22 µm，有机相4.5.3 离心管：10 mL，50 mL。

5　 仪器和设备5.1 高效液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）5.2 分析天平：感量0.01 g 和0.000 01 g5.3涡旋混合器5.4 超声仪5.5 冷冻离心机5.6 氮吹仪5.7 固相萃取装置6　 试料的制备与保存6.1　 试料的制备取适量新鲜或解冻的空白或供试试样，并使均质——取均质的供试样品，作为供试试料——取均质的空白样品，作为空白试料——取均质的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料6.2　 试料的保存-18℃以下贮存7　 测定步骤7.1 提取取试料2g（准确至±0.05 g）于50 mL 离心管中，加乙腈5 mL，无水硫酸钠2 g，涡旋混匀，超声提取10 min，于4℃ 10000 r/min离心10 min，取上清液于10 mL离心管中，重复提取一次，合并两次上清液40℃氮气吹干，残余物用1 mL乙腈溶解，加0.1%甲酸水溶液3 mL，涡旋混匀，备用7.2 净化取混合阴离子交换固相萃取柱，用乙腈3 mL活化，水3 mL平衡取备用液，过柱，用5%氨水溶液3 mL淋洗，抽干，用2%甲酸乙腈溶液3 mL洗脱，收集洗脱液，40℃氮气吹干，残余物用1.0 mL乙腈乙酸铵溶液溶解，过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 基质匹配标准曲线的制备准确量取氯前列醇的标准工作液各1 mL，分别溶解经提取、净化及吹干后的空白试料残余物，滤膜过滤，配制成氯前列醇浓度为5、10、20、50、100、500 ng/mL的系列基质匹配标准溶液，供液相色谱-串联质谱测定，以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数7.4 测定 7.4.1 色谱条件参考条件a) 色谱柱：C18 柱长150 mm，内径2.1mm，粒径5 µm，或性能相当者；b) 流动相：A： 5m mol/L乙酸铵溶液；B：乙腈；c) 流速：0.3 mL/min；d) 进样量：5 µL；e) 柱温：30℃；f) 流动相梯度及洗脱程序见表1表1梯度洗脱程序时间minA: 5m mol/L 乙酸铵溶液%B: 乙腈%0.0090100.5090103.0010906.0010906.01901011.0090107.4.2质谱条件参考条件a) 离子源：电喷雾离子源，负离子模式；b) 检测方式：多反应监测（MRM）；c) 鞘气压力(GS1)：50 psi；d) 辅助气压力(GS2)：50 psi；e) 碰撞气压力(collision gas)：5 psi；f) 卷帘气压力（curtain gas）：30 psi；g) 负离子模式电喷雾电压(IS)：-4500 V；h) 雾化温度：500 ℃；i) 鞘气、辅助气、碰撞气均为高纯氮气。

喷雾电压、碰撞能等参数应优化至最优灵敏度；j) 监测离子参数情况见表2表2 氯前列醇特征离子参考质谱条件化合物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压, V碰撞能, eV氯前列醇423.1>126.8423.1>126.8-120-40423.1>189.3-347.4.3 测定法取试料溶液和基质匹配标准溶液，按7.4.1和7.4.2设定仪器条件操作，作单点或多点校准，外标法计算基质匹配标准溶液及试料溶液中目标药物的特征离子质量色谱峰峰面积均应在仪器检测的线性范围之内试料溶液中待测物质的保留时间与基质匹配标准工作液中待测物质的保留时间之比，偏差在±2.5%以内，且试料溶液中的离子相对丰度与基质匹配标准溶液中的离子相对丰度相比，符合表3的要求，则可判定为样品中存在对应的待测物质相关谱图参见附录A表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分率相对离子丰度>50>20~50>10~20≦10允许的相对偏差±20±25±30±507.5 空白试验取空白试料，除不加药物外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作8　 结果计算与表述试料中氯前列醇的残留量按标准曲线或式（1）计算························（1）式中：X——试料中氯前列醇的残留量，单位为微克每毫升（μg/kg）A——试料溶液中氯前列醇的峰面积；AS——基质匹配标准溶液中氯前列醇的峰面积；CS——基质匹配标准溶液中氯前列醇的浓度，单位为纳克每毫升（mg/L）；V——试料溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——供试试料的质量，单位为克（g）；注：计算结果需扣除空白值。

测定结果用两次平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字9检测方法的灵敏度、准确度、精密度9.1 灵敏度本方法检出限为1.5 μg/kg，定量限为5 μg/kg9.2 准确度本方法在5 µg/kg～500 µg/kg添加浓度的水平上其回收率为80%～120%9.3 精密度本方法的批内相对标准偏差≤15%，批间相对标准偏差≤15%附录A（资料性附录）色谱图图 A 氯前列醇标准溶液特征离子质量色谱图(423.1>126.8)（10 ng/mL)6。