山西地区91 株淋球菌耐药性分析.doc

山西地区91株淋球菌耐药性分析李玉串 1, 李连青 2， 戎建荣 2 ,李桢 1,叶峰山 1,（1.山西医科大学，山西太原 030001；2．山西省临床检验中心，山西太原 030012)【摘要】 目的 检测山西地区淋病奈瑟菌（NG）对5种抗生素的敏感性，分析其耐药特点方法 K-B琼脂扩散法测定NG对抗生素的敏感性及用产色头孢噻吩法检测β-内酰胺酶结果 91株淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松和大观霉素的耐药率分别为69.23％、87.91％、97.80％、O、5.49%,检出质粒介导的产青霉素酶NG(PPNG)38株(41.76％),同时耐2种及2种以上抗菌药物的多重耐药率为94.51％结论 青霉素、四环素及环丙沙星已不宜用于山西地区淋病的治疗；头孢曲松和大观霉素耐药率较低,可以作为山西地区治疗淋病的首选药物但是大观霉素已出现耐药株，应引起重视同时山西地区多重耐药现象十分严重，持续监测淋球菌的耐药性十分重要关键词】 淋病奈瑟菌；K-B琼脂扩散法；抗生素耐药率；β-内酰胺酶Resistance Analysis of 91 strains of Neisseria gonorrhoeae in ShanxiLi Yuchuan1,Li Lianqing2, Rong Jianrong2, Li Zhen1, Ye Fengshan1, (1．Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China；2．Shanxi Clinical Laboratory，Taiyuan 030012，China)【Abstract】 Objective To survey the antibiotic susceptibility and resistance trends of Neisseria gonorrhoeae to 5 Antibiotics in Shanxi ．Methods The susceptibility to 5 antibiotic angents was tested by the disk diffusion method and β-lactamase determined by nitrocefin. Results The resistance rates of 91 strains to penicillin,tetracycline,ciprofloxacin,ceftriaxone,spectinomycin were 69.23%, 87.91%, 97.80%,0,5.49%，penicillinase-producing neisseria gonorrhoeae(PPNG) accounted for 41.76% ,resistance rates of multiple-resistance isolates to 5 antibiotics were 94.51%.Conclusion penicillin, tetracycline, ciprofloxacin cannot be used as routine agents to treat gonorrhea, ceftriaxone and spectinomycin should be used as the first line agents in treating gonorrhea at present in shanxi area .However attention should be paid to the appearance of some resistance strains to spectinomycin.It is of great importance to continuously survey the susceptibilities of NG to antibiotic.【Key words 】 Neisseria gonorrhoeae;Disk diffusion method;Resistance rates to antimicrobial agents;β-lactamase近年来，抗生素广泛且不合理使用可诱导淋球菌获得耐药性基因，不仅造成淋球菌的耐药性呈显著上升趋势，而且多重耐药菌株也日益增多。

为了解山西地区淋球菌耐药株的流行情况，我们山西省淋球菌耐药监测平台课题组从2005年开始对淋球菌抗生素的敏感性进行测定2005年～2007年检测结果显示：山西地区淋球菌的耐药情况不容乐观 【1】 ，故继续加强山西地区淋球菌耐药性检测具有重要意义本文选取2007年～2009年山西地区91株临床分离淋球菌，测定其抗生素敏感性，分析其耐药特点1 材料与方法1．1材料1．1．1菌株来源：2007年9月～2009年6月从山西省运城市、长治市、大同市各级医院检验科培养分离出91株淋病奈瑟菌，其中男性患者86株，女性患者5株男性患者自尿道口内3～4 cm处取材，女性患者自宫颈口内1.0-1.5 cm处取材所有菌株均经涂片、培养、分离、氧化酶试验、糖发酵试验鉴定确认为淋病奈瑟菌，纯培养后洗于脱脂牛奶中，于-70℃低温冰箱冷冻保存质控菌株ATCC49226(购自中国药品生物制品检定所)1．1.2淋球菌培养基及抗菌药物：GC培养基和青霉素、四环素、头孢曲松、环丙沙星及大观霉素药敏纸片(均购于英国OXIOD公司)1．2药敏试验方法采用K-B琼脂扩散法 【2】 ，按CLSI标准进行具体操作如下：用无菌棉拭子将相当于0．5麦氏单位的菌悬液在GC培养基的琼脂表面均匀涂布3次，每次旋转平板60°，最后沿平板内缘涂抹1周，室温干燥3-5 min后，用无菌镊子将药敏纸片(青霉素、四环素、头孢曲松、环丙沙星、大观霉素)贴于琼脂表面，35℃、5%CO2培养箱中培养24 h观察结果。

以淋球菌ATCC49226作为药敏质控株作对照，判断标准采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)2007年第十七版信息增刊标准 【3】 ，见表1表 1 淋病奈瑟菌抑菌环直径解释标准（CLSI）Tab1 Explanatory standard of the diameter of bacteriostatic circles抑菌圈直径(mm)抗生素 纸片含量R I S青霉素 10U ≤26 27-46 ≥47四环素 30µg ≤30 31-37 ≥38环丙沙星 5µg ≤27 28-40 ≥41头孢曲松 30µg - - ≥35大观霉素 100µg ≤14 15-17 ≥18注：“-”尚不存在或罕见出现耐药菌株1.3 β-内酰胺酶测定方法采用产色头孢噻吩法 【4】 （纸片购于法国梅里埃公司）将待测淋球菌少许均匀涂于室温平衡的头孢硝基噻吩纸片上，1分钟内观察纸片颜色变化，变红者为β-内酰胺酶阳性，不变为阴性用β-内酰胺酶阳性和阴性质控菌株作对照2 结果2．1 产β-内酰胺酶淋球菌（PPNG）检测结果91株淋球菌中共检出38株PPNG株，阳性率为41.76％2．2 菌株对抗生素敏感性测定结果91株淋球菌对5种抗生素敏感性检测结果，见表1。

由表可见，91株淋球菌中青霉素耐药株63（69.23%）；四环素耐药株80（87.91%）；环丙沙星耐药株89（97.80%）头孢曲松耐药株较少，仅3株敏感性降低大观霉素的耐药株有5株，4株敏感性降低2.3多重耐药情况淋球菌的多重耐药结果，见表391株淋球菌多重耐药率达94.51%，同时耐青霉素、四环素有54株(59.349％)；同时耐青霉素、环丙沙星有59株（64.84%）；同时耐四环素、环丙沙星有80株(87.91％)；同时耐青霉素、四环素、环丙沙星的有53株(58.24％)表 1 淋球菌对五种抗生素敏感性检测结果：株数（%）Tab.2 The susceptibility of Neisseria gonorrhoeae to five antimicrobial agents抗生素（药物含量） 敏感(%) 中介(%) 耐药(%)青霉素（10U） 0（0） 28（30.77） 63（69.23）四环素（30µg） 3（3.30） 8（8.80） 80（87.91）环丙沙星（5µg） 0 (0) 2(2.20) 89(97.80)头孢曲松（30µg） 88(96.70) 3(3.30) 0 (0)大观霉素（100µg） 82(90.11) 4(4.40) 5(5.49)表 2 淋球菌临床分离株的多重耐药Tab.3 The Resistance rates of multiple-resistant isolates耐药种类 株数（%）青霉素+四环素 54（59.34）青霉素+环丙沙星 59（64.84）四环素+环丙沙星 80（87.91）青霉素+四环素+环丙沙星 53（58.24）多重耐药 86（94.51）3 讨论近年来，抗生素广泛且不合理使用可诱导淋球菌获得耐药性基因，不仅造成淋球菌的耐药性呈显著上升趋势，而且多重耐药菌株也日益增多 [5]。

本试验就山西地区2007年～2009年91株临床分离淋球菌对5种抗生素敏感性进行了测定，结果显示：淋球菌对青霉素的耐药率为69.23%，其中由质粒介导的高度耐青霉素的PPNG菌株为38株(41.76％)；对四环素的耐药率为87.91％；本地区2005年～2007年结果显示青霉素的耐药率74.6%，四环素的耐药率81.8%[1]，这表明山西地区淋球菌的流行株对这两种抗生素持续存在较高的耐药性水平，故不宜再作为治疗淋病的首先用药这可能与本地区青霉素，四环素长期以来用于预防和治疗性病的选择性压力有关1989年美国CDS推荐使用环丙沙星治疗淋病，1990年英国学者Gransden等人首先发现淋球菌对环丙沙星的敏感性降低 【6】 ，之后不断从世界各地淋病的临床病例分离得到对喹诺酮类抗生素耐药的菌株，而且随着喹诺酮类抗生素大量使用，淋球菌对环丙沙星的耐药性出现广泛的播散和流行我国上海地区2003年淋球菌对环丙沙星耐药率95% 【7】； 广州地区2003年淋球菌对环丙沙星耐药率93% [8]；陕西地区2006年淋球菌对环丙沙星耐药率94.12% [9]；南宁地区2001-2007检测结果显示淋球菌对环丙沙星的耐药率90.92%[10]。

本试验结果显示淋球菌对环丙沙星的耐药率为97.80%；同地区2005年～2007年的结果为89.1%，这表明山西地区淋球菌流行株对环丙沙星已达高耐药水平，不宜作为淋病治疗的首选用药文献报道这与gyrA和parC基因突变密切相关 [11]大观霉素是目前治疗淋病的一线药物根据西太平洋地区淋球菌耐药检测资料，大观霉素耐药株在西太平洋地区成散发性 【12】 ，我国淋球菌对大观霉素耐药率在1%左右 【13】 本次试验结果显示：5株耐大观霉素，4株敏感性降低，耐药率达5.49%，提示山西地区已出现耐大观霉素淋球菌株，应引起临床的高度警惕头孢曲松仍高度敏感(96.70％)，仅出现3株低敏菌株，可作为山西地区治疗淋病的首选药物，但要注意合理、规范用药，以免造成耐药菌株流行淋球菌的多重耐药使得淋病的治疗更加困难 [14]本研究发现91株淋球菌的多重耐药率达94.51%，同时耐青霉素、四环素有54株(59.349％)；同时耐青霉素、环丙沙星有59株（64.84%）；同时耐四环素、环丙沙星有80株(87.91％)；同时耐青霉素、四环素、环丙沙星的有53株(58.24％)；同地区2005年～2007年多重耐药率77.3%，说明山西地区淋球菌的多重耐药现象已十分严重，应引起临床的高度重视。

淋球菌多重耐药性与多重可传递耐药系统（mtr系统）的基因突变引起外排泵蛋白的表达和外膜孔蛋白的缺失密切相关 【15】 其直接原因可能与该地区性病患者自行用药或个体行医者用药剂量不规范（如小剂量多次用药），细菌长期在低剂量抗生素的作用。