姜黄素对代谢综合征大鼠ICAM-2016年最新医学论文.doc

精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询姜黄素对代谢综合征大鼠 ICAM作者：陶正贤，龙明智，赵慧娟，谭晓，王迪斌，陶立翠【关键词】 代谢综合征；细胞黏附分子；姜黄素；内皮功能障碍Effect of curcumin on ICAM1 and relative serum indexes in rats with metabolic syndrome【Abstract】AIM: To investigate the therapetutic effects of curcumin on metabolic syndrome (MS) in rats and the underlying mechanism. METHODS: Thirty SD male rats were randomly separated into 3 groups (n=10 in each one): control, model and curcumin groups. Rats in model and curcumin groups were treated with twokidneys oneclipped to induce renal hypertension and fed with a high fructose diet for 4 week to induce MS. Shamoperated rats were taken at random as noninfarction control. After intragastric administration of either curcumin (200 mg/kg d) in curcumin group or saline (200 mg/kg d) in model and control groups 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询for 4 weeks, serum glucose, insulin and lipid were tested. The sICAM1 level was measured by ELISA and ICAM1 mRNA level in artery was tested by RTPCR. RESULTS: Compared with controls, rats in model group had higher levels of sICAM1, serum glucose, insulin, lipid (P 0.01), and curcumin restored these indexes. The ICAM1 mRNA expression in model group was higher than that in shamoperated rats (P 0.01); while in curcumin group, ICAM1 mRNA level was comparable to that in control group (P 0.05). CONCLUSION: Curcumin reduces serum glucose, insulin and lipid of MS rats and it may be related to the suppression of ICAM1 mRNA expression and the improvement of blood vessel endothelium function.【Keywords】 metabolic syndrome; cell adhesion molecules; curcumin; endothelial dysfunction【摘要】目的: 探讨姜黄素对代谢综合征（MS）大鼠模型的治疗作用及其机理. 方法: 将清洁级雄性 SD 大鼠 30 只随机分为三组：正常对照组，模型组，姜黄素组，每组 10 只. 模型组、姜黄素组施以两肾一夹术后普通饲料喂养 4 wk，诱发肾性高血压，继以高果糖精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询饲料喂养 4 wk，诱导建立代谢综合征模型；正常对照组施以假手术. 姜黄素组用姜黄素（200 mg/kg d）灌胃给药，模型组和正常对照组灌等量的生理盐水. 用药 4 wk 后，检测血脂、血糖等血清学指标，用 ELISA 法测定血清 sICAM1 的水平，用 RTPCR 检测血管内 ICAM1 mRNA 水平. 结果: 模型组大鼠血脂、血糖等血清学指标和血清sICAM1 水平明显高于正常对照组大鼠，差异有统计学意义（P 0.01） ；血管内 ICAM1 mRNA 水平模型组高于正常对照组，差异有统计学意义（P 0.01） ；姜黄素组大鼠血脂、血糖等血清学指标和sICAM1 水平明显低于模型组， 差异有统计学意义（P 0.01） ；姜黄素组和正常对照组接近， 差异无统计学意义（P 0.05）. 结论: 姜黄素能明显降低 MS 大鼠血糖、血胰岛素和血脂水平，其抑制血管内ICAM1 mRNA 的表达、改善血管内皮功能可能是其作用机制之一.【关键词】 代谢综合征；细胞黏附分子；姜黄素；内皮功能障碍0 引言自 1988 年 Reaven［1］提出“X 综合征”概念后，医学界对代谢综合征（metabolic syndrome， MS）进行了大量研究，但至今对精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询MS 的病因、发病机制尚未阐明. 姜黄素（二阿魏酰基甲烷）具有抗氧化，抗炎，抗感染，抗凝，降血脂，抑制肿瘤和免疫调节等作用［2-4］ ，但姜黄素对细胞黏附分子的影响以及对 MS 是否具有治疗作用少见报道. 本实验采用两肾一夹术、高果糖饮食诱导建立 MS 大鼠模型［5］ ，通过观察姜黄素对血清可溶性细胞间黏附分子1（Soluble intercellular adhesion molecule1， sICAM1）和血管内皮细胞间黏附分子 1（intercellular adhesion molecule1， ICAM1）mRNA 的影响，进一步探讨其治疗 MS 的可能机制.1 材料和方法1.1 材料清洁级雄性 SD 大鼠 30 只，体质量（200±20） g，由南京医科大学实验动物中心提供. D 果糖（DFructose） ，批号： S20050118，南京生兴生物技术有限公司生产；姜黄素粉，批号：F20050102，上海国药集团化学试剂有限公司生产；sICAM1 ELISA试剂盒购自上海西唐生物技术有限公司；胰岛素放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所；Tripure 试剂购自美国罗氏公司；引物由北京塞百盛公司合成. 鼠尾动脉测压仪（HX1 型）由南京医科大学循环生理学教研室提供；HITACH717 全自动生化分析仪由日本日立公司生产；全自动放射免疫 γ 计数仪由上海核所日环光电仪器有限精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询公司；FLUKO 匀浆机由上海弗鲁克流体机械制造有限公司生产；RTPCR 仪由德国 Eppendorf 公司生产；微量 ONETOUCHⅡ血糖仪由美国强生公司生产.1.2 方法1.2.1 模型制备和药物干预方法将大鼠随机分为三组：正常对照组，模型组，姜黄素组，每组 10 只. 普通饲料适应性喂养 1 wk，术前禁食过夜，用 40 g/L 戊巴比妥钠（40 mg/kg）腹腔麻醉. 模型组和姜黄素组在无菌状态下，分离左肾动脉，用一间隙为 0.25 mm的Ｕ型夹结扎肾动脉，使左肾动脉部分狭窄，右肾及动脉不触及，诱发继发性高血压大鼠模型；正常对照组大鼠除不结扎肾动脉外，其他操作相同，施以假手术. 术后大鼠普通饲料喂养，术后 3 d 大鼠恢复正常，术后 4 wk 末于清醒状态下（上午 9~12 时）用尾套法测大鼠的收缩压，筛选出收缩压 140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）的大鼠改用高果糖饲料喂养 4 wk. 姜黄素组用姜黄素（200 mg/kg d）灌胃给药，模型组和正常对照组灌等量的生理盐水，干预 4 wk. 模型组大鼠造模过程中死亡 1 只，造模后 26 d 有 1 只死亡（n=8） ，姜黄素组 1 只 SBP 140 mmHg，造模失败（n=9）.1.2.2 血清学指标检测术后 12 wk 末，禁食禁水 12 h，40 g/L精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询戊巴比妥钠（40 mg/kg）腹腔注射麻醉大鼠，开胸暴露心脏，用 12号针头从心脏采血. 空腹血糖用葡萄糖氧化酶化法测定；空腹胰岛素用放免法测定；TG, TC, LDLC, HDLC 选用酶法测定；sICAM1 水平用双抗体夹心 ELISA 法（批内变异系数为 5%，批间变异系数为 8%） ；分离升主动脉，剪切动脉 1~2 cm，立即放入液氮中保存.1.2.3RNA 提取每 50~100 mg 动脉血管加 1 mL Tripure，充分匀浆. 匀浆后室温放置 5 min ，加入氯仿 200 μL，剧烈振荡 15 s，室温放置 2~3 min，4 ℃ 12 000 g 离心 15 min. 将上清液转入新离心管中，加等量异丙醇沉淀 RNA，室温放置 10 min，4 ℃ 12 000 g 离心 10 min. 弃上清，加 1 mL 750 mL/L 乙醇，振荡洗涤沉淀，4 ℃ 7500 g 离心 5 min. 弃上清，晾干，将 RNA 溶于 30~50 μL DEPC 水，测定其浓度，10 g/L 琼脂糖凝胶电泳，经凝胶成像系统观察到 28 s rRNA 与 18 s rRNA 的比值接近 2∶1，将提取的RNA 保存于-70℃冰箱.1.2.4RTPCR 应用 Takara RNA PCR Kit（AMV）Ver3.0，将血管总RNA 逆转录为 cDNA. ICAM1 引物序列如下：上游 5′ AGACACAAGCAAGAGAAGAA3′，下游 5′ GAGAAGCCCAAACCCGTATG3′. PCR 反应条件：94℃ 30 s，54.7℃ 30 s， 72℃ 30 s，30 个循环，预计扩增产物 234 bp. βactin 引物序列如下：上游5′GCCCTCTGAACCCTAAG3′，下游 5′ ATGTCACGCACGATTTCC3′. 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询PCR 反应条件：94℃ 5 min；94℃ 30 s，56.5℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35 个循环，预计扩增产物 314 bp.统计学处理：结果以 x±s 表示. 采用 SPSS10.0 进行 ANOVA 及LSDt 检验，P 0.05 为差异有统计学意义.上一页 1 2 下一页2 结果2.1 姜黄素对 MS 大鼠血清学指标和收缩压的影响模型组大鼠空腹血脂（TC, TG, LDLC） 、血糖、血清胰岛素和收缩压水平较正常对照组明显升高，差异有统计学意义（P 0.01） ；姜黄素可显著降低模型组大鼠空腹血脂、血糖、血清胰岛素水平，与模型组大鼠相比差异有统计学意义（P 0.01） ，与正常对照组相比差异无统计学意义（P 0.05，表 1）.表 1 姜黄素对 MS 大鼠血脂、血糖、血胰岛素和收缩压的影响（略）aP 0.01 vs NG, bP 0.01 vs MG, cP 0.05 vs MG. NG： 正常对精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询照；MG：模型；CG：姜黄素.2.2 姜黄素对 MS 大鼠 sICAM1 水平的影响模型组大鼠血清sICAM1 水平（0.91±0.25）pg/mL 明显高于正常对照组（0.55±0.66）pg/mL 大鼠，差异有统计学意义（P 0 .01） ；药物干预 4 wk 后，姜黄素组大鼠 sICAM1 水平（0.68±0.。