人总胆汁酸TBA酶联免疫分析.doc

人总胆汁酸（ TBA) 酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用检测范围：96T0.6mmol/L - 16mmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中总胆汁酸（ TBA) 含量实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人总胆汁酸（ TBA) 水平用纯化的人总胆汁酸（TBA) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入总胆汁酸（ TBA) ，再与 HRP 标记的总胆汁酸（ TBA) 抗体结合，形成抗体 -抗原 -酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色 TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色颜色的深浅和样品中的总胆汁酸（ TBA) 呈正相关用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值），通过标准曲线计算样品中人总胆汁酸（ TBA) 浓度试剂盒组成12330 倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板20ml× 1 瓶6ml × 1 瓶12孔× 8条7 终止液8 标准品（ 32mmol/L9 标准品稀释液）6ml ×1 瓶0.5ml × 1 瓶1.5ml × 1 瓶456样品稀释液显色剂 A液显色剂 B液6ml × 1 瓶6ml × 1 瓶6ml × 1/瓶10 说明书11 封板膜12 密封袋1 份2 张1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于 -20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP）活性操作步骤1. 标准品的稀释： 本试剂盒提供原倍标准品一支， 用户可按照下列图表在小试管中进行稀释16mmol/L5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液8mmol/L4 号标准品150μl 的 5 号标准品加入150μl 标准品稀释液4mmol/L3 号标准品150μl 的 4 号标准品加入150μl 标准品稀释液2mmol/L2 号标准品150μl 的 3 号标准品加入150μl 标准品稀释液1mmol/L1 号标准品150μl 的 2 号标准品加入150μl 标准品稀释液2. 加样： 分别设空白孔 （空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同） 、标准孔、待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5 倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀3.温育：用封板膜封板后置37℃温育 30 分钟4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外7. 温育：操作同 38. 洗涤：操作同 59. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀， 37℃避光显色10 分钟.10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 11. 测定：以空白空调零， 450nm 波长依序测量各孔的吸光度（液后 15 分钟以内进行操作程序总结：OD值） 测定应在加终止计算以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式， 将样品的 OD 值代入方程式， 计算出样品浓度， 再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（ n 倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（× n× 5）5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6．底物请避光保存7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理9．本试剂不同批号组分不得混用保存条件及有效期1．试剂盒保存： ； 2-8℃2．有效期： 6 个月。