抗肿瘤药效学指导原则.doc

抗肿瘤药物药效学指导原则(讨论稿)1基本原则抗肿瘤药物可分为：(1)细胞毒类药物(cytotoxic agent)：包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等； (2) 生物反应调节剂(biological response modifier) ；(3)肿瘤耐药逆转剂 (resistance reversal agent) ；(4)肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer)；(5)肿瘤血管生成抑制剂 (tumor angiogenesisinhibitor)；(6)分化诱导剂(differentiation inducing agent)；(7)生长因子抑制剂(growthfactor inhibitor)；(8)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide)等抗肿瘤药物的药效学包括体外抗肿瘤试验，评价药物的抗癌活性时，以体试验结果为主，同时参考体外试验结果以做出正确的结论I 类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研 究2体外抗肿瘤活性试验2.1 试验目的 (1)对候选化合物进行初步筛选； (2)了解候选化合物的抗瘤谱； (3)为随后进行的体抗肿瘤试验提供参考，如剂量围、肿瘤类别等。

2.2 试验方法选用 10-15 株人癌细胞株，根据试验目的和所选用的方法选择相应的细胞系及适量的细胞接种浓度，按常规细胞培养法进行培养；推荐使用四氮唑盐 [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide,MTT] 还原法、 XTT{2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulphonyl)-5-[carboxanilide]-2H-tetrazolium可修编-hydroxide}还原法、磺酰罗丹明 B(sulforhodamine B,SRB)染色法、或 51Cr 释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用药物与细胞共培养的时间一般为 48-72 小时，贴壁细胞需先贴壁 24 小时后再给药试验应设阳性及阴性对照组，阳性对 照用一定浓度的标准抗肿瘤药，阴性对照为溶媒对照2.3评价标准以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线，然后采用 Logit 法计算半数有效浓度(IC 值或 EC50 值)体外试验至少重复50一次3体抗肿瘤试验体抗肿瘤试验结果是评价候选抗肿瘤化合物有效性的最重要指标。

体抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型，其中至少一种为人癌裸小鼠移植瘤模型或其它人癌小鼠模型试验结果三种模型均为有效，再重复一次也为有效，评定该化合物对这些实验性肿瘤具有治疗作用鼓励使用人癌裸小鼠移植瘤模型和多种类的移植瘤模型，以较正确和全面地评价候选化合物的抗瘤活性和抗瘤谱鼓励使用原位接种模型和中空纤维测定 (hollow-fiber assay) 等先进的抗肿瘤作用评价方 法3.1动物动物要求健康，符合等级动物要求，有实验动物合格证 雌雄均可，但同一批实验中动物性别必须相同小鼠鼠龄为 5-6 周，体重为 18-22 克评价 同一物质的活性时，不同批次的实验必须采用同一品系的小鼠3.2肿瘤模型3.2.1 小鼠肿瘤模型可应用的小鼠肿瘤模型包括淋巴细胞白血病腹水瘤 L1210 和P388、白血病 L-615、宫颈癌 U14、肝癌 H22、Lewis 肺癌、黑色素瘤 B16、网织可修编-细胞瘤 M5076、肠癌 26、肠腺癌 38、乳腺癌 CD8F1、艾氏腹水瘤（EAC）、肉瘤 -180 等，以及以上各种小鼠肿瘤的亚型和耐药瘤等3.2.2人癌裸小鼠移植瘤模型应选用体外试验敏感细胞株进行体抗人癌移植瘤试验。

模型的建立和使用请注意以下几点：(1) 移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立，对细胞株和移植瘤的化疗敏感 性应予了解2) 移植瘤复后一般应传 2-3 代后再用于体抗肿瘤试验3) 对模型生长情况应全面了解，尤其是生长快的模型4) 为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性，复后移植瘤体传代应少 15-20 代3.33.3.1试验过程接种肿瘤接种方法主要有皮下接种、腹腔接种和原位接种皮下瘤模型：选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在无菌条件下（超净台或接种罩），用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤，切开皮肤，剥离肿瘤将瘤组织剪成 1.5 mm 3 左右，用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下；或制成细胞悬液，然后按一定比例加入无菌生理盐水，一般每只小鼠接种肿 瘤细胞数量为（1-5）×106腹水瘤模型：无菌条件下，消毒动物皮肤，吸取生长良好的动物腹水，以生理盐水按一定比例稀释后接种于动物腹腔，接种细胞数量一般为（1-5）×106原位接种模型：原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动物的某脏器，如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏原位接种不是常规的方法，但有其优越性，是鼓励使用的方法主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅等原位接种方法。

可修编3.3.2-分组和剂量设置分组：试验分阴性对照组、阳性对照组、治疗组治疗组设高、中、低三个剂量组小鼠肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分组，裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至 100—300mm3 后将动物随机分组治疗组动物数普通小鼠每组至少 10 只，裸小鼠至少 6 只阴性对照组动物数为治疗 组动物数´Ö试验组数剂量设置：治疗组设高、中、低剂量治疗组，一般按 4:2:1 设置，高剂量使用最大耐受量或 LD 的剂量阴性对照组给予相应的溶剂；阳性对照药选用10对该动物敏感的、临床应用的抗肿瘤药物，如试验化合物为一抗癌药物的衍生物或类似物时，必须选用该抗癌药物作为阳性对照药阳性对照药选择原则为：（1）疗效确切；（2）与被试物质化学结构类似；（3）与被试物质有类似的作用机理 3.3.3 药物配制，给药时间和给药途径药物配制：溶于水的药物，用生理盐水或蒸馏水配制；如用酸、碱溶解者，可先用小量酸(0.1-0.5N HCl)或碱(NaHCO 、Na CO 、NaOH)溶解，调节 pH 在3 2 34.5-9.0 的围用乙醇、丙二醇、吐温 80、DMSO 助溶的药物，或用吐温 60、吐温 80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纤维素制成混悬液的药物，可腹腔注射或口服，但必须设相同浓度的溶剂对照组。

用注射用花生油配制的溶液或乳剂可口服、皮 下或肌肉注射给药时间和给药途径：分组当日开始给药，根据不同药物的代动力学和毒性反应等确定给药方案给药途径应与推荐临床用药的途径相同静脉给药和口服给药是较为理想的给药途径给药次数较多，或被试物质溶解性较差，静脉可修编-给药有困难时，可考虑使用腹腔给药，但在评价药效时要注意这两种给药途径是有差别的特殊情况下根据药物作用特点和推荐临床给药方法可采取瘤周、瘤、肌肉、皮下给药途径腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径不可采用从饮 水中给药的方式3.43.4.1评价标准腹水瘤模型接种给药后，观察和记录动物死亡时间，计算生存天数如阴性对照组 20%动物存活时间超过 4 周，表明腹水瘤生长不良，实验作废采用中位生存时间(即 median survival time, MST)来评价每组生存时间，其计算公式为：每组鼠数的中间数 - 中间生存天数前死亡的鼠数MST=（中间生存天数-0.5）+中间生存天数死亡的鼠数治疗组与对照组的比较，采用 T/C（%）来表示计算公式为：TMSTT/C%= ────×100%CMSTT ：治疗组 MST ；C ：阴性对照组 MST。

MST MST评价的标准则以 125%为界，当 T/C %≥125% 时，视为有效，反之则无效 报告格式见表 1可修编-表 1 XXX 对腹水瘤 XXX 的实验治疗作用组别剂量方式给药动物数开始体重(克)中位生存时间 T/C（只） (x SD)(天） （%）阴性对照阳性对照治疗组高剂量中剂量低剂量3.4.2裸小鼠移植瘤模型推荐使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定，一般为每周 2-3 次,每次测量同时还需称鼠 重肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为：V = 1/2×a×b2 或π/6×a×b×c其中 a、b、c 分别表示长宽高由于此两公式的相关性极好，可采用任一公式根据测量的结果计算出相对肿瘤体积（relative tumor volume，RTV），计算公式为： RTV = V /V 其中 V 为分笼给药时(即 d )测量所得肿瘤体积，Vt 为每一t 0 0 0次测量时的肿瘤体积抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率 T/C（%），计算 公式如下：TRTVT/C%= ────×100% CRTV可修编3 c-T ：治疗组 RTV ；C ：阴性对照组 RTV。

RTV RTV疗效评价标准：T/C%>60 %为无效；T/C%≤60% ，并经统计学处理 P<0.05 为有效报告格式见图 1 和表 2；并应提供相应照片表 2 XXX 对人癌裸小鼠移植瘤 XXX 的实验治疗作用组别剂量给药动物数平均体重(克)TV(x±SD) RTV T/C P 值 方式 d0 dn d0 dn d0 dn (x±SD)(%)阴性对照阳性对照治疗组高剂量中剂量低剂量d0: 分笼给药时间 ；dn: 实际治疗疗效最佳的时间1.6)m(积体瘤植移1.41.210.80.60.40.20阴性对照阳性对照高剂量中剂量低剂量03 6 10 13 17 20 24时间(天)注：图中为示意曲线图 1 XXX 对人癌裸小鼠移植瘤 XXX 的生长抑制作用3.4.3小鼠肿瘤模型可修编-生长较慢的小鼠肿瘤采用与裸小鼠移植瘤同样的量瘤径的评价方法生长较快的小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价试验结束后处死动物，称体重，解剖剥离瘤块，称瘤重阴性对照组肿瘤平均瘤重小于 1 克，或 20%肿瘤重量小于 400 毫克， 表示肿瘤生长不良，试验作废疗效评价公式：给药组平均瘤。