子宫内膜癌中miR-34、MDM2、EPAS1的表达及与临床特征的相关性研究.docx

子宫内膜癌中miR-34、MDM2、EPAS1的表达及与临床特征的相关性研究子宫内膜癌是一种临床常见的发生于子宫内膜上皮组织的生殖系统恶性肿瘤，具有高发病率、高病死率等特点[1,2,3]据不完全统计，我国每年新增子宫内膜癌病例约30万，子宫内膜癌患者病死率在所有妇科恶性肿瘤中位居前三位，仅次于宫颈癌、卵巢癌近年来，我国子宫内膜癌发病率逐渐上升，已经跃居所有女性生殖系统恶性肿瘤第二位，仅次于宫颈癌[4,5]子宫内膜癌发病早期无明显临床症状，早期诊断率相对较低[6]，导致大多数子宫内膜癌患者确诊时病情已发展至晚期，对患者的身体健康甚至生命安全造成严重威胁，因此对子宫内膜癌进行及时的诊断，提升早期诊断率对子宫内膜癌的临床治疗以及改善患者预后有重要意义[7,8]本研究收集子宫内膜癌切除标本，对微小RNA-34(miR-34)、鼠双微基因2(MDM2)、内皮PAS1蛋白(EPAS1)的表达进行检测，旨在探究miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌中的表达及与临床特征的相关性1、资料与方法1.1临床资料选取2018年3月—2019年3月于我院接受手术治疗的子宫内膜癌患者50例，年龄45～65(56.1±8.2)岁;病理分期:Ⅰ期12例，Ⅱ期13例，Ⅲ期11例，Ⅳ期14例。

排除标准:病历资料不全者;接受过放、化疗治疗者;并发其他恶性肿瘤者;心、肾、肝等器官功能不全者1.2方法1.2.1标本制作:所有患者均接受手术对子宫内膜癌组织进行切除自所有患者手术切除标本中取癌组织标本以及距离癌组织5cm以上的癌旁组织，使用4%中性福尔马林对所采集的标本进行固定，并进行常规石蜡包埋，厚度为3μm，连续切片作免疫组化标记1.2.2指标检测:取待测标本，使用Westernblot法检测miR-34、MDM2、EPAS1相对表达量1.2.3免疫组化染色:对待测标本进行脱蜡、水化等处理之后，将其在0.01mol/L、95℃的枸橼酸缓冲液中浸泡，并进行热修复，并在3%的H2O2的环境下进行培育，10min后滴入山羊血清进行封闭，在25～27℃的环境下孵育0.5h，之后将封闭液抽离，加入一抗，将其置于5℃的环境中过夜培养，次日加入二抗，并在恒温箱中培养0.5h(恒温箱温度37℃)，使用PBS淋液冲洗后进行DAB显色、脱水、封片处理1.3统计学方法采用SPSS21.0统计软件进行分析处理计量资料以均数±标准差(±s)表示，多组间比较采用方差分析，两组间比较采用独立样本t检验;计数资料以率(%)表示，采用χ2检验。

α=0.05为检验水准2、结果2.1miR-34、MDM2、EPAS1在癌组织、癌旁组织中的表达情况子宫内膜癌癌组织中miR-34表达水平显著低于癌旁组织，MDM2和EPAS1表达水平高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)见表1、图1表1miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌癌组织、癌旁组织中的表达水平比较图1miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌及癌旁组织中的表达情况(DAB×200)miR-34为微小RNA-34,MDM2为鼠双微基因2,EPAS1为内皮PAS1蛋白2.2miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者肿瘤体积的关系肿瘤体积≥5cm3患者miR-34表达水平显著低于肿瘤体积<5cm3者，MDM2和EPAS1表达水平高于肿瘤体积<5cm3者，差异有统计学意义(P<0.01)表2miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者肿瘤体积的关系2.3miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者病理分期的关系病理分期为Ⅲ～Ⅳ期的患者miR-34表达水平低于病理分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于病理分期为Ⅰ～Ⅱ期患者，差异有统计学意义(P<0.01)。

见表3表3miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者病理分期的关系2.4miR-34、MDM2、EPAS1表达与子宫内膜癌患者淋巴结转移情况的关系有淋巴结转移的患者miR-34表达水平低于无淋巴结转移的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于无淋巴结转移的患者，差异有统计学意义(P<0.01)表4miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者淋巴结转移情况的关系2.5miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者浸润程度的关系浸润程度>1/2肌层的患者miR-34表达水平低于浸润程度≤1/2肌层的患者，MDM2和EPAS1表达水平高于浸润程度≤1/2肌层的患者，差异具有统计学意义(P<0.01)表5miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者浸润程度的关系2.6miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者分化程度的关系低分化患者miR-34表达低于中分化、高分化患者，且中分化患者miR-34表达水平低于高分化患者，差异均有统计学意义(P<0.01);低分化患者MDM2和EPAS1表达水平高于中分化、高分化患者，且中分化患者MDM2和EPAS1表达水平高于高分化患者，差异均有统计学意义(P<0.01)。

见表6表6miR-34、MDM2、EPAS1表达水平与子宫内膜癌患者分化程度的关系3、讨论目前为止，临床医学尚未将子宫内膜癌的发病机制研究透彻，越来越多的专家学者开始致力于此研究近年来，有学者通过分子生物学、基础医学等途径对子宫内膜癌发病机制进行研究[9,10]miRNA在大多数生物中大量存在，大量实验研究表明，miRNA与机体组织细胞分化、凋亡、神经元发育、脂肪代谢等生理过程密切相关，尤其是肿瘤组织的发生发展与miRNA之间存在密切联系[11,12]miR-34作为miRNA家族的重要成员，是一种重要的抑癌基因，与癌组织的发生发展密切相关[13,14]有学者在研究中表示，miR-34被激活后，能够阻滞细胞周期分布，从而起到诱导癌组织细胞凋亡、抑制癌组织生长的作用[15]还有学者在研究中表示，miR-34在肺癌、膀胱癌、胃癌等恶性肿瘤中均呈现异常表达，但是关于miR-34与子宫内膜癌发生发展相关性的研究还相对较少[16]本研究结果显示，与癌旁组织比较，子宫内膜癌癌组织中miR-34表达相对较低，提示miR-34在子宫内膜癌癌组织中呈现异常低表达，并推测miR-34的异常表达与子宫内膜癌的发生发展具有一定的关联。

本研究结果还显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者miR-34表达水平较低，提示miR-34表达的变化与子宫内膜癌患者肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度以及分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与子宫内膜癌的发生发展MDM2是一种新的进化保守基因，属于原癌基因，在多种恶性肿瘤中均呈现异常表达[17,18]有学者在研究中表示，MDM2的异常高表达能够调控细胞周期分布及细胞凋亡能力，使细胞出现过度增殖、分化情况，从而参与恶性肿瘤的发生发展[19]本研究结果显示，相比癌旁组织，子宫内膜癌癌组织中MDM2表达相对较高，提示MDM2在子宫内膜癌癌组织中呈现异常高表达本研究中还对不同临床病理特征子宫内膜癌中MDM2表达进行对比，结果显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者MDM2表达较高，提示MDM2的异常高表达与子宫内膜癌患者临床病理特征密切相关，在子宫内膜癌的发生发展过程中发挥重要作用目前关于EPAS1表达变化与恶性肿瘤发生发展之间相关的研究还相对较少[20,21]有学者在研究中表示，机体正常组织中EPAS1的表达较低甚至无表达，但是在恶性肿瘤组织中其呈现异常高表达，参与癌细胞的一系列生物学行为[22]。

本研究结果显示，相比癌旁组织，子宫内膜癌癌组织中EPAS1表达相对较高，提示EPAS1在子宫内膜癌癌组织中呈现异常高表达本研究还对不同临床病理特征子宫内膜癌中EPAS1表达进行对比，结果显示，肿瘤体积较大、Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、浸润程度>1/2肌层、低分化的子宫内膜癌患者EPAS1呈现异常高表达，提示EPAS1表达的变化与子宫内膜癌患者肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度以及分化程度等临床特征具有一定的相关性，参与子宫内膜癌的发生发展综上所述，miR-34、MDM2、EPAS1在子宫内膜癌中呈现异常表达，且与肿瘤体积、病理分期、淋巴结转移情况、浸润程度、分化程度等临床病理参数具有一定相关性，与子宫内膜癌发生、演进过程密切相关参考文献：[1]张正娥.RLIP76在子宫内膜癌组织中的表达变化及其对子宫内膜癌细胞凋亡的影响[J].山东医药,2016,56(19):47-49.[3]马旭兰,夏迪,王慧霄,等.雌激素通过介导HOTAIR表达对子宫内膜癌细胞增生及裸鼠致瘤能力的影响[J].首都医科大学学报,2019,40(6):894-900.[4]张智,陈红霞,徐晓霞,等.血清人附睾蛋白E4､CA125､CA199联合诊断子宫内膜癌的价值[J].实用医学杂志,2016,32(7):1108-1111.[5]李晨,韦唯,张志将,等.武汉市女性子宫内膜癌流行病学调查及危险因素分析[J].中国妇幼保健,2019,34(17):4064-4067.[6]崔彭华,张玉娟,邵雪斋,等.子宫内膜癌组织LSD1､HE4､CA125及CA19-9变化及临床意义[J].临床误诊误治,2019,32(1):19-22.[7]曹辉,牛犇,王海燕,等.超声造影与磁共振成像对Ⅰ期子宫内膜癌分期诊断的对比研究[J].中国医疗器械信息,2017,23(11):76-77.[8]王芳.子宫内膜癌复发的影响因素分析及相应治疗方案[J].实用癌症杂志,2017,32(5):820-822.[9]谭飞非,徐红,李美仪,等.子宫内膜癌组织中miRNA-373的表达变化及其临床意义[J].山东医药,2018,58(35):76-78.[10]叶夏斌,吴星梅,吕旸,等.miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及预后[J].中国计划生育学杂志,2019,27(3):363-366,370.[11]苏纯,李巧云,张薇,等.miR-200c在子宫内膜癌组织中的表达及与ZEB2蛋白的相关性[J].实用医学杂志,2016,32(18):3057-3059.[12]董爱华,韩克.子宫内膜癌组织中miR-106b､DAB2表达与临床病理及预后的相关性[J].中国计划生育学杂志,2018,26(9):787-792.[13]张金霞,林亚.微小RNA-34c在子宫内膜癌中的功能研究[J].中国临床药理学杂志,2016,32(13):1214-1216.[14]周联明,张学利,杨治,等.血清miR-34c和miR-127-3p表达在结肠癌诊治中的临床意义[J].现代中西医结合杂志,2018,27(27):3061-3064.[15]马沛,汪旭伟,李连海,等.miR-34调控c-Jun蛋白对甲状腺癌细胞生物学行为的影响[J].现代肿瘤医学,2018,26(2):173-177.[16]田敬华,杨金玲,秦杰,等.miR-34启动子甲基化在胃癌发病过程中的作用研究[J].分子诊断与治疗杂志,2019,11(1):17-21.[17]王樾,吴文涌,吴正升,等.CMIP与MDM2在肝细胞性肝癌中的表达及其临床意义[J].安徽医科大学学报,2018,53(2):292-296.[18]张弘英,胡树根,胡利琳,等.靶向CyclinD1基因RNA干扰对肝癌细胞增殖和Mdm2等基因表达影响的研究[J].重庆医学,2018,47(15):1981-1985.。