三聚氰胺报告.docx

三聚氤胺及其检测方法三聚氤胺是一种重要的有机化工原料，其最主要的用途是作为生产三聚氤胺甲醛树脂 （ST）的原料本来三聚氤胺与食品或者饲料行业毫不相干，但不法商人在食品或饲料中添 加三聚氤胺（即所谓的“蛋白精”），主要是利用三聚氤胺的高含氮量66.7%）来提高 产品的表观蛋白质含量三聚氤胺事件变成社会热点话题是在07年3月份，美国因宠物饲料致死猫狗事件大量召 回被三聚氤胺污染的宠物饲料之后“蛋白精”愈演愈烈，2008年爆发了婴幼儿因食用了 含三聚氤胺的奶粉而致肾结石甚至死亡的恶性事件卫生部等五部门立即颁布了 “2008年 第25号乳制品及含乳食品中三聚氤胺临时管理限量值规定”的公告，规定：婴幼儿配方乳 粉中三聚氤胺的限量值为1mg/Kg，液态奶（包括原料乳）、奶粉及其他配方乳粉中三聚氤 胺的限量值为2.5mg/Kg因此建立快速的检测方法以确保食品的安全十分必要三聚氰胺1.1三聚氰胺的概念三聚氤胺（英文名Melamine），是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有 机化工原料简称三胺，又叫2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪、1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺、2,4,6- 三氨基脲、蜜胺、三聚氤酰胺、氤脲三酰胺，分子式CNH、CN NH，分子量126.12。

其3 6 6 3 3 （ 2）3结构式为：N人NH nAnAnhH?N N N H1.2三聚氰胺的性质（一）物理性质三聚氤胺性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573克/厘米3 （16°C）常压熔点354°C （分解）；快速加热升华，升华温度300C溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不 溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、毗啶等二） 化学性质呈弱碱性（PKb=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氤胺盐在中 性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氤胺，但在微酸性中（PH值5.5-6.5） 与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟 基取代，先生成三聚氤酸二酰胺，进一步水解生成三聚氤酸一酰胺，最后生成三聚氤酸三） 生物学性质三聚氤胺由德国化学家Justus von Liebig于1834年首次合成，是一种三嗪类含氮杂环 有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料经肠道吸收后哺乳动物肝脏不能转化代谢三聚氤 胺，最终三聚氤胺及其转化物三聚氤酸被血液运送到肾脏，随尿液排出体外在此过程中， 由于尿液浓缩作用，可能相互聚集或与钙形成结石，造成肾小管物理阻塞，继而形成肾结石， 导致肾脏积水，严重时导致肾功能衰竭。

四） 毒理学特性三聚氰胺对哺乳动物低毒大鼠连续2h吸入粉尘200mg/kg，未见中毒症状大鼠 80mg/kg〜100mg/kg, 2次/天，6次/周，连续4个月以上，现体重增加迟滞，中枢神经系 统及肾功能紊乱，肺内炎性改变等，长时间反复接触可对肾脏造成损伤OkumuraM等给 F344雄性大鼠饲喂不同浓度三聚氰胺饲料36周，结果证明饲喂含3%聚氰胺饲料能导致 F344鼠的膀胱结石形成，并且诱发膀胱肿瘤和输尿管肿瘤随着膀胱结石发生率的增加， 公鼠膀胱肿瘤发病率也呈现增加趋势，而且这两个发病率之间高度相关在2007年的宠物 食品中毒事件中，受害宠物被诊断发生了组织病理学、毒理学和临床病理学的变化对这些 动物进行的临床症状分析和实验室诊断均可确诊为尿毒症，具体症状包括食欲减退、呕吐、 昏睡、多尿症、氮血症以及高磷(酸盐)血症现有针对三聚氰胺的毒理试验也还只是停 留在动物实验上，没有针对人类的1.3三聚氤胺的主要用途(1) 装饰面板：可制成防火、抗震、耐热的层压板，色泽鲜艳、坚固耐热的装饰板，作飞 机、船舶和家具的贴面板及防火、抗震、耐热的房屋装饰材料2) 涂料：用丁醇、甲醇醚化后，作为高级热固性涂料、固体粉末涂料的胶联剂、可制作 金属涂料和车辆、电器用高档氨基树脂装饰漆。

3) 模塑粉：经混炼、造粒等工序可制成蜜胺塑料，无毒、抗污，潮湿时仍能保持良好的 电气性能，可制成洁白、耐摔打的日用器皿、卫生洁具和仿瓷餐具，电器设备等高级绝缘材 料4) 纸张：用乙醚醚化后可用作纸张处理剂，生产抗皱、抗缩、不腐烂的钞票和军用地图 等高级纸5) 三聚氰胺甲醛树酯与其他原料混配，还可以生产出织物整理剂、皮革鞣润剂、上光剂 和抗水剂、橡胶粘合剂、助燃剂、高效水泥减水剂、钢材淡化剂等6) 少量时可用于我们日常食用的点心中，如：桃酥7) 农业：在农业中三聚氰胺是用来加在化肥中的二、三聚氤胺的检测方法经大量文献的查阅，我总结了十三种用于检测三聚氰胺的方法，这些方法不仅仅局限于 原料乳及乳制品中的三聚氰胺，还包括宠物饲料等中三聚氰胺残留测定分别是气相色谱 质谱联用检测方法、高效液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-串联质谱法、超高效液相色 谱与质谱联用法、离子交换色谱-紫外检测法、酶标仪检测法、表面增强拉曼光谱法、电位 滴定法、重量法、苦味酸法、升华法、高效毛细管电泳法在气相色谱法中，常用气相色谱 -质谱联用法测定2008年10月7日，国家质量监督检验检疫总局、国家标准化管理委员会批准发布了《原 料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》(GB/T 22388-2008 )国家标准，标准自发布之日起实 施。

标准规定了高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)、气相色 谱-质谱联用法(GC-MS和GC-MS/MS)三种三聚氰胺的检测方法，检测定量限分别为2毫克 /千克、0.05毫克/千克和0.01毫克/千克各种方法各具优点和不足，应根据检测对象及其限 量的规定，选用与其相适应的检测方法在以下三种方法中，前两种分别选取了具代表性的 不同样品即原料乳及乳制品和宠物饲料中三聚氰胺进行了检测一)气相色谱-质谱联用检测方法(GC-MS) (GB/T 22388-2008国家标准规定方法) 1.1实验原理试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，将提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取 柱净化，用N, O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，然后采用选择离子监测质 谱扫描模式(SIM)或多反应监测质谱扫描模式(MRM)，用化合物的保留时间和质谱碎片的 丰度比进行定性分析，外标法定量GC- MS法的最低定量限为0.05mg/kgGC- MS法需要衍生 化处理，过程比较繁琐，但是灵敏度高，方法稳定目前国内多数分析实验室采用该方法分 析婴幼儿奶粉中的三聚氰胺1・2试剂与材料毗啶(色谱纯)；衍生化试剂(色谱纯)；乙酸铅溶液(22 g/ L)；氩气；甲醇色谱纯；乙腈:色谱 纯；氨水；三氯乙酸；柠檬酸；辛烷磺酸钠色谱纯；三聚氰胺标准品(CAS108278201):纯度 大于99. 0 %；微孔膜；海砂；甲醇水溶液；三氯乙酸溶液(1 %)；氨化甲醇溶液(5 %)；离子 对试剂缓冲溶液；三聚氰胺标准储备溶液；阳离子交换固相萃取柱。

1・3仪器设备气相色谱-质谱联用仪(气相色谱-质谱/质谱仪):配有电子轰击电离离子源(EI)分析天平： 感量为0. 0001 g和0. 01 g ;离心机:转速不低于4000 r/ min ;超声波水浴;固相萃取装置;氮气 吹干仪;涡旋混合器;具塞玻璃离心管;研钵1.4实验步骤1) 提取(液态奶、奶粉、酸奶、奶糖等)⑴ 称取5 g (精确至0.01 g)试样于50 mL，具塞玻璃离心管;(2)加入25 mL三氯乙酸溶液； ⑶涡旋30 s ;⑷ 加入三氯乙酸15 mL ;⑸ 超声提取15 min ; (6)加入2 mL乙酸铅;(7)三氯 乙酸定容至50 mL ; (8) 10000 r/ min离心10 min，上清液待净化2) 净化⑴ 将待净化的溶液准确转移5 mL至固相萃取柱中；⑵3 mL水淋洗;⑶3 mL甲醇淋洗； ⑷抽至近干;⑸3 mL氨化甲醇洗脱,收集淋洗液;(6)淋洗液于50 °C下氮气吹干待衍生化3 )衍生化在上述氮气吹干的残留物中加入600 p L毗啶和200p L衍生化试剂，混匀,70 C反应30 min，氮气吹干,准确加入800p L毗啶，供气相色谱2质谱及气相色谱2质谱/质谱定性定量分 析。

4) 仪器参考条件(1)色谱柱:5 %苯基二甲基聚硅氧烷石英毛细管柱,30 m X0. 25p m X0. 25 mm或者相当；(2) 载气流速:1. 0 mL/ min ;(3) 传输线温度:250 C;⑷ 进样口温度:250 C;⑸进样量:1p L ;(6) 进样方式:无分流；(7) 程序升温:70 C保持1 min，以10 C/ min的速率升温至200 C,保持10 min ;(8) 离子源温度230 C;(9) 扫描模式：选择离子扫描：定性离子m/ z99、171、327、342，定量离子m/ z 3275) 工作曲线的绘制将三聚氰胺标准溶液逐级稀释，配制成衍生物浓度为:0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、1、2 p g/ mL的标准溶液，气相色谱-质谱仪分析,以浓度与定量离子的峰面积作图,绘制标准工作曲线6) 定量测定待测溶液中三聚氰胺的响应值应在工作曲线的线性范围内,超过线性范围则应对净化液稀释, 重新衍生化后再分析7) 定性确证以标准样品的保留时间和监测离子(m/ z 99、171、327、342)定性，待测样品中4个离子 的丰度比相差不大于20 %8) 结果计算A x c x VxlOOOwF= H f (1)As x mxlOOO式中：£—— 试样中三聚钗胺的含量，单位为亳克每干克(mglg);A——样液中三聚机胺的峰面积；。

—— 标准溶液中三聚循胺的浓度，单位为微克每亳升(ligmL)；V——样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；瓦——标准溶液中三聚fit胺的峰面积；用 试样的质量，单位为克(g);/一稀释倍数.9) 空白实验除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行二)高效液相色谱法(HPLC)(GB/T 22388-2008国家标准规定方法)高效液相色谱法相比气质联用法简便、快速，适用于食品中含量较高的三聚氰胺的定量 分析，且有许多研究致力于用高效液相色谱法测定宠物饲料中的三聚氰胺，因此在介绍高效 液相色谱法时以宠物饲料为原料2.1实验原理HPL C的原理是，试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，将提取液离心后经混合型阳 离子交换固相萃取柱净化洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定 HPLC的最低定量限为2mg/kg测定时间约为10min，操作简便，结果准确，但不能满足国家 关于婴幼儿奶粉中三聚氰胺的限量要求辜雪英等建立了饲料中三聚氰胺残留量的高效液相色谱分析方法样品经反相柱分离后 采用波长为245 nm的紫外检测器进行检测，该方法具有准确、快速、高效的特点张美金等 建立了高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中三聚氰胺的含量。

饲料和宠物食品中三聚氰胺 的定量检测限是1.0 mg/ kg，添加水平为1. 0 mg/ kg时，样品加标回收率为81 %〜105 %,RSD < 10 %赵永彪等建立了测定宠物食品中三聚氰胺的高效液相色谱分析方法以10.0 mmol/ L 的庚烷磺酸钠(用HCl调节p H3. 0)-乙月青(90 : 10)为流动相，在236 nm波长下检测三聚氰 胺含量以下为一种测定宠物饲料样品中三聚氰胺的测定方法2.2仪器与条件Agilent 1 100高效液相色谱仪(美国，Agilent公司)；二极管阵列检测器(DAD)，检测波长 240nm，柱温:40 °C1) Agela Ve。