课题一-微生物的实验室培养-课件
45页1、课题1 微生物的实验室培养,专题2 :微生物的培养与应用,了解有关微生物及培养基的基础知识,进行无菌技术的操作,进行微生物的培养。,一、知识目标:,掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术,熟练、规范地进行无菌操作,成功地培养微生物。,无菌技术的操作。,三、课题重点和难点:,二、技能目标:,一、基础知识:,(一)培养基,人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。,(1)按物理状态分:固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴定菌落、活菌计数等,液体培养基常用于发酵工业。 (2)按功能分:选择培养基和鉴别培养基。 (3)按成分分:天然培养基和合成培养基。,1.培养基的类型和用途,液体培养基与固体培养基,选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞.使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物,天然培养基有血清、血浆、和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)。 优点:
2、营养成分丰富,培养效果好 缺点:来源受限;成分复杂,影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;,根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点:标准化生产,组分和含量相对固定;成本低 缺点: 缺少某些成分,不能完全满足体外细胞生长需要。,合成培养基:,天然培养基:,2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 (参考教材附录内容),3.不管哪种培养基,一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、等营养物质, 另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需,而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气等的要求。,二、无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指在培养微生物的操作中,所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作,还是稀释涂布平板法,其操作中的每一步都需要做到“无菌”,即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作,才可能成功地培养微生物。,()消毒定义: 指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部
3、一部分对人体有害的微生物。(不包括芽孢和孢子),2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,芽孢,有些细菌在一定的条件下,细胞里面形成一个椭圆形的休眠体,叫做芽孢。芽孢的壁很厚,对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如,有的细菌的芽孢,煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻,可以随风飘散。当环境适宜(如温度、水分适宜)的时候,芽孢又可以萌发,形成一个细菌.,孢子,在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新个体。,(2)灭菌的定义:,使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子,而达到完全无菌之过程。 灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法:70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ,(1)消毒的方法:,3.常用的消毒与灭菌的方法,1、灼烧灭菌,(2)灭菌的方法:,2、干热灭菌:160-170 下加热1-2h。,3、高压蒸气灭菌:100kPa、121 下维持15-30min.,最常用的灭菌方法
4、是高压蒸汽灭菌,它可以杀灭所有的生物,包括最耐热的某些微生物的休眠体,同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌,特别是空气中的杂菌污染,试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口,通常采用棉花塞,也可采用硅胶帽,它们只可让空气通过,而空气中的其他微生物不能通过。,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。 (1) 培养细菌用的培养基与培养皿 (2) 玻棒、试管、烧瓶和吸管 (3) 实验操作者的双手,答:无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,答:(1)、(2)需要灭菌;(3)需要消毒。,旁栏思考,三、实验操作,1.制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌),牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5g 将上述物质溶解后,用蒸馏水定容至1000ml,调节PH为7.07.2。在肉汤培养基中加入1520g的琼脂,即制成牛肉膏蛋白胨固体培养基。,1计算 2称量 3溶化 4灭菌 5倒平板,操作步骤,倒平板技术,1.培养基灭菌后,需要冷
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