微生物的分离与培养技术原理及其应用

1、,2016届高三生物二轮复习,微生物的分离与培养,一、培养基的营养构成与类型划分,水、无机盐、碳源和氮源,还要满足特殊营养物质（生长因子）、氧气以及温度、PH要求。,固体培养基,琼脂,分离、纯化、鉴定、计数,合成培养基,选择培养基,鉴别培养基,分离筛选特定微生物,鉴别不同微生物,尿素作为唯一氮源,酚红指示剂,细菌合成的脲酶将尿素分解生成氨。使培养基的碱性增强，pH升高，指示剂变红,纤维素作为唯一碳源,刚果红染色法,刚果红与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素复合物不能形成（或红色消失），培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。,四种纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明圈,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂培养基上的黑色带金属光泽的菌落,二、 操作技术 微生物分离培养成功关键（消毒与灭菌） 1、实验操作者双手： 2、接种环、接种针或试管口、瓶口： 3、锥形瓶、培养皿： 4、培养基： (不能采用干热灭菌),无菌,70%酒精消毒,灼烧灭菌,干热灭菌和高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）,高压蒸汽灭菌,【例题1】为了获得-胡萝卜素产品,某小组开展了产-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取

2、实验。请回答下列问题：,（1）实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是 ；为了防止冷凝水渗入及减少灭菌后器皿或培养基被污染，灭菌前应该 。 (2)为了筛选出酵母菌,培养基中添加了青霉素，其目的是 。,干热灭菌和高压蒸汽灭菌（湿热灭菌）,牛皮纸或几层报纸包扎紧,抑制细菌生长,高压蒸汽灭菌锅,压力表,安全阀,放气阀,灭菌桶,排气软管,【例题1】为了获得-胡萝卜素产品,某小组开展了产-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：,(3)右图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙依次是 。(填序号) 安全阀、放气阀、压力表 放气阀、安全阀、压力表 安全阀、放气阀、温度表 放气阀、安全阀、温度,【例题1】为了获得-胡萝卜素产品,某小组开展了产-胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：,（4）为了将分离到菌株纯化,挑取菌落在3块相同平板上划线,结果其中一块平板各划线区均未见菌生长，最可能原因是 。 （5）为增加-胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是 ；研磨时 (填“需要”或“不需要”) 添加CaCO3，理由是 。,接种环温度过高，菌被杀死,研磨充分,不需要,-胡萝卜素

3、较耐酸（较稳定）,计算,大肠杆菌的分离纯化培养,（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,称量,溶化(调节PH),灭菌,倒平板（50）,倒平板（50）,防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染；使培养基表面的水分更好地挥发,平板倒置,平板冷凝,打开一条缝隙,倒平板（50）,大肠杆菌的分离纯化培养,（二）分离纯化大肠杆菌,方法一、平板划线法,方法一、平板划线法,单菌落,丙,甲,乙,（一）系列稀释操作,101,102,103,104,105,106,移液管,移液管吸取菌液稀释时，轻压橡皮头，吹吸三次的目的是？,使菌液与水充分混匀,方法二、稀释涂布平板法,（二）涂布平板操作,【例题2】 微生物的分离和培养是现代生物工程应用中的重要环节。据此回答： （1）甲操作称为 ，指出乙、丙操作的错误：乙 ，丙 。 （2）判断：固体培养基上由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体叫做 ，属于生命系统的 层次。,倒平板,未在酒精灯火焰附近（旁）划线,最后一区域划线与第一区域相连,菌落,种群,（3）判断： 不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落（ ） 打开含菌种的试管需通过火焰灭菌（ ） 溶化时将称好的牛肉膏从称量

4、纸上直接倒入烧杯（ ） 熔化琼脂时，需要用玻璃棒不断搅拌以防止糊底（ ） （4）分散细菌得到单菌落 法比 法效果更好。,稀释度足够高的,口,连同称量纸一同,稀释涂布平板法,平板划线法,平板划线法,稀释涂布平板法,研究者得到一个经培养后菌落分布如图所示的平板，推测接种时可能的操作失误？,涂布不均匀,（5）每次划线前和划线后，接种环都要通过灼烧灭菌，完成右图丙的划线操作， 共需灼烧接种环_次。灼烧接种环之后，要冷却后再进行划线操作的原因是 。 （6）第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是_，多次划线的目的是 。,6,以免接种环温度过高，杀死菌种,末端细菌数目比起始端少,使细菌数目随划线次数增加逐渐减少，以便分离得到单菌落,（7）右图是某同学修正丙操作后的正确的“微生物平板划线”示意图。划线顺序为12345。下列有关叙述中正确的是（ ）,D,大肠杆菌的分离纯化培养,（三）分离纯化后培养,未接种培养基 接种培养基,无菌落产生,有菌落产生,1、对照培养方法：将 。 2、对照培养结果： 若未接种培养基上 ， 接种培养基上 ， 则说明符合要求。,（三）分离纯化后培养,未接

5、种培养基和已接种培养基都放入适宜温度恒温箱中培养适宜时间观察结果,无菌落产生,有菌落产生，且菌落颜色、形状、大小基本一致并符合大肠杆菌菌落特点,土壤“纤维素分解菌”的分离与筛选,土壤“尿素分解菌”的分离与计数,稀释涂布平板法,【实验设计】,土壤取样,选择培养*,样品稀释（梯度稀释）,将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,挑选产生透明圈的菌落,什么样的环境取样?,选择培养的目的? 液体培养基,（2）分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是（ ） A.经选择培养 后将样品涂布在鉴别纤维素分解菌的培养基上 B.选培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少 C.经稀释涂布培养后，用刚果红染色 D.对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上,样品稀释（梯度稀释）,A,【实验设计】,土壤取样,选择培养*,样品稀释（梯度稀释）,将样品涂布在选择尿素分解菌的培养基上,统计菌落数 计数细菌数,什么样的环境取样?,选择培养的目的? 液体培养基,观察菌落,同种微生物菌落特征：颜色、形状、大小、隆起程度（突起）、边缘等方面基本一致，这些都是区分细菌的重要手段。,土壤“尿素分解菌”的分离与计数,【样品稀

6、释】,【平板涂布】,【统计菌落】,【计数菌数】,90mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌水,【样品稀释】,用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，几位同学分别得到以下几种统计结果： A同学：涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B同学：涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260 ，取平均值238,C同学：涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、 212和256，取平均值163 D同学：涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、 240和480，取平均值310,E同学：涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、 240和250，取平均值233,90mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌水,0.1mL,0.1mL,0.1mL,至少涂布3个平板；菌落数目在30-300个之间的平板最适宜计数,【平板涂布与菌落统计】,设置对照实验,判断选择培养基中是否有杂菌污染：,未接种培养基（对照组）与接种培养基同时进行培养，若对照组无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。,判断选择培养基是否具有筛选作用：,牛肉膏蛋白胨培养基（对照组）与尿素选择培养基都接种后同时培养，观察两种培养基上菌落数目，若对照组培养基菌落数目明显大于选择培养基（实验组）的数目，说明起到了筛选、选择作用。,不加尿素的培养基（对照组）与尿素选择培养基都接种后同时培养，对照组培养基细菌不生长，菌落数目明显少于选择培养基（实验组）的数目，说明起到了筛选、选择作用。,90mL无菌水,9mL无菌水,9mL无菌水,0.1mL,0.1mL,0.1mL,240个,如何根据平板上统计的平均菌落数推测计数出原来每克样品中的活菌数（菌株数）？,每克样品中的活菌数(CV)M,

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