马铃薯培养基.docx

马铃薯20g蔗糖2g自来水100mL琼脂2gpH自然（约6.0）灭菌 1.05kg/cm2，20min马铃薯处理方法:马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min （注意火力的控制，可适当补 水），用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁1000毫升磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克 葡萄糖20克维生素10毫克琼脂18克先配制20%马铃薯煮汁，方法同上在煮 汁中加入上述各种组分，加热溶解后补足水分，调整pH值到6分装，灭菌， 备用该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种马铃薯糖琼 脂培养基把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时 后，补足水分在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉 菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备 用把这培养基的pH值调到7.2〜7.4,配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养 放线菌和芽孢杆菌按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天 然成分配制的，称为天然培养基；应用化学药品配成并标明成分的，称为合成 培养基或综合培养基马铃薯培养基就是天然培养基，综合马铃薯培养基就是 人工合成的。

不同的生物需要不同培养基，注意配方的选取，称取要准确，误差不能太 大对于特殊物品，不能灭菌的要用过滤方法除菌配好后高温高压灭菌，可以在室温下放置很久，如果打开使用过一次，请 放置冰箱如果长时间不用，一定要重新配置，不能拿以前的用来培养，避免污染培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同但一般培养基 的程序主要可分为：配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8 个步骤一）配料按培养基处方准确称取各种成分，先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水，再加 入各种成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水冲洗瓶壁二）溶化将各种成分混匀于水中，最好以流通蒸气溶化半小时，如在电炉上溶化应 随时搅拌，如有琼脂成分时更应注意防止外溢溶化完毕，补足失去的水分三）矫正 pH1.pH 测定取与标准管同口径的试管（通常用华氏试管）3 支，于第 1、3 管各加入欲 测定pH的的培养基5ml，并于第一管中加入0.2g / L的酚红0.25mI作为测定 管，混匀；于第2管加入蒸馏水5ml，第4管为pH标准比色管2. pH 的校正若测定管过酸或过碱可用0.1mol / L氢氧化钠或0.1mol / L盐酸溶液矫正， 直至颜色与标准管相同为止，加碱或加酸时要精确缓慢，每加1滴后要充分混 匀，比色后再加第2滴（有时仅加半滴）准确记录加入的量。

3. 计算设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol / L氢氧化钠0.15ml，现有培养基 4990ml，需加氢氧化钠的量可按下列方法计算：5 : 4990 = 0.15 : XX = 0.15x4990/5 = 149.7 （ml）如将此0.1mol / L的氢氧化钠改用1mol / L的氢氧化钠时，则需14.9ml即 可四）过滤澄清培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现，需过滤成清晰透明后方可使用， 常用的过滤方法如下：1. 液体培养基液体培养基必须清晰，以便观察细菌的生长情况，常用滤纸过滤，亦可在 加热前加入用水稀释的鸡蛋白（1000ml培养基用1个鸡蛋白）在100°C加热后 保持60〜70C40〜60分钟，使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀，然后再 用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤2. 固体培养基如系琼脂培养基，于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过 滤；亦可用自然沉淀法，即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内，以高压（103.43kPa）蒸汽融化15分钟后，静置高压锅内过夜，次日将琼脂倾出，用刀 将底部沉渣切去，再融化即可收清晰的琼脂培养基五） 分装1. 根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。

分装的量不宜超 过容器的 2／3 以免灭菌时外溢2. 琼脂斜面分装量为试管容量的 1／5，灭菌后须趁热放置成斜面，斜面长 约为试管长的 2／3.3. 半固体培养基分装量约为试管长的1／3，灭菌后直立凝固待用4. 高层琼脂分装量约为试管的 1／3，灭菌后趁热直立，待冷后凝固待用5. 液体培养基分装于试管中，约是试管长度的 1／3.6•琼脂平板：将灭菌（或加热融化）后的培养基冷至50C左右，以无菌手 续倾人灭菌平皿内，内径9cm的平皿倾注培养基约13〜15ml，轻摇平皿底，使 培养基平铺于平皿底部，待凝固后即成，倾注培养基时，切勿将皿盖全部启 开，以免空气中尘埃及细菌落入新制成的平板培养基（简称平板），表面水分较多，不利于细菌的分离， 通常应将平皿倒扣搁置于37C培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用六） 灭菌不同成分、性质的培养基，可采用不同的灭菌方法高压蒸汽灭菌法：高 压灭菌的温度与时间随培养基的种类及数量的不同有所差别，一般培养基少量分装时高压（103.43kPa）灭菌15分钟即可，培养基分装量 较大时，可高压（103.43kPa）灭菌30分钟，含糖的培养基高压（55.16kPa）灭 菌 15 分钟。

以免糖类被破坏七）检定每批培养基制成后须经检定方可使用，检定时将培养基放37°C温箱内培养 24小时后，证明无菌，同时用已知菌种检查在此培养基上生长繁殖及生化反应 情况，符合要求者方可使用八）保存制好的培养基，不宜保存过久，以少量勤做为宜每批应注明名称，分装 量，制作日期等，放在4C冰箱内备用。