HPLCELSD法测定银杏内酯B注射剂的含量及有关物质.pdf

D 6 6H P L C ．E L S D 法测定银杏内醋B 注射剂的含量及有关物质李宁1 梅世昌2 张国庆1 赵玉兰1 廖杰11 ．解放军总医院医学实验测试中心，2 ．解放军总医院成果转化中心北京1 0 0 8 5 3银杏( G i n k g o b i l o b a L ．) 系多年生木本植物，仅一科一属，是古生代二叠纪孑遗裸子植物， 为国家二级保护植物，银杏叶具有益心敛肺北湿止泻的功能银杏内酯B 是银杏叶提取物中的主要活性成分之一，是一种天然的特异性血小板活化因子拮抗荆，具有抗炎、抗过敏、抗休克等广泛的生物学作用，对缺血、缺氧等多种因素引起的心肌损伤有保护作用银杏内酯B注射液由解放军总医院和合肥拓峰生物工程有限责任公司研制，在临床主要应用于治疗脑血管疾病银杏内酯的含量测定可采用薄层色谱法、气相色谱法、生物测定法、高效液相色谱．示差折光检测法、高效液相色谱一紫外检测法、高效液相色谱一蒸发光散射检测等方法口，本文 采用H P L C ．E L S D 法同时测定银杏内酯B 注射液中的银杏内酯B 的含量和有关物质，方法简便、快速、准确1 实验部分仪器及试药：高效液相色谱仪( 美国安捷伦1 1 0 0 系统) ；A l l t e e h2 0 0 0 型蒸发光散射检测 器；X W K - I I I 无油空气泵( 天滓分析仪器厂) ；十万分之一精密天平( S a r t o r i u s ) ；银杏内酯B 对照品( 购自中国生物制品药品检定所) 银杏内酯B 注射液( 解放军总医院成果转化中心)甲醇( 北京化学试剂公司，色谱纯) ；四氢呋喃唧s h e r 公司) ；水为M i l l i p o r e 高纯水。

色谱条件和系统适用性：色谱柱：Z o r b a xS B ．C 1 8 柱( 4 ．6 ×1 5 0 m m ，5 1 a m ，安捷伦公司) ，流动相为四氢呋喃一甲醇一水( 1 0 ：2 5 ：7 5 ) ，流速为1 ．0 m L - m i n ～：E L S D 漂移管温度1 0 5 ℃，气体流速：2 ．9 L ·m i n ～：进样量：1 0 1 a L ，理论塔板数按银杏内酯B 计应不低于3 0 0 0 对照品溶液和供试品溶液均进样1 0 ／a L 2结果银杏内酯B 在l l a g 一1 0 0 f t g 的范围内的对数值和峰面积的对数值呈良好的线性关系，回归 方程为：Y = I ．5 3 1 8 X + 7 ．3 7 1 1r = - 0 ．9 9 9 8 ：方法的日内和日间精密度分别为1 ．4 8 ％和0 ．8 0 ％：三个浓度的平均加样回收率为1 0 0 ．5 3 ％，9 9 ．7 9 ％，1 0 0 ．3 l ％；方法的最低检测限为0 ．0 5g g 样品含量和有关物质测定：精密吸取银杏内酯B 注射剂5 0 0 ．u L 置于1 0 m L 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，作为供试品溶液：另精密称取银杏内酯B 对照品9 ．9 7 m g 置于1 0 m L 容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，配制成O ．9 9 7 m g ／m L 的对照品溶液。

分别将对照品溶液和供试品溶液 进样1 0 u 1 ，记录色谱图，测定5 次取平均值，根据供试品溶液和对照品溶液银杏内酯B 峰面 积的自然对数值计算注射剂中银杏内酯B 的含量结果批号0 4 0 5 2 1 ，0 4 0 6 0 1 ，0 4 0 6 0 2 的样品含量分别为9 8 ．1 8 ％，9 9 ．3 7 ％，9 8 ．9 6 ％ 按照中国药典2 0 0 0 年版二部附录v D 中高效液相色谱法进行精密吸取银杏内酯B 注射液l m L ，用甲醇稀释制成4 ．0 0 m g ·m L - 1 的溶液，作为供试品溶液；另精密吸取银杏内酯B 注射液适量，用甲醇稀释制成0 ．1 0 m g ·m L 1 的溶液，作为对照溶液在银杏内酯B 注射液有关物质的测定色谱条件下，取对照溶液l O 江注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高为满量程的1 0 ％：再取对照品溶液和供试品溶液各1 0 u L 分别进样，记录色谱图至主峰保留时 间的3 倍结果显示，3 批银杏内酯B 注射剂供试品的有关物质中其同系物银杏内酯A 的含量均小于2 ．5 ％，而其它有关物质未见3 讨论E L S D 使用时两个关键的参数为检测的漂移管温度和载气流速，漂移管温度低，则溶剂挥发不完全，漂移管温度过高，则噪音变大。

载气流速同溶剂的挥发是否完全及形成雾化颗粒的大小有关，影响检测的灵敏度本实验的条件是经反复实验后，综合评价而得出的银杏内酯B 成分为紫外末端吸收，采用紫外检测器测定受试剂的影响，测定结果误差较大；蒸发光激光检测器( E L S D ) 属质量型检测器，定量与紫外吸收无关，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰含量测定，其稳定性、重现性、灵敏度均符合定量要求，方法简便易行所建立的H P L C ．E L S D 方法灵敏，准确，重现性较好，且操作简便，可同时测定含量及有关物质，银杏内酯B 浓度在l u g - 1 0 0 u g 的范围内的对数值和峰面积的对数值呈良好的线性关系参考文献：1戴翔翎，凌娅．施炜，毕字安，壬振中H P L C - E L S D 法测定注射用银杏内酯中银杏内醣医药大学学报2 ．0 0 5 2 1 ( 1 ) ：2 22吕伏生陈伟，冯芳，张正行．E L S D 检测法测定银杏酮酯注射液中银杳内酯A ，B 的( 1 ) ：3 43c I 叫中国药典) ．2 0 0 5 ．V o l I ( - - i 孵：．7 ．8 22 4 l与银杏内酯B 的含量．南京中含量中国药科大学学报。

2 0 0 1 ．3 2。