吸附重金属镉优势菌的筛选及鉴定.docx

吸附重金属镉优势菌的筛选及鉴定摘要:随着工农业的发展，重金属污染越来越受到人们的关注本 研究以受重金属污染的土壤及生活污水处理厂污泥为原料，从中筛选 驯化出抗镉菌株各一株，编号A、B,其结果显示,A抗镉浓度可达为 547.5 mg/L,B 抗镉浓度可达 438 mg/L关键词:微生物镉筛选鉴定随着工农业的发展，采矿、冶炼、电镀等行业向环境中排放了大 量的重金属离子,引起环境和生态恶化，其中镉是污染程度最严重的重 金属之一据统计，在过去半个世纪里，全球排放到环境中的镉达到 22000[1]p样品1:采自内江市某电镀厂边缘的土壤样品2:采自某生活污水处理厂的活性污泥1.2主要仪器主要仪器:BT224S型电子分析天平；LRH-150F型生化培养箱; YXQ-LS-50 SLL立式压力蒸汽灭菌器；SW-CJ型超净工作台； 摇床1.3培养基牛肉膏蛋白胨固体培养基:牛肉膏0.5 g、蛋白胨1.0 g、0.5 g NaCl、琼脂15 g、去离子水定容至100 ml,调节pH为7.2~7.4豆芽汁葡萄糖培养基:黄豆芽10 g、葡萄糖5 g、琼脂1.5〜2.0 g,去离子水定容至100 ml,自然pH 1.4方法(1) 选择最适培养浓度。

称取5 g 土壤鲜样加到15 ml灭菌水中，置于摇床振荡10 min吸 取悬浮液0.1 ml、无菌水0.9 ml加入无菌试管中，此时菌悬液浓度为 10-1以浓度为10-1菌悬液为基准液，采用逐步稀释法,配制浓度分别 为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6的菌悬液；吸取不同浓度的菌悬液 各0.1 ml于相应的培养基中，涂布均匀，置于培养箱中28 °C培养48 h 后，观察培养基中微生物的生长状况，选取生长单菌落数量合适的相应 浓度作为最适培养浓度按上述方法制备污泥悬浮液，并选取最适培养浓度［3］2) 菌株的分离取最适培养浓度悬浮液涂布于Cd(II)浓度为43.8 mg/L的牛肉蛋 白胨培养基上，至于恒温培养箱中培养,48 h后观察平板上的菌落，挑取 单个菌落进行划线培养，重复三次以上,直到在显微镜下观察为纯菌 ［4］3) 菌株的驯化将纯化后长势最好的单菌落转接到Cd(II)浓度为43.8 mg/L、87.6 mg/L、219 mg/L的牛肉蛋白胨培养基上，培养3 d后,选取在219 mg/L中长势最好的单菌落继续转接到 Cd( II)浓度为328.5 mg/L、438mg/L、547.5 mg/L的牛肉蛋白胨培养基上，培养3 d。

4)抗性菌株的鉴定① 个体形态特征:采用革兰氏染色法染色，镜检观察其个体形态特 征② 群体形态特征:将菌株接种于牛肉蛋白胨固体培养基,28 °C培 养2 d,观察单菌落特征2结果与分析2.1菌株的分离土壤及污泥悬浮液经浓度梯度为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、 10-6平板培养分析后,均选取浓度为10-5的悬浮液为最适培养浓度 在该浓度下培养微生物并纯化培养，从土壤中分离出抗性菌3株，编号 A1、A2、A3,从活性污泥中分离出抗性菌两株，编号B1、B22.2菌株的驯化当培养基中Cd( I)浓度为43.8 mg/L、87.6 mg/L时，菌株A1、A2、 A3均生长良好,Cd(I)浓度继续增大,A2、A3相继被淘汰,A1表现出 明显优势，仍然生长良好Cd(I)浓度为547.5 mg/L时,A1生长受到抑 制,Cd(I)浓度继续增大,A无法正常生长B1、B2的驯化过程中,Cd(I)浓度增加至219 mg/L时,B2无法正常生长，加大Cd(II)浓度，得B1最 高耐Cd( II)浓度为438 mg/L2.3菌株的鉴定A1、B1经试验鉴定如表1所示由表1鉴定操作初步推断A1为革兰氏阴性短杆菌,B2为黄杆菌。

3结论采用微生物分离纯化技术，从受重金属污染土壤及活性污泥中各 分离出对Cd(II)具有高抗性的菌株A1、B1,A1最高耐Cd(II)浓度在 547.5 mg/L左右、B1最高耐Cd(I)浓度在438 mg/L左右,A1菌株的 耐性要高于B1菌株经初步鉴定,A1为革兰氏阴性短杆菌,B1为黄杆 菌通过对菌株A1、B1的形态学的观察，为菌株A1、B1的分类鉴定 奠定了基础参考文献[1] 孙铁珩，李培军,周启星.土壤污染形成机理与修复技术 [M].北京:科学出版社,2005.[2] 胡振琪.重金属污染土壤的粘土矿物与菌根稳定化修复技术[M].北京:地质出版社,2006.[3] 刘彧.污泥中耐镉微生物的筛选与鉴定[D].西南大学硕士学 位论文,2007[4] 曾晓希，胡岳华，柳建设，等.中华根瘤菌NL的筛选与鉴定[J]. 湖北农业科学,2007 (2)： 30-32.[5] 江澜.教学中革兰氏染色两种方法的比较研究[J].生物学通 报,2000,35(11):38.。