实验2 细菌的芽孢染色和荚膜染色.docx

实验二细菌的芽孢染色和荚膜染色生物111班杨明轩 1102040128一、 实验目的1、 学习并掌握细菌芽胞染色的原理和方法2、 学习并掌握细菌荚膜染色的原理和方法二、 实验原理（一） 细菌的芽抱染色芽抱通常指某些细菌在生长后期于细胞内形成的一种圆形、椭圆形或圆柱形的、厚壁、折光性高、含 水量极低而抗逆性极强的内生休眠体芽抱染色法是利用细菌的芽抱和菌体对染色剂亲合力不同的原理，用不同的染料进行着色，使芽抱和 菌体呈现出不同的颜色而加以区别芽抱通常具有厚而致密的壁，透性低，不易着色和脱色，当用着色力 强的弱碱性染色剂孔雀绿在加热条件下染色师，芽抱和菌体同时着色，进入菌体的染色剂可经水洗脱色， 而进入芽抱的染料则难以透出经对比度大的复染液番红染色后，芽抱仍保留初染剂的颜色，呈绿色；而 菌体被复染剂染成红色，易于区别二） 细菌的荚膜染色荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的主要成分 是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形荚膜染色通常采用衬托染色法或称负染法，即将菌 体和背景分别着色，从而把不着色且透明的荚膜给衬托出来三、 实验材料1、 菌种：枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis）， 26~28°C培养2~3天；钾细菌（Bacillus mucilaginosus），点接于阿须贝平板上，26~28C培养3天。

2、 染色剂：孔雀绿染液、番红染液，石炭酸复红、墨汁（已过滤）3、 其他：载玻片、无菌水、洗瓶、擦镜纸、吸水纸、二甲苯、香柏油、接种用具四、 实验方法（一） 细菌的芽抱染色1、 制片：将枯草芽抱杆菌涂片、干燥固定2、 染色：用吸水纸块盖住涂片处，然后在吸水纸张滴加孔雀绿染液至饱和加热使染液微冒蒸汽后， 保持5min加热时应不断添加染液，不要使吸水纸干燥3、 水洗：待玻片冷却后，用镊子除去吸水纸，再用水平轻轻冲洗至孔雀绿不再褪色为止4、 复染：用番红染液染色2~3min5、 镜检：涂片干燥后，置油镜下观察6、 清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内二） 细菌的荚膜染色1、 制片：在洁净的载玻片的中央滴加1滴无菌水，取少许钾细菌制成涂片，在空气中风干2、 染色：用石炭酸复红在涂片处染色4~5min，水洗，稍风干3、 滴加一滴墨汁在载玻片的一侧，左手持此玻片，右手拿一干净玻片作推片用将推片边缘凭证的一 端与混合菌液成30°胶接触，顺势将菌液推开（不要太用力），使其涂成一薄层，并在空气中充分自然干燥4、镜检：玻片自然干燥后，置油镜下观察6、清理：整理桌面，将显微镜恢复原样，将废片放入废片缸内。

六、思考题1、 为什么在孔雀绿加热染色时，要待玻片冷却后才能冲洗？答：因为经过加热后细菌提和抱子体均会因加热膨胀，如果此时冲洗冷却会导致细菌体和抱子体因为热胀 冷缩过于剧烈而发生形变从而影响两者之间形状区别的观察同时对于玻片也会因为热胀冷缩原因可能会 产生炸裂损坏玻片，造成伤害2、 分别从菌龄、制片等方面，简述细菌芽胞染色需要注意的技术要领答：（1）进行芽抱染色的菌株应注意其培养时间如菌株培养时间过长，芽抱则从菌体脱落出来；如培养 时间过短，达不到细菌生长的后期，则可能出现芽抱数量较少的现象2） 染色时，用吸水纸盖住涂片并加热是为了让染色剂更好的进入芽抱但加热时要注意加热到微冒蒸汽 即可，不要使染液沸腾，并注意不断添加染液3） 加热完成后，有等玻片自然冷却后在进行水洗，而且水洗要充分3、 简单染色能否观察细菌荚膜？请解释原因答：不可以因为荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外； 荚膜的主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形简单的染色法原理是将荚膜染色， 但是荚膜含水量极高，无法着色因此无法通过简单染色观察4、 细菌的荚膜有何特点，在对其染色观察结果时应注意什么？答：（1）荚膜是包围细菌细胞的一层粘液性物质，具有明确的外缘，牢固地附着在菌体细胞壁外；荚膜的 主要成分是多糖，不易着色，其含水量高达90%以上，易变形。

2）由于荚膜的含水量极高，因此在实验过程中为了保持荚膜的形态，制片不能用火烤，以免荚膜失水后 形态改变荚膜有一定的粘性，因此取菌时要少取些，涂菌是要尽量涂开，使菌体分散。