细胞色素氧化酶染色液.docx

细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)简介：细胞色素氧化酶(Cytochrome Oxidase , CO)被认为是线粒体膜固有的酶，在含有大 量线粒体的细胞(如心肌、肾小管上皮以及胃壁细胞、肝细胞内都具有高度活性此酶活性 往往作为细胞内氧化代谢的指标，亦作为线粒体的标志酶之一Leagene细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)染色原理是细胞色素氧化酶催化3,3-二氨 基联苯胺(DAB)使其侧链的氨基氧化，进行反复的氧化性聚合和氧化性环化形成不溶性的棕 色Phenazine聚合物此酶对固定剂敏感，故须用新鲜切片组成：项号名称DE00314x50mlStorage试剂(A): CO清除液2x50ml4°C避光试剂(B):DAB孵育液B1: DAB染色液45ml-20OC避光B2: DAB增强剂5mlRTB3: DAB反应液100 HRTB1:B2:B3混合，即为DAB孵育液，即配即用试剂(C): Lea苏木素染色液50ml4C避光试剂(D): CO对照液1mlRT使用说明书1份自备材料：1、 恒温培养箱2、 光学显微镜操作步骤(仅供参考):2、 冰冻切片，不固定3、 滴加CO清除液于切片上，铺满整个样品表面。

4、 切片入DAB孵育液中，避光孵育5、 移去切片上的染色液，滴加CO清除液于切片上，铺满整个样品表面6、 蒸馏水稍洗7、 (可选)滴加Lea苏木素染色液浅染细胞核8、 流水冲洗常规脱蜡透明，中性树胶封固染色结果：CO酶活性部位棕色心肌、肾小管上皮内颗粒（线粒体）蓝色 riYi明性对照（可选）:取新鲜配制好的DAB孵育液，按DAB孵育液:CO对照液=50:1的比例混合，即为CO对 照工作液相同切片入CO对照工作液，室温孵育30~60min，其余同上，呈阴性反应注意*项：1、 本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间2、 CO孵育液孵育时间因组织而异，心肌、肾孵育约20 ~30min，肝脏约50 ~ 60min , 甲状腺滤泡上皮约2h3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作有效期：6个月有效相关：jam 编号名称DC0032Masson三色染色液DE0001碱性磷酸酶染色液（改良Gomori钙钻法）DF0111中性福尔马林固定液（10%）DF0135多聚甲醛溶液（4% PFA）DG0005糖原PAS染色液PE0081Tris-HCl 缓冲液(1.5mol/L,pH8.8)PT0013考马斯亮蓝快速染色液TC0713葡萄糖检测试剂盒（GOD-POD比色法）。