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HE染色protocol石蜡包埋的组织切片必须通过脱蜡水洗处理才能染色，让水溶性染料渗入组织中，含蜡的组织切片无法进行任何染色因此，在染色前必须用二甲苯或替换剂进行完全脱蜡，通过乙醇洗后，再用水洗即石蜡组织切片→二甲苯→乙醇（无水乙醇，95%，80%）→水人们通常把那个过程叫做切片脱蜡至水脱蜡至水是染色前的必须完成的差不多步骤一样脱蜡至水的时刻和步骤如下：HE染色脱蜡至水步骤步骤顺序试剂时刻1二甲苯Ⅰ脱蜡5 min2二甲苯Ⅱ脱蜡5 min3二甲苯Ⅲ脱蜡5 min 4无水乙醇浸洗1 min595%乙醇Ⅰ浸洗1 min695%乙醇Ⅱ浸洗1 min780%乙醇浸洗1 min8自来水冲洗3-5 min冰冻切片和细胞涂片样品的染色不需要通过脱蜡至水步骤，水洗后直截了当用苏木精和伊红染色染色是利用染料的不同作用，使组织与染料以不同方式进行结合常规染色是苏木精和伊红染色（H.E）专门染色（special stains）和组织化学（免役组织化学）染色是依照诊断的需要对组织中的某些成分进行专门规的染色HE染色用的苏木精是一种树木苏木的一种氧化产品，因为这种树专门罕见，多数氧化苏木精是合成品苏木精必须氧化成熟后才能使用。

苏木精染液需要预先配制，放置几个月自然氧化成熟或购买成熟过的商品苏木精，也可在苏木精液中加一些成熟剂苏木精本身对组织没有染色作用，需要“媒染剂”与组织连接，媒染剂是铁，铝，钨等由这类正离子金属提供矾也是苏木精常用的媒染剂，如Harris苏木精的配制以硫酸铝钾（钾明矾）或铵明矾作为媒染剂不同媒染剂配制的苏木精染色强度不同苏木精作为一种基础染料对细胞核的核酸具有一定的亲和力苏木精不是“退行性”确实是“进行性”染色，退行性染色是把切片在染液内留一段时刻，然后从染液里出来用盐酸乙醇分化，去除过染的一部分这种方法最适合大批量的染色进行性染色切片在染液中染到自己想要得染色强度如冰冻染色冰冻染色比较简单，但染色质量不如成批处理的好伊红是一种酸性染料，和细胞的胞浆成分具有亲合力有各种合成的伊红可共使用，它们的颜色各异，但作用都一样在实验室中伊红比苏木精更稳固，伊红专门少发生染色问题唯独能够见到的问题是过染（overstaining），专门是脱钙组织苏木精液配制Harris苏木精液苏木精1g无水酒精10ml硫酸铝钾或硫酸铝铵20g蒸馏水200ml先将苏木精溶于酒精，再将矾放进蒸馏水中，把苏木精液与矾液混合后，电炉加热溶解，待到煮沸后离开电炉，稍候片刻慢慢加入氧化汞0.5g。

然后使液体迅速冷却，过滤后使用，使用前每100ml苏木精加入冰醋酸4ml或改良明矾苏木精液A液苏木精2g95或100%乙醇20ml加热溶解B液硫酸铝钾16g加热溶解后加入蒸馏水300ml冷却后加入A液，然后加入碘酸钠（准确称量）200mg搅拌三次，每次5分钟，30分钟后加冰醋酸10ml即可使用新配制的苏木精染色时刻2分钟注意事项：1． 切片脱蜡至水后先用蒸馏水洗再入苏木精染色2． 使用一周后苏木精会变蓝一些，这时可往液苏木精液中加2-10ml冰醋酸，过滤后使用Mayer苏木精明矾液10%苏木精乙醇掖10ml碘化钠0.2g钾明矾或铵矾50g水合氯醛50g枸橼酸1g蒸馏水1000ml用蒸馏水溶解固体然后加入苏木精液伊红水溶液配制伊红水溶液伊红Y0.5g蒸馏水100ml先用少量蒸馏水溶解伊红，再用玻璃棒搅拌溶解，完全溶解后加入剩余的蒸馏水苏木精染色后分化需要的液体盐酸乙醇液配制盐酸乙醇液75%乙醇0100ml浓盐酸0.5ml苏木精染色后蓝化需要的液体目的（PURPOSE）To be used for bluing the hematoxylin stain, follows the decoloration, acid rinse, in regressive staining..蓝化液（BLUING SOLUTIONS）1Scott’s TapWater/Bluing硫酸镁（MgSO4）30g碳酸氢钠2g自来水3000ml充分混合，标记 液体日期。

举荐用于Gill’s Ⅲ苏木精蓝化20.05%碳酸锂碳酸锂0.5g蒸馏水1000ml充分混合，标记 液体日期3氨水氢氧化铵5ml蒸馏水1000ml充分混合，标记 液体日期对事先冻存过的组织会引起脱片水蓝化自来水流水冲洗10-30min手工H E染色方法和步骤石蜡切片必须通过脱蜡至水 冰冻切片先通过电吹风吹干，再用冰冻固定液短时刻固定，不用通过脱蜡至水直截了当用自来水冲洗后进行染色染色步骤参考表染色步骤1组织切片脱蜡至水2Harris苏木精液3～5 min3自来水洗1 min475%盐酸乙醇液分化数秒钟5自来水流水冲洗10min至细胞核呈蓝色，也能够使用蓝化液返蓝60.5%伊红水溶液1 min795%乙醇Ⅰ脱水1 min895%乙醇Ⅱ脱水1 min9无水乙醇Ⅰ脱水1 min10无水乙醇Ⅱ脱水1 min11二甲苯Ⅰ透亮1 min12二甲苯Ⅱ透亮1 min13中性树胶或DPX封固结果细胞核蓝色，细胞浆红色，背景粉红色自动染色机染色方法和步骤Shandon Varislain Gemini自动染色机使用方法1. Shandon Varislain Gemini自动染色机 染色机有26个试剂槽，6个冲洗水位，5个干燥储存位，附载玻片框、水洗管、碳过滤器等。

能够编制多个染色程序，依照染色机操作菜单编制常用的染色程序，所有预备工作完成后运行染色程序2. 预备常用的染液和试剂① 二甲苯② 75%乙醇③ 95%乙醇④ 无水乙醇⑤ Mayers苏木精⑥ 0.5%伊红水溶液⑦ 1%盐酸乙醇3. 编制常规HE染色程序HE染色程序参考表项目试剂时刻脱蜡二甲苯Ⅰ10 min二甲苯Ⅱ10 min乙醇洗涤无水乙醇Ⅰ2 min无水乙醇Ⅱ2 min95%乙醇1 min75%乙醇1 min流水冲洗（搅拌）1 min苏木精染色Mayer苏木精10 min流水冲洗1 min分化1%盐酸乙醇10 s流水冲洗（搅拌）20min伊红染色0.5%伊红水溶液1min流水冲洗(搅拌)1min脱水95%乙醇Ⅰ30 s95%乙醇Ⅱ30 s无水乙醇Ⅰ2 min无水乙醇Ⅱ2 min透亮二甲苯Ⅰ2 min二甲苯Ⅱ2 min使用说明① 并依照显示器上的提示在相应试剂槽中加入需要的染液和试剂, 每种约300ml② 石蜡切片80℃烤片，20分钟将切片放入装载玻片框里置染色机中选择染色程序③ 染色机能够显示染色程序的运行情形，要紧信息包括染色开始时刻和染色终止时刻及染色运行状况等，假如染色程序显现错误，能够随时终止运行。

④ 染色质量的操纵，据中国医科大学使用情形统计，300ml苏木精染色1500-1800张；300ml伊红水溶液染色2500-2800张；300ml其他试剂约处理800-1000张需要更换新液以便保证染色质量⑤ 温度低于15℃染色成效不佳应该调整室温⑥ 因为染色用的试剂多为易燃品，染色机应远离火源⑦ 进水孔要保持通常，需要定时进行清洗定时更换碳过滤器⑧ 染色完成后机器会发出提示声音⑨ 片按常规中性树胶封片4. 细胞学涂片HE染色程序细胞学涂片HE染色程序参考表项目试剂时刻固定95%乙醇10 min流水冲洗（搅拌）1 min苏木精染色Mayer苏木精10 min流水冲洗1 min分化1%盐酸乙醇10 s流水冲洗（搅拌）20min伊红染色0.5%伊红水溶液1min流水冲洗(搅拌)1min脱水95%乙醇Ⅰ30 s95%乙醇Ⅱ30 s无水乙醇Ⅰ2 min无水乙醇Ⅱ2 min透亮二甲苯Ⅰ2 min二甲苯Ⅱ2 min使用说明① 染色完成后机器会发出提示声音② 取出切片按常规中性树胶封片二 封片切片染色后必须先通过80%、95%和无水系列乙醇脱水，然后通过透亮剂透亮透亮完成后在有组织的地点加上中性树胶或DPX，然后用清洁后盖玻片覆盖在组织上。

人们通常把那个过程叫做封片从市场上购买的盖玻片一样没有通过清洗，须要清洗处理后才能使用依照组织的大小选用盖玻片规格参考下表规格包装厚度18*18mm100片/合10合/包600合/箱0.13-0.17mm20*20mm100片/合10合/包600合/箱0.13-0.17mm22*22mm100片/合10合/包600合/箱0.13-0.17mm24*24mm100片/合10合/包600合/箱0.13-0.17mm24*32mm100片/合10合/包400合/箱0.13-0.17mm24*50mm100片/合10合/包400合/箱0.13-0.17mm盖玻片清洗处理的方法和步骤玻璃器皿清洁液配制 用途：要紧用于玻璃器皿的清洁设备：4000ml长颈瓶，磁棒，磁力搅拌器6～7升盖着玻璃容器（瓷罐）试剂：酸清洁液：重络酸钾400g，蒸馏水4000ml，硫酸400ml用水溶解重络酸钾，把重络酸钾液倒入瓷罐中，慢慢加入硫酸使液体变为棕黑色，按照使用，标明开始使用日期注意：酸有腐蚀性，致癌剂安全措施：戴胶手套，防护眼镜，穿工作服把硫酸慢慢加到液体里，在通风好的地点操作硫酸：烟雾吸入会有害，阻碍器官皮肤，呼吸器官，生殖系统和胎儿组织。

刺激皮肤眼睛和呼吸道使用硫酸时操作应专门注意，硫要慢慢地加入液体里盖玻片清洗步骤1． 拆开盖玻片的包装将盖玻片浸泡于清洁液中4小时2． 将清洁液回收到玻璃容器中，用自来水充分冲洗盖玻片，直到没有颜色为止3． 用蒸馏水洗5-10次晾干或放于烤箱中烤干备用盐酸酸玻璃器皿漂洗液：蒸馏水985ml，盐酸15ml，混合好，标签注明注意：酸，有腐蚀性安全措施：戴胶手套，防护眼镜，穿工作服把酸加到水中，在通风好的地点操作盐酸：强烈刺激皮肤，眼睛和呼吸道通过吸取阻碍目标器官皮肤，呼吸道，生殖和胎儿系统有腐蚀性清洗步骤：1． 倒入玻璃器皿，放置2～5min。