天津商业大学《生理药理学》实验讲义.docx

生理药理学》实验指导课程编号：0741535048实验一 水杨酸钠血浆半衰期的测定一、 实验目的 了解分光光度法测定水杨酸钠的血药浓度和计算半衰期的方法二、 实验内容 家兔静脉采血、静脉注射、离心、光电比色等三、 实验要求 集中授课形式四、 实验准备 预习药物代谢动力学，药动学参数的概念、意义、计算方法等理论知识五、 实验原理、方法和手段在酸性条件下，水杨酸钠解离为水杨酸，后者与三氯化铁生成一种紫色络合物，该络合物在 520nm 波长处，其光密度与水杨酸的浓度成正比采用光电比色法，计算血药浓度，进一步计算药物的半衰期六、 实验条件1. 动物家兔，2〜3kg，雌雄均可2. 药品 10% 及 0.02% 水杨酸钠( sodium salicylic)， 10% 三氯化铁， 10% 三氯醋酸 (trichloroacetic acid), 0.5% 肝素(heparin),蒸馏水3.器材 试管架、试管、离心管、吸管(10mL、2mL、ImL 0.5mL)、注射器(2mL、5mL)、针 头、吸耳球、分光光度计、离心机、计算器等七、 实验步骤1、 取4支离心试管，编号后各加入10%三氯醋酸5mL。

2、 取家兔一只，称体重，使其耳部充血后，用经0.5% 肝素湿润过的注射器由耳缘静脉缓慢抽血2.5mL，分别置于1号管和2号管内各1 mL,余血弃掉，将试管摇匀静置3、 由耳缘静脉缓慢注射10%水杨酸钠1.5 mL/kg， (150mg/kg)，给药后5min和35min，各 采血1mL，分别置于3号管和4号管内，摇匀静置4、 1，3，4号管内各加入蒸馏水1mL，2号管内加入0.02%水杨酸钠1mL5、 将4支离心管置于离心机内，以1500〜3000rpm，离心5min,使血浆蛋白沉淀6、 另取相应编号的试管4支，将离心后的上清液倒入相应编号的试管中，从中准确吸取3mL 分别置入相应编号的另外4支试管中，每管再加入10%三氯化铁溶液0.5mL，摇匀显色7、 以1号管为对照管，用724分光光度计在波长520nm处测定其余3管的光密度值，由2 号管的光密度值(Y2)和浓度(X2)求比值K,即K=X/Y (恒定)再根据X=KY，由丫3和丫4求得X3和X4,即药后5min和35min时的血药浓度，根据下列公式求出半衰期（t ） 3 4 0.301t1/2(lgX3-lgX4)/△t注：式中X3和X4分别为给药后5min和35min时的血药浓度，△t为两次取血的间隔时间 （30 min）。

结果与处理：将实验结果列入表3中，根据实验结果计算半衰期表 3 水杨酸钠血药浓度测定步骤与结果记录试管10% 三氯血/mL蒸馏水0.02% 水 杨10%三氯光密度K值C（编号）醋酸/mL/mL酸钠/mL化铁/mL(Y)(X/Y)/ A g・mL-11 （对照）5.01.01.0-0.52（标准）5.01.0-1.00.53（药后）5.01.01.0-0.54 （药后）5.01.01.0-0.5八、思考题1、 测定药物的t〃2有何临床意义？2、 什么情况下药物的t1/2会延长？九、实验报告1、 预习报告 要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处 理方法、实验注意事项等2、 实验记录 所测各管的光密度值3、 实验报告 写明实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处理 方法等重点是对数据的处理，结合思考题分析实验结果十、注意事项1、 本实验属分析性的，操作必须准确，取血间隔的时间厶要根据各实验者操作的准确时间 而定2、 取血时可采用多种取血方式，如心脏取血、动物取血等，取血用的注射器在取血前要用 0.5%肝素润洗，以防血凝实验二 药物对离体肠管平滑肌的作用一、实验目的1. 学习离体平滑肌器官的实验方法。

2. 观察乙酰胆碱、阿托品、组织胺、扑尔敏和某药等药物对离体回肠平滑肌的作用，并分析 其作用原理二、实验内容 熟悉离体器官实验的方法，观察肠平滑肌收缩曲线的记录方法多种药物对离 体肠管活动的影响三、实验要求 集中授课形式四、实验准备 传出神经系统药物的分类、药理作用、作用机制，肠平滑肌省分布的受体、兴 奋后产生的效应五、实验原理、方法和手段消化道平滑肌除具有肌肉的共性外，尚具有不同于心肌和骨骼肌的特性，主要表现在其自动 节律性缓慢而不规则，伸展性较大，兴奋性较低，具有一定的紧张性，对电刺激和切割不敏感， 而对温度变化、牵拉、酸碱、乙酰胆碱等理化因素敏感等本实验观察 M 胆碱受体激动药和阻断药、组胺受体激动药和阻断药以及某药对小肠平滑肌的 作用，并理解和分析药物的作用机制六、实验条件1. 动物：家兔，2〜3kg，雌雄均可2. 器材： BL-420F 生物信号采集处理系统、计算机、打印机、恒温循环水浴各1 台，麦氏浴 管、张力换能器、气袋、通气钩、铁支架、止水夹各1个，1ml注射器5个，培养皿、250ml烧 杯、100ml烧杯、搪瓷盘、塑料碗各1个，十字夹1套，普通剪刀、组织剪、眼科剪、止血钳各1 把，丝线、打印纸若干。

3. 药品：台氏液、 0.1%氯化乙酰胆碱溶液、 0.05%硫酸阿托品溶液、 1%磷酸组织胺溶液、 0.1% 扑尔敏溶液、 1%某药溶液七、实验步骤1. 标本制备：取家兔一只，置于手中倒悬，以木槌击头至死，立即打开腹腔，找到回盲部， 在离其 2〜3cm 的回肠处剪断，取出回肠，置于盛有台氏液的培养皿中，沿肠壁分离并剪去肠系 膜，将肠管剪成数段，轻轻冲出肠内容物，最后将肠管剪成2〜3 cm的小段备用2. 冲洗浴管，并在其中加入台氏液30ml (标线处)，打开恒温水浴，设定温度为37.5，并 打开循环开关3. 取上述备用回肠一段，两端用丝线结扎并用挂钩挂住，一端挂在通气钩上，放入浴槽，另 一端连于张力换能器通气钩另一端与气袋相连，缓慢通入气泡，并调节1〜2个气泡/秒4. 打开计算机，进入BL-420F生物信号采集系统，选择通道1 -张力”，实验项目下的“药 理实验”，“药物对离体肠平滑肌的作用”调整肠管的张力，使之适度5. 观察项目：待肠管在浴管内稳定10 min左右，记录一段正常活动曲线，然后用注射器依次 向浴槽中滴加药液每加一个药后立即标记，并观察、记录肠管的收缩幅度待药物的作用明显 及肠管的活动平稳后加入下一个药物。

第一组药物：(1) 0.1%氯化乙酰胆碱溶液 0.2ml；(2) 0.1%硫酸阿托品溶液0.2ml；(3) 重复给(1) 用台氏液冲洗1〜2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第二组药物第二组药物：(4) 1%磷酸组织胺溶液0.3ml,作用明显时加入(5)；(5)0.1%扑尔敏溶液 0.3ml；(6)重复给(4)用台氏液冲洗1〜2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后 加入第三组药物第三组药物：(7) 1%某药溶液1ml；( 8) 0.1%硫酸阿托品溶液 0.2ml；(9) 重复给(7) 用台氏液冲洗1〜2遍，加入新鲜台氏液，待肠管活动稳定后，记录一段正常收缩曲线，然后加入第四组药物第四组药物：(10) 1%某药溶液 1ml；( 11) 0.1%扑尔敏溶液 0.2ml；( 12 )重复给( 10 )6. 切断电源，取出回肠，冲洗浴槽，整理实验台其他物品八、思考题1. 乙酰胆碱和阿托品对小肠平滑肌的作用及其作用机制？2. 组胺和扑尔敏对小肠平滑肌的作用及其作用机制？3. 阿托品和扑尔敏对某药的作用有什么影响？为什么？九、实验报告1、预习报告 要明确实验目的、实验原理、实验材料、实验步骤、实验观察指标及数据处 理方法、实验注意事项等。

2、 实验记录3、 实验报告 整理实验结果，剪接描记曲线并打印结合思考题对实验结果进行分析十、注意事项1. 冲洗和分离肠管时动作应轻柔，尽量避免牵拉肠管；标本制备好后，放在盛有台氏液的培 养皿中保存，以免影响标本的反应性肠管两端穿线时，切勿将肠管缝死，只需穿过一层肠壁2. 实验前后应将浴槽彻底清洗，以免残留药物影响实验结果3. 台氏液必须新鲜配置，温度保持在37°C〜38°C4. 通气时使气泡呈小米粒大小均匀上升，水泡不宜过大5. 调节连线松紧度，并且线应垂直桌面6. 加药时不要把药液直接加到回肠上，以免影响结果7. 浴温和肠肌的张力均可影响实验结果，应注意调节实验三 热板法观察药物的镇痛作用一、 实验目的 用热板法观察某药的镇痛作用，并学习镇痛药物的筛选方法二、 实验内容 小鼠捉拿、固定、分组及腹腔着注射方法，热板测痛仪的使用三、实验要求 集中授课形式四、实验准备 镇痛药的作用、作用机制、临床应用、不良反应及使用注意五、实验原理、方法和手段将小鼠置于恒温的热金属板上，热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后足），记录小鼠从放于热 板上至出现疼痛反应即舔后足的时间（痛阈值），比较用药组与对照组小鼠痛阈值的差异，判定药 物有无镇痛作用。

六、实验条件1动物 小鼠（18〜22g）,雌性2 药品 某药，生理盐水，某药3 器材 热板测痛仪，天平，注射器（ 1ml 2 支），大镊子七、实验步骤1调整仪器①接通电源，按动“升温”按钮，将温度设定为55°C②测痛记时：按动“T” 按钮，计时开始，再次按动“T”按钮，计时停止，并锁定数据再次按动“T”按钮又从零开始 计时，周而复始2 小鼠筛选及正常痛阈值的测定 取小鼠数只，依次放在热板上，密切观察，记录痛阈值 凡在30s内不舔后足或逃避者皆弃之不用，将合格的小鼠随机分成两组，列入表内3给药及药后痛阈值的测定第一组小鼠腹腔注射某药（0.1ml/10g）,第二组小鼠腹腔注射 同容量的生理盐水作对照给药后30min、45min各测痛阈值一次（如60s内无反应，应将小鼠 取出，以免把脚烫伤，痛阈值按60s计算）将两次测得的平均值作为药后痛阈值（即观察值X） 进行 t 检验4 t检验显著性检验中，两组均数的显著性检验最常用的是t检验一般分三步： 第一步：检验假设，比较两组均数的差异有无显著性时，首先假设差异是不显著的，即两组 平均数无本质区别，差异可能是由抽样误差引起的，这样假设在统计学上称为“无效假设”。

第二步：计算t值，进而求得概率（P值）公式： 丁 =工X nX — X t — 1 2~SX1—X2SX1—X2n + n~I 2nn1 2Sc2V （工 X ）2 V （工 X ）2[乙 X 2 - 1 ] + [V X 2 - 2 ] 1 n 2 n 1 2 n + n — 212式中，X ：均数；两组均数的标准误；X1—XSc2：两组均数的标准差；n：例数;工:总和；第三步：判断结果，查“t值表”，t值越大P值越小，但t值的大小又与自由度有关两样本 自由度（n） n,=nl+n2—2八、思考题1. 镇痛药、解热镇痛药在镇痛作用、镇痛作用原理及临床应用等方面有何不同？2. 影响本实。