三氧化二砷抑制子宫内膜癌生长的体内和体外实验研究.pdf

河北医科大学 硕士学位论文 三氧化二砷抑制子宫内膜癌生长的体内和体外实验研究 姓名：胡美丽 申请学位级别：硕士 专业：妇产科学 指导教师：李利 20090301 中文摘要 三氧化二砷抑制子宫内 膜癌生长的体内和体外实验研究 摘要 目的：子宫内膜癌是三大妇科恶性肿瘤之一；晚期癌或 复发癌的预后很差，因此这部分病人的治疗是一个临床难 题，临床迫切需要作用强且副作用小的新型抗癌药物三氧 化二砷( A S 2 0 3 ) 是一种新型的抗癌药物，在临床上已经成 功用于治疗急性早幼粒细胞白血病( A P L ) 的治疗，且对某 些实体瘤体内和体外实验也证实其有良好的化疗效果，但 A S 2 0 3 对子宫内膜癌的作用国内外鲜为报道本研究通过体 内和体外实验探讨A S 2 0 3 对人子宫内膜癌H E C ．1 ．A 细胞生 长的抑制作用及作用机制，并全面评价其毒副作用，为临床 应用A S 2 0 3 治疗子宫内膜癌提供基础 方法： l 用四氮唑盐法( M T T 法) 检测细胞增殖活性，比较 A S 2 0 3 和黄体酮、安宫黄体酮、顺铂( C D D P ) 对H E C ．1 ．A 细胞的抑制作用。

2 应用流式细胞仪检测细胞周期 H E C ．1 - A 细胞经5 } t m o l ／LA S 2 0 3 作用4 8h 后，蛋白酶 消化，收集1 ×1 0 6 个细胞，应用流式细胞仪检测细胞的D N A 含量，分析细胞周期【4 】计算机程序拟合分析D N A 分布直方 图，以百分数表示各期细胞( G o ／G l 、S 、G 2 ／M ) 所占比率在 D N A 分布直方图的G o ／G 1 峰前出现一个亚峰，为细胞凋亡峰 3D N A 电泳检测细胞凋亡 中文摘要 H E C ．1 ．A 细胞经5 ，1 0g m o l ／LA S 2 0 3 作用4 8h 后，收 集5 ～1 0 x 1 0 6 个细胞，运用苯酚．氯仿．无水酒精方法提取 D N A t 5 1 ，1 ．2 ％琼脂胶电泳后，于紫外线下观察D N A 带，细 胞凋亡呈典型的梯状D N A 4 建立裸鼠荷人子宫内膜癌H E C ．1 ．A 细胞移植瘤动物 模型，随机分为实验组即A S 2 0 3 低( 4m g ·k g - 1 ．d _ 1 ) 、中( 6 m g ·k g - 1 ．d - 1 ) 、高( 8m g ·k g - I ' d 1 ) 剂量组、阳性对照顺铂 ( C D D P ) 组( 3m g ·k g - i ' d 一1 ) 及阴性对照生理盐水( N S ) 组，腹腔连续给药1 4d ，计算瘤体积和瘤重量抑制率，观察 用药前后裸鼠体重改变。

5 毒副作用分析：于停药后第2 日称体重，“摘眼球” 法处死裸鼠，收集血液用于血常规检测，血清用于肝肾功能 检测；检测肿瘤组织以及心、肝、脾、肺、肾和子宫的湿重， 各脏器制成蜡块用于病理检测 6 运用统计软件S P S S1 1 ．5 对数据进行统计分析 结果： l 体外实验结果显示：A S 2 0 3 和C D D P 浓度在1 “ - ' 2 0 l a m o l ／L 时可显著抑制细胞生长，且A S 2 0 3 C D D P A S 2 0 3 ( 5g m o l ／L ) 作用后导致细胞凋亡，S 和G 2 肭细胞周期阻滞 2 体内实验结果显示：低、中、高剂量A S 2 0 3 组矛I C D D P 组肿瘤体积抑制率分别为：5 0 ．9 7 ％、7 5 ．5 8 ％、5 6 ．9 2 ％、5 2 ．2 3 ％； 肿瘤重量抑制率分别为：1 0 ．1 5 ％、2 9 ．3 3 ％、1 6 ．6 7 ％、1 4 ．6 9 ％， 与生理盐水组比较差异均有显著性( 尸 O ．0 5 ) ， 提示治疗前各组肿瘤大小具有可比性用药1 4 天后各组的 平均瘤体积( 趸士s ) 依次为：( 7 3 7 ．4 1 + 5 2 ．18 ) m m 3 、 ( 6 2 1 ．1 9 + 7 5 ．7 7 ) m m 3 、( 7 2 7 ．7 4 + 8 9 ．1 0 ) m m 3 、( 7 2 2 ．4 1 + 6 8 ．1 7 ) m m 3 、( 9 4 4 ．5 1 + 7 4 ．4 7 ) m m 3 ( 如表1 ．1 ) ；用药后各组的平均 研究论文 肿瘤重量( 趸士s ) 依次为：( 1 ．4 7 士0 ．1 0 ) g 、( 1 ．1 6 士0 ．1 4 ) g 、 ( 1 ．3 7 士0 ．1 4 ) g 、( 1 ．4 0 - J ：0 ．1 2 ) g 、( 1 ．6 4 士O ．1 3 ) g ( 如表1 ．2 ) 。

各用药组与阴性对照组相比，差异有显著性( 尸 O ．0 5 ) ，C D D P 组的裸鼠体重明显下降，C D D P 组与A S 2 0 3 各组及阴性对照 组之间差异有显著性( 尸 O ．0 5 ) ，以上数据分析说明A S 2 0 3 对体重无明显影响，而C D D P 对裸鼠体重有明显的影响，可 造成裸鼠体重下降，出现恶病质表现 4 ．3 血常规检测结果( 如表3 所示) A S 2 0 3 各组中白细胞和血小板的总数降低，与阴性对照 组比较差异有显著性( P O ．0 5 ) ，对红细胞计数，H g b 及血 细胞比容影响不明显C D D P 组与阴性对照组比较，血常规 中除H 曲外，其他各项均有显著性改变( P O ．0 5 ) ，提示 C D D P 可降低血液中红细胞、白细胞、血小板总数和血细胞 比容的值A S 2 0 3 虽然降低了白细胞和血小板的总数，但与 C D D P 比较，差异也有显著性( P O ．0 5 ) ，说明A S 2 0 3 对肝肾功能无明显影响而C D D P 组 与阴性对照组比较( 尸 O ．0 5 ) ，无统计学意义，说明A S 2 0 3 对裸鼠脏器无明显影响。

研究论文 而C D D P 组裸鼠的心、肝、肾、脾与阴性对照组比较重量较 轻，差异有显著性( 尸 O ．0 5 ) ，说明C D D P 对裸鼠重要脏有 影响，但在光镜下观察各脏器切片未发现异常改变 5 异种移植瘤的细胞学观察：( 如图6 a ) 所示 镜下观察，呈低分化腺癌：癌细胞分化差，很少形成腺 样结构，多呈实体片状排列，核异型性明显，核分裂相多见 H E 染色光镜下观察各组裸鼠脏器均未发现明显瘤转移病 灶 6 免疫组化检测移植瘤细胞中P C N A 和p 2 7 蛋白表达 P C N A 表达情况：阴性对照组肿瘤细胞大部分为染色为 棕褐色，染色强度为强阳性( 图6 b ) ，中等剂量A S 2 0 3 组， 肿瘤细胞大部分为染色棕黄色或不着色，染色强度为阳性或 阴性( 图6 c ) ； p 2 7 表达情况：阴性对照组肿瘤细胞大部分不着色，强 度为明性( 图6 d ) ，中等剂量A S 2 0 ，组，肿瘤细胞大部分染 色为棕黄色，强度为阳性( 图6 e ) 结合表6 可以看出A S 2 0 3 作用后大部分的P C N A 的表达呈下降调节趋势，p 2 7 表达呈 上升调节，以中剂量组最为明显。

研究论文 附图 F i g ．1 a M e a s u r et h ev o l u m eo f t r a n s p l a n t e dt u m o r F i g ．1 b E y e v i e wo f t u m o r t i s s u e 蔫瀚尊，篡跫≮路 鬻蒸霭 研究论文 F i g ．1 e D i s s e c tn u d em o u s ea n dc o l l e c to r g a n s 研究论文 0151 02 0 C o n c e n t r a t i o n ( r t r n o t 凡) F i g ．2 T h ee f f e c t so fd i f f e r e n t a g e n t s o nH E C 一1 一Ac e l l p r o l i f e r a t i o n ．P r o g e s t e r o n e , M P A ，C D D P ．a n dA S 2 0 3 ( 14 - ' 2 0I r t m 0 1 ／L ) w e r ea d d e dt oH E C —l —Ac e l l sa n d i n c u b a t e df o r4 8h 2 8 加 ∞ ∞ ∞ ∞ 一摹一一2菪o。

o每-o o∞g口Q3JQ山 研究论文 卜 ^ 、 一L —● ， H L 山卜—一 ∞ c o m I ‘A _ 1 0 ( 5p 啪儿) 嗣 童J ．蛋| T r e a t m e n tg r o u p M01 0 - - 3 a3 b F i g ．3 T h em e c h a n i s mo f A S 2 0 3 a ．A S 2 0 3 ( 5g m o l ／L ) w a sa d d e dt oH E C ．1 ．Ac e l l sa n d i n c u b a t e df o r4 8h r ．T h ec e l l c y c l e p r o g r e s s w a s m e a s u r e db yf l o wc y t o m e t r y 卜P O ．0 5 ) b ． A S 2 0 3 ( 0 ～1 0p m o I ／L ) w e r ea d d e dt oc e l l sa n d a p o p t o s i sw a sm e a s u r e db yD N Af i ' a g m e n t a t i o na s s a y ． r M ：m a r k e r ) 直 Ⅺ∞∞∞“ 0 F i g ．4 a 研究论文 一t u m o rw e i g h t i n h i b i t i o n r a t e 囹t u m o rv o l u m ei n h i b i t i o nr a t e 8 0 ．O O ％ 7 0 ．0 0 ％ 6 0 ．0 0 ％ 5 0 ．O O ％ 4 0 ．O O ％ 3 0 ．0 0 ％ 2 0 ．O O ％ 1 0 ．O O ％ 0 ．O O ％ g r o u pAL A l O 4 m g ·k g - 1 ·d —- g r o t i pB “、T O 6 m g ·k g 一1 ·d — g r ( ，u pL ( A T 0 8 m g ·k g 一1 ·d 一 1 ) 讧e a t m e n tg r o u p s g r o u pDt ( ，D D P 3 m g ·k g 一1 ·d - I n h i b i t o r ya c t i o no ft h et r a n s p l a n t e dt u m o rv o l u m e a n dw e i g h to fn u d em i c eb yd i f f e r e n td o s e so f A S 2 0 3 a n dC D D E ( ·C o m p a r e dw i t ht h en e g a t i v ec o n t r o lg r o u p ，P O ．0 5 ， A C o m p a r e dw i t ho t h e rg r o u p s ，P O ．0 5 ) 3 0 ^ 弓∞p ：B H 5墨H丑H{H 1 0 0 0 9 0 0 8 0 0 7 0 0 6 0 0 5 0 0 4 0 0 3 0 0 2 0 0 1 0 0 O 研究论文 g r o u p A g r o u p B g r o u p C g r o u p D F i g ．4 b T h ei n h i。