中学高中生物选修一知识点总结专题二微生物的培养与应用 3.docx

精品名师归纳总结课题一 微生物的试验室培育· 培育基：人们依据微生物对养分物质的不同需求,配制出供其生长繁衍的养分基质,是进行微生物培育的物质基础·培育基依据 物理性质 可分为 液体培育基 半固体培育基 和固体培育基 在液体培育基中加入凝固剂 琼脂 （是从红藻中提取的一种多糖,在配制培育基中用作凝固剂）后,制成琼脂固体培育基微生物在固体培育基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落 依据菌落的特点可以判断是哪一种菌 液体培育基 应用于工业或生活生产, 固体培育基 应用于微生物的分别和鉴定, 半固体培育基 就常用于观看微生物的运动及菌种保藏等·依据 成分 培育基可分为 人工合成培育基 和自然培育基 合成培育基 是用成分已知的化学物质配制而成,其中成分的种类比例明确,常用于微生物的分别鉴定 自然培育基 是用化学成分不明的自然物质配制而成,常用于实际工业生产·依据培育基的 用途 ,可将培育基分为 选择培育基 和鉴定培育基 选择培育基 是指在培育基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物生长,促进所需要的微生物的生长 鉴别培育基是依据微生物的特点,在培育基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的,用以鉴别不同类别的微生物。

·培育基的化学成分包括 水 、 无机盐 、 碳源 、 氮源 （ 生长因子） 等·碳源：能为微生物的代谢供应碳元素的物质如 CO2、NaHCO3 等无机碳源糖类、石油、花生粉饼等有机碳源异养微生物只能利用有机碳源 单质碳不能作为碳源 可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结·氮源：能为微生物的代谢供应氮元素的物质如 N2、NH3、NO3、NH4（无机氮源）蛋白质、可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等 只有固氮微生物才能利用 N2·培育基仍要满意微生物生长对 PH、特别养分物质以及氧气的要求例如,培育 乳酸杆菌 时需要在培育基中添加 维生素 ,培育 霉菌时须将培育基的 pH 调至酸性 ,培育 细菌 是需要将 pH 调至 中性或微碱性 ,培育 厌氧型微生物 是就需要供应 无氧 的条件· 无菌技术 ·获得纯洁培育物的关键是防止外来杂菌的入侵,要留意以下几个方面：①对试验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒②将用于微生物培育的器皿、接种用具和培育基等器具进行灭菌③为防止四周环境中微生物的污染,试验操作应在酒精灯火焰邻近进行。

④试验操作时应防止已经灭菌处理的材料用具与四周的物品相接触无菌技术除了用来防止试验室的培育物被其他外来微生物污染外,仍有什么目的？ 答：无菌技术仍能有效防止操作者自身被微生物感染·消毒与灭菌的区分消毒 指使用较为温顺的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 消毒方法常用 煮沸消毒法 ,巴氏消毒法 （对于一些不耐高温的液体）可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结仍有 化学药剂 （如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、 紫外线消毒 灭菌 就是指使用剧烈的理化因素杀死物体内外全部的微生物,包括芽孢和孢子灭菌方法有 灼烧灭菌 、干热灭菌 、 高压蒸汽灭菌 灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法,所用器械是干热灭菌箱③培育基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯比较项理化因素的作用强度毁灭微生物的数量芽孢和孢子能否被毁灭消毒较为温顺部分生活状态的微生物不能灭菌剧烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固体培育基（ 1）方法步骤：运算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

2）倒平板操作的步骤：①将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培育基的锥形瓶,左手拔出棉塞②右手拿锥形瓶,将瓶口快速通过火焰③用左手的拇指和食指将培育皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培育基（约 10～ 20mL）倒入培育皿,左手立刻盖上培育皿的皿盖④等待平板冷却凝固,大约需 5～ 10min然后,将平板倒过来放置,使培育皿盖在下、皿底在上·倒平板操作的争论1. 培育基灭菌后,需要冷却到 50℃ 左右时,才能用来倒平板你用什么方法来估量培育基的温度？提示：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚 不烫手 时,就可以进行倒平板了2. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培育基3. 平板冷凝后,为什么要将平板倒置？答： 平板冷凝后,皿盖上会凝聚水珠,将平板倒置,既可以防止培育基表面的水分过度的挥发,又可以防止皿盖上的水珠落入培育基,造成污染 4. 在倒平板的过程中, 假如不当心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位, 这个平板仍能用来培育微生物吗？为什么？答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培育基上滋生,因此最好不要用这个平板培育微生物。

可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结纯化大肠杆菌（ 1）微生物接种的方法最常用的是 平板划线法 和稀释涂布平板法 2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培育基表面连续划线的操作将集合的菌种 逐步稀释分散到培育基的表面在数次划线后培育,可以分别到由 一个细胞 繁衍而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落 3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培育基的表面,进行培育分为系列 稀释操作 和涂布平板操作 两步 4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的 目的是：使集合在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培育基表面形成单个的菌落,以便于纯化菌种 5）平板划线法操作步骤：①将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红②在火焰旁冷却接种环,并打开棉塞③将试管口通过火焰④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液⑤将试管通过火焰,并塞上棉塞⑥左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环快速伸入平板内,划三至五条平行线,盖上皿盖留意不要划破培育皿⑦灼烧接种环, 待其冷却后,从第一区域划线的末端开头往其次区域内划线重复以上操作,在三、四、五区域内划线。

留意不要将最终一区的划线与第一区相连⑧将平板倒置放入培育箱中培育·平板划线操作的争论1. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作终止时, 仍旧需要灼烧接种环吗？为什么？答： 操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培育物每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线终止后,接种环上残留的菌种,使下一次划线时,接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端,从而通过划线次数的增加,使每次划线时菌种的数目逐步削减,以便得到菌落划线终止后灼烧接种环,能准时杀死接种环上残留的菌种, 防止细菌污染环境和感染操作者2. 在灼烧接种环之后,为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高,杀死菌种3. 在作其次次以及其后的划线操作时,为什么总是从上一次划线的末端开头划线？答： 划线后,线条末端细菌的数目比线条起始处要少,每次从上一次划线的末端开头, 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步削减,最终能得到由单个细菌繁衍而来的菌落 6）涂布平板操作的步骤：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中②取少量菌液,滴加到培育基表面③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃尽后,冷却 8～ 10s。

④用涂布器将菌液匀称的涂布在培育基表面涂布平板操作的争论涂布平板的全部操作都应在火焰邻近进行结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求,可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结想一想,第 2 步应如何进行无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证 “无菌 ”例如,酒精灯与培育皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰四周菌种的储存（ 1）对于频繁使用的菌种,可以采纳 暂时保藏 的方法①暂时保藏方法将菌种接种到试管的固体斜面培育基上,在合适的温度下培育当菌落长成后,将试管放入 4℃ 的冰箱中保藏以后每 3～ 6 个月,都要重新将菌种从旧的培育基上转移到新奇的培育基上②缺点 ：这种方法储存的时间不长,菌种简单被污染或产生变异 2）对于需要长期储存的菌种,可以采纳 甘油管藏 的方法在 3mL 的甘油瓶中,装入 1mL 甘油后灭菌将 1mL 培育的菌液转移到甘油瓶中,与甘油充分混匀后,放在 － 20℃ 的冷冻箱中储存疑难解答（ 1）生物的养分养分是指生物摄取、利用养分物质的过程养分物质是指维护机体生命活动,保证发育、生殖所需的外源物质人及动物的养分物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。

植物的养分物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类微生物的养分物质：水、无机盐、碳源、氮源及特别养分物质五类 2）确定培育基制作是否合格的方法将未接种的培育基在恒温箱中保温 1～ 2 天,无菌落生长,说明培育基的制备是胜利的, 否就需要重新制备课题二 土壤中分解尿素的细菌的分别与计数尿素 是一种重要的农业氮肥,尿素并不能直接被农作物吸取只有当土壤中的细菌将尿素分解成 氨之后,才能被植物利用土壤中的细菌之所以能分解尿素,是由于他们能合成 脲酶尿素最初是从人的尿液中发觉的选择菌株（ 1）试验室中微生物的选择应用的原理人为供应有利于目的菌株生长的条件（包括养分、温度、 pH等）,同时抑制或阻挡其他微生物生长 2）选择性培育基可编辑资料 -- -- -- 欢迎下载精品名师归纳总结在微生物学中,将答应特定种类的微生物生长,同时抑制或阻挡其他种类微生物生长的培育基,称作 选择培育基 3）配制选择培育基的依据依据选择培育的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的例如, 培育基中不加入有机物可以选择培育自养微生物培育基中不加入氮元素,可以选择培育能固氮的微生物加入高浓度的食盐可选择培育金黄色葡萄球菌等。

统计菌落数目（ 1）测定微生物数量的常用方法有 稀释涂布平板法 和显微镜直接计数 2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时,培育基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌通过统计平板上的菌落数,就能估量出样品中大约含有多少活细菌为了保证结果精确,一般设置 3～ 5 个平板,选择菌落数在 30～ 300 的平板进行计数,并 取平均值 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,因此,统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示采纳此方法的留意事项： 1.一般选取菌落数在 30~300 之间的平板进行计数2. 为了防止菌落扩散,影响计数,可在培育基中加入 TTC（在计数琼脂中加入适量的 TTC〔0.5% TTC 1ML加到 100ML 琼脂中 〕,细菌菌落长成红颜色 ,对去除食品本底颗粒物干扰特别有意义） .3. 本法仅限于形成菌落的微生物设置对比设置对比的主要目的是排除试验组中非测试因素对试验结果的影响,提高试验结果的可信度对比试验是指除了被测试的条件以外,其他条件都相同的试验,其作用是比照。