人凝血因子效价检验标准操作规程.docx

人凝血因子效价检验标准操作规程 ; 人凝血因子Ⅷ效价检验规范操作规程1 目的严格标准操作者的检测办法，使操作者能够快速有效和平安准确地完成检验操作，特制定本操作规程 2 适用范围本操作规程适用于冷沉淀、人凝血因子Ⅷ洗脱原液、原液、半成品、冻干及成品等含有人凝血因子Ⅷ的供试品效价检测 3 制定依据?中华人民共和国药典》〔2023年版〕三部，附录3521人凝血因子Ⅷ效价测定法〔一期法〕 4 职责4.1 检验人员按本SOP对供试品进行检验和计算 4.2 复核人对检验中的计算进行复核4.3 确认人按本SOP对检验过程及结果进行相应确认和判定 5 仪器及器具 5.1 仪器5.1.1 凝血仪 5.1.2 电子天平 5.1.3 电子分析天平 5.1.4 漩涡混匀器 5.2 器具5.2.1 微量移液器 5.2.2 吸头 5.2.3 移液管 5.2.4 洗耳球 5.2.5 试管 5.2.6 试管架 5.2.7 砂轮5.2.8 凝血仪耗材〔比色盘、供试品杯等〕 6 试剂及试液 6.1 试剂6.1.1 人凝血因子VIII国家规范品 6.1.2 人凝血因子VIII比拟品 6.2 试液6.2.1 人凝血因子Ⅷ不足血浆6.2.2 稀释液〔咪唑稀释液/因子稀释液/样本稀释液〕 6.2.3 激活的局部促凝血酶原激酶时间试剂6.2.4 氯化钙溶液 7 操作步骤7.1 供试品溶液、比拟品溶液及规范品溶液的制备 7.1.1 供试品及比拟品溶液的制备 7.1.1.1 供试品及比拟品的预稀释用人凝血因子Ⅷ不足血浆将供试品预稀释成约1IU/ml〔冻干制品先按标示量参加水溶解；冷沉淀先取1~2g，加水溶解约为20倍。

具体稀释过程如下： 人凝血因子人凝血因子Ⅷ供试品辨别 冷沉淀 Ⅷ洗脱原半成品、成品、冻干液、原液 及比拟品 供试品 1~2g 100μl 100μl 人凝血因子Ⅷ不足血浆 19~38g纯化水 300μl 100μl 稀释倍数 20 4 2 取上步稀释液 --- 50μl 50μl 人凝血因子Ⅷ不足血浆 --- 450μl 450μl 总预稀释倍数 20 40 207.1.1.2 供试品预稀释液的工作稀释〔供试品溶液〕将上述含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液用稀释液稀释6倍、8倍、10倍具体稀释过程如下：先取500μl已预稀释成含人凝血因子Ⅷ约1IU/ml的供试品预稀释液，加500μl稀释液，稀释成含人凝血因子Ⅷ约0.5IU/ml，混匀，再分别从中取200μl移到3支试管中，分别加400μl，600μl和800μl稀释液供试品稀释可根据本身效价上下及仪器环境等变化作适当适当调整 如下表稀释：供试品预稀释液 稀释液 稀释倍数 取上步稀释液 稀释液 总稀释倍数 供试品溶液1 500μl 500μl 2 200μl 400μl 30 供试品溶液2 500μl 500μl 2 200μl 600μl 40 供试品溶液3 500μl 500μl 2 200μl 800μl 507.1.2 规范品溶液的制备7.1.2.1 预稀释：将规范品按标示量参加水溶解，取100μl复溶品，加人凝血因子Ⅷ不足血浆适量预稀释成约1IU/ml。

7.1.2.2 工作稀释：将上述1IU/ml的规范品用稀释液稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍稀释倍数 —— 稀释液 ×2 600μl 1IU/ml 规范品 600μl ×4 600μl ×2 规范品 600μl ×8 600μl ×4 规范品 600μl ×16 600μl ×8 规范品 600μl ×32 600μl ×16 规范品 600μl 人凝血因子Ⅷ效价 0.5 IU/ml 0.25 IU/ml 0.125 IU/ml 0.0625 IU/ml 0.03125 IU/ml7.2 检验操作7.2.1 凝血仪准备：7.2.1.1 先翻开凝血仪电源，在反馈盘上放入比色盘，预热使反馈仓温度到达37℃7.2.1.2 分别将激活的局部促凝血酶原激酶时间试剂和氯化钙溶液参加凝血仪的相应区域7.2.2 上机测试凝固时间7.2.2.1 将供试品杯加到供试品盘上，并按要求在相应的供试品杯中参加供试液〔规范品、比拟品和供试品稀释液〕和相应试剂具体参加位置如下：Dil杯参加稀释液；18号杯参加人凝血因子Ⅷ不足血浆； 1~14号杯参加待测液；7.2.2.2 按仪器操作规程启动人凝血因子Ⅷ效价测定程序； 7.2.2.3 测定结束后，记录返回的凝固时间7.2.3 测定时要求每个稀释度平行测定2管，两管之差不得超过均值10%，否那么重测。

7.3 结果处理7.3.1 规范曲线制作：将规范品5个不同稀释度所含人凝血因子Ⅷ效价〔IU/ml〕，分别取对数值；再将其各相应浓度所测得的凝固时间〔秒，s〕，也分别取对数值然后按统计学办法作直线回归方程〔用excel计算〕：logy = blogx+a其中：x为人凝血因子Ⅷ效价，IU/ml；y为测得相应凝固时间，秒〔s〕7.3.2 供试品及比拟品效价计算：将3个不同浓度的供试品所得到凝固时间〔秒〕分别代入方程式计算x值；然后将所得x值分别乘以相应的供试品稀释倍数，即得到3个相应的效价〔IU/ml〕；计算这3个效价值的平均值作为供试品中人凝血因子Ⅷ效价7.4 考前须知7.4.1 规范曲线直线回归相关系数应不低于0.987.4.2 每个稀释度的规范品或供试品平行测定2管，2管之差不得超过均值10%，否那么重测 7.4.3 直接接触规范品、供试品和血浆的器皿应为塑料制品或硅化玻璃制品 7.4.4 应急预案7.4.4.1 仪器与电脑无法连接〔仪器无法将实验数据传到电脑上不易于对实验的考察及结果分析，试验过程中数据未能在电脑上读取〕检查线接口，重新连接仪器电脑7.4.4.2 如遇到供试品还未上机检验停电，那么待来电后，检验照常进行。

如遇上机过程中断电在不影响检验结果的情况下继续检验直到结束，否那么重新检验7.4.4.3 电源无法关闭，可能是电路短路，会导致机器死机7.4.4.4 长期频繁的开关会导致仪器电源的松弛，仪器不容易关闭，应减少开机次数，按仪器使用表明书定期维护7.4.4.5 针头梗塞，操作仪器点击清洗，将针头冲干净 8 判定基准检验结果的判定依据相应品种的质量规范进行 9 生效日期本规定自2023年12月01日起正式生效 。