实验诊断学实验一血液学一般检查
21页1、实 验 一,实验一 血液学一般检查,内容 血红蛋白测定(氰化高铁血红蛋白测定法) 白细胞计数(White Blood Cell Count),实 验 一,1.血红蛋白测定-氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法,该法具有操作简便,结果稳定可靠,试剂容易保存等优点,被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法,为我国测定血红蛋白首选方法。,血液在血红蛋白转化液中溶血后,血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白(Hi),后者与氰离子(CN-)结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白(HiCN)。在特定波长(540nm)和光径(比色杯内径1.0cm)条件下具有一定的吸光度,通过用标准液制备的标准曲线,可求出血红蛋白浓度来。,原 理,Hb Hi+ CN- HiCN,K3Fe(CN)6,试剂 血红蛋白转化液(文齐氏液): 氰化钾(KCN) 0.05g 高铁氰化钾K3Fe(CN)6 0.20g 无水磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.14g Triton X100 1.0ml 蒸馏水 加至1000ml,器材 1.血红蛋白吸管,5ml吸管 2.大试管 3.722分光光度计,上述试剂为淡黄色
2、溶液,贮存于棕色瓶中室温保存,其中非离子表面活性剂可加速溶血,缩短转化时间,防止因血浆蛋白改变引起的混浊,标本来源 EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血,实 验 一,操作,1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。,2.用血红蛋白吸管吸取全血20l,轻拭管尖外余血,并准确调节血柱液面至20l。加入到准备好的血红蛋白转化液底部,并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液,充分混匀,静置5分钟。,3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定,波长540nm,光径1.0cm。,4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量,实 验 一,将HiCN标准液倍比稀释(如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L)后,在所用的分光光度计上540nm处,光径1.0cm,以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=Hb/A)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度(Hb=KA)。,附HiCN标准曲线绘制和K值计算:,实 验 一,参考值 成年男性: (120160)g/L 成年女性: (11015
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