实验二 凝集、沉淀反应
22页1、实验二 凝集、沉淀反应,实验目的,1.熟悉凝集反应、沉淀反应的概念。 2.了解单向琼脂扩散实验的原理、方法及应用。 3.掌握直接凝集反应玻片法的原理、方法及其用途。 4.掌握双向琼脂扩散实验的原理、方法、结果判断。,1.直接凝集反应:颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈现的肉眼可见的凝集现象。 。 2.沉淀反应:可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结合而出现的沉淀现象。,实验原理,伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、记号笔、酒精灯;琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清(兔抗人AFP )等。,实验材料,实验内容 1.直接凝集反应:玻片法(操作) 2.沉淀反应: (1)单向琼脂扩散试验(示教) (2)双向琼脂扩散试验(操作),抗原抗体反应又称血清学反应,主要有: 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与反应 4、中和反应 5、免疫标记技术,常见抗原抗体反应的种类,一、凝集反应 (一)概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合,在一定条件下,出现肉眼可见的凝集物,称为凝集反应。,颗粒性Ag 又称凝集原 相应Ab 又称凝集素,原理 玻片凝
2、集试验是一种快速简便的检测方法,即抗原抗体的反应在玻片上进行,是一种定性的试验。用已知抗体检测未知抗原。 本试验用已知的伤寒杆菌标准诊断血清鉴定未知细菌。,直接凝集反应玻片法-菌种鉴定,材料,伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、载玻片、接种环、蜡笔、酒精灯等。,取洁净玻片1张,用蜡笔划分2等份,如下图所示 ; 无菌操作,用接种环分别于一、二格内各加23环伤寒杆菌诊断血清、生理盐水; 用接种环取待测菌液,分别涂布于生理盐水和伤寒血清中,混匀; 轻轻摇动玻片,12分钟后观察结果。,操作步骤,生理盐水 待测菌液 阴性,伤寒血清 待测菌液 ?,直接凝集反应玻片法-菌种鉴定,盐水侧无凝集颗粒; 血清侧出现肉眼可见的凝集块为阳性,仍为均匀一致乳浊液者为阴性。,注意事项 1、接种环在伤寒菌液取菌前后均需严格灭菌,以免出现假阳性。 2、注意涂菌时,先涂生理盐水侧,以免污染血清产生错误结果。 3、摇动玻片时不要把两凹内液体混在一起。,结果及判断,直接凝集反应玻片法-菌种鉴定,经典抗原抗体反应的一种。 分类: 琼脂扩散 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 免疫电泳,二、沉淀反应:,沉淀线或沉淀环,可溶性抗原
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