《固定化酶试验》PPT课件.ppt

n n基本要求1.制作固定化-淀粉酶2.进行淀粉水解的测定n n发展要求通过此实验探讨固定化酶的应用价值实验原理实验原理n n固定化酶就是将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂n n介质本身是不溶于水固定化酶的优点固定化酶的优点n n管道化、连续化、自动化n n酶不溶解在催化反应的溶液中，产物更易纯化n n可反复使用n n可较长时间地贮存和使用固定化酶的固定方法固定化酶的固定方法n n吸附法n n偶联法n n交联法n n包埋法吸附法吸附法n n物理吸附法酶蛋白分子吸附在惰性载体（不引起变性且能保持酶活力的载体）n n离子交换法利用蛋白质分子上带电荷基团（氨基、羧基）与离子交换剂形成离子键，再被交换结合至载体上优点：适用的酶范围广，酶活性高缺点：酶与载体的结合力较弱，酶容易脱落偶联法（载体偶联法、共价偶联法）偶联法（载体偶联法、共价偶联法）n n酶蛋白上的一些基团（如羧基、巯基、咪唑基等）能在温和条件下与载体共价结合，从而被固定化n n结合部位必须不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团优点：结合稳定，适用范围广缺点：操作复杂，条件不够温和，酶活性较低交联法交联法n n交联法是指通过双功能试剂，将酶和酶联结成网状结构的方法。

n n结合部位也不是酶的活性中心，也不是维持其空间结构的必需基团 n n优缺点与偶联法基本相同包埋法包埋法n n包埋法是将酶蛋白包埋在凝胶交联后的“格子”中n n优点：适用范围不广，酶活性高，稳定性也较高淀粉酶的固定化实验淀粉酶的固定化实验n n载体：石英砂载体：石英砂n n固定原理：吸附法（物理吸附法）固定原理：吸附法（物理吸附法）淀粉：遇碘蓝色淀粉：遇碘蓝色（ 经经-淀粉酶催化）淀粉酶催化）糊精：遇碘红色糊精：遇碘红色（经（经-淀粉酶催化）淀粉酶催化）麦芽糖：遇碘不变色（棕黄色）麦芽糖：遇碘不变色（棕黄色）（经糖化淀粉酶、麦芽糖酶催化）（经糖化淀粉酶、麦芽糖酶催化）葡萄糖葡萄糖PsPs：碘液是：碘液是KI-IKI-I2 2的溶液的溶液n n淀粉酶和石英砂混合后，搅拌30minn n加入注射器后，用大于10倍体积的蒸馏水洗涤注射器以除去未吸附的游离淀粉酶n n确定洗涤后收集到的液体中不再含有淀粉酶n n放尽剩余的蒸馏水后关闭液体阀n n控制流速加入可溶性淀粉溶液和收集反应后的溶液n n检测反应效果经过固定化酶柱的淀粉溶液淀粉溶液。