性传播疾病的实验诊断课件

1、性传播疾病的实验诊断,第一节 概述,一、概述 二、重点介绍艾滋病、梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、生殖器疱疹、尖锐湿疣、软下疳、性病性淋巴肉芽肿的临床检测方法及临床意义；,2个概念,性病（VD）： 是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。4种 性传播疾病（STD）： 是指通过性接触可以传染的一组传染病,在 我国,人们简称为性病 。包容20余种,概述,历史上：（传统） 把通过性活动传染的疾病称为性病 （Venereal diseases, VD） 主要指: 梅毒(syphilis) 淋病(gonorrhea) 性病肉芽肿 软性下疳四种 又称经典性病,概念更新,上世纪年代以来发现：许多病原体也可 以通过性生活传播 迄今为止大约已发现余种性病 同时：四种性病大都有了明确诊断手段及治 疗方法，明显地得到了抑制 1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。 （Sexually transmitted diseases, STD）,我国重点防治的性病,艾滋病(AIDS):获得性免疫缺陷综合症，HIV 梅毒(syphilis)：由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播疾病 尖

2、锐湿疣(condyloma acuminatum)：由人乳头瘤状病毒（hpv）引起 淋病(Gonorrhea)：淋病奈瑟菌 生殖器疱疹(genital herpes)：由单纯疱疹病毒感染 非淋菌性尿道炎(NGU)：沙眼衣原体和解脲脲原体 软下疳(chancroid)：杜克嗜血杆菌所致生殖器部位 性病性淋巴肉芽肿(lymphogranuloma Venereum)：由沙眼衣原体引起，第四性病,STD的诊断： 病史接触史 临床表现 实验室检查 STD监测和疗效判断的重要依据 实验室检查,一、艾滋病的实验室诊断,理论依据大量血清学流行病学资料: V几周IgM抗体出现很快IgG抗体出现并一直存在（无免疫源性） 实验目的：检测抗HIV抗体（ IgG 主） 用于诊断实验： HIV血清学初筛试验 HIV血清学确证试验,HIV血清学初筛试验,一、酶联免疫吸附试验 ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观察结果,初筛实验方法,明胶颗粒凝集试验

3、（PA） 双抗原夹心法：p24抗原 免疫荧光试验(IFA) 标本要求：新鲜全血2 ml ，无抗凝,确证实验方法,二、免疫印迹试验 基本原理：HIV全病毒抗原经过PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后, 抗体结合带呈现紫褐色。,临床意义,初筛试验： 阴性结果: 基本可排除HIV感染，必要 时2-3月复查 阳性结果: 其它初筛方法重复试验， 阳性报告HIV抗体待查， 进一步做确证试验 确诊试验： 结果阳性的标本可报告HIV抗体阳性,其它相关试验,用于预后及抗病毒治疗疗效观察实验室指标的检测 ： 1CD4+细胞和CD8+细胞计数 CD4+淋巴细胞正常值为500-1600个/ul,CD4+/CD8+的正常比值为（1.5-1.7）：1 2病毒载量测定(viral load, VL

4、) 实际上，体内复制的病毒的数量是不能直接测量的，一般用血浆中HIV RNA的拷贝数代表HIV的病毒载量。HIV病毒载量与疾病进展速率和预后有强相关关系，,其它相关试验,P3实验室： 病毒分离培养 相关抗原检测,二、梅毒的临床分期,后天梅毒 ： 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒(晚期梅毒) 先天梅毒,梅毒一期皮损-硬下疳,梅毒二期皮损,梅毒晚期损害,二、梅毒的实验室诊断,梅毒：由梅毒螺旋体梅毒亚种所致慢性性传播 疾病。 检查病原体的试验 测抗体血清学检查,检查病原体的试验,暗视野显微镜检查法（WHO推荐） 临床意义：直接检查到 梅毒螺旋体，可确证梅毒； 是早期梅毒检测最好的方法。,梅毒螺旋体抗体检测,两组试验： 1.非密螺旋体抗原试验（初筛） 2.密螺旋体抗原试验 （确证） 两组试验的目的都是检测抗体 非密螺旋体抗原试验（抗-脂质抗体-非特异性） 密螺旋体抗原试验（抗-梅毒螺旋体抗体-特异性）,非密螺旋体抗原血清学试验,方法： 1.性病研究实验室试验VDRL 2.不加热血清反应素试验USR 3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR 4.甲苯胺红试验TRUST,四种初筛方法,原理： 当人体感染梅

5、毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG) 目的： 抗-脂质抗体,四种初试验筛方法的比较,密螺旋体抗原血清学试验,原理：人体感染梅毒螺旋体后会产生特 异性梅毒螺旋体抗体，可通过检测该抗 体对梅毒进行诊断。,密螺旋体抗原血清学试验,1.梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA） 2.梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 快速、简便、准确而青睐 3.荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS) 4.梅毒螺旋体抗体酶联免疫吸附试验（ TP-Ab ） 它用双抗原夹心法，同时检测IgM/IgG抗体，故可用 于早期诊断，并避免了单片段抗原混合干扰,其他实验,免疫印迹法： 是一种诊断梅毒感染的特异性实验， PCR试验： 多聚酶链反应检测梅毒螺旋体DNA,三、淋病(gonorrhea),淋病：由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系统 化脓性炎症。是八种性病中发病人数最多 的一种。 可入侵泌尿生殖道其他部位附睾、前列腺炎、输卵 管炎及盆腔炎甚至经血液传播全身其他部位淋菌性关 节炎、心内膜炎及脑膜炎等。,淋菌性尿道炎,淋病的实验室检查,1、涂片染色 革兰阴性卵圆形

6、或肾形， 成双排列。有些脓细胞内可 有许多淋球菌 2、分离培养及鉴定,新生儿淋菌性结膜炎,实验室诊断步骤,淋菌感染 男性患者 女性患者 尿频、尿急、尿道分泌物 脓性宫颈分泌物/无症状 脓性分泌物涂片G-染色 拒绝做 G-双球菌细胞内 取宫颈分泌物 初步诊断 MTM培养基培养 治疗 典型菌落形态 G-双球菌、OX(+)、糖发酵试验 确诊,培养标本采集,关键是深度一定要够 男性取材：拭子深入尿道2cm-4cm处并转动 蘸取少量粘膜 女性取材：子插入宫颈12厘米处稍转动并停留10秒30秒，以获得上皮细胞，取出棉拭子时不要碰到阴道壁避免受阴道分泌物污染,其他相关试验,1.直接免疫银光染色 2.SPA协同实验 3.酶反应 4.固相酶免疫试验,四、非淋菌性尿道炎-NGU,病因： 沙眼衣原体CT（DK）40%50% 支原体（UU、MH）20%30% 阴道滴虫、白念和10%20%,NGU-CT检测,血清学试验对诊断衣原体感染价值有限 1.迄今止尚无哪一种试验完全适合所有种类的CT的检测 2.CT感染轻微，潜伏期长，影响急性期采血时间配对血清难 以得到 3.血清抗体持续时间长，单一血清标本只能显示曾经感

7、以前染过CT 4.双份血清效价比有4被增高才有临床意义,NGU-CT检测方法,1.细胞涂片的吉姆萨染色-发现一定数量的包涵体（原体呈紫色，包涵体呈金黄色）,NGU-CT检测方法,2.涂片碘染色法：包涵体中有糖原遇碘呈棕色，敏感性 差，不适用于NGU 3.直接免疫荧光法染色：敏感性93%，特异性96与 培养并列为金标准对试剂，显微镜质量要求很高， 操作人员技术要求高，价格昂贵 4.衣原体酶免疫测定EIA：抗CT单抗包被固相载体+ 标本再+多克隆抗体+IgG酶标抗体酶标仪检测 适用于批量筛查NGU衣原体感染 5.衣原体分离培养：McCoy、Hela、 BHK-21细胞培养,NGU-CT检测方法,6.PCR 7.“立明“（Clearview)衣原体快速免疫测定法： 原理：沙眼衣原体检测试剂盒采用高特异性的抗体 抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测临 床标本中是否含有沙眼衣原体抗原。 该试验是目前诊断NGU衣原体感染普遍采用的方法,沙眼衣原体胶体金法,检验原理： 用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和胶体金标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂

8、，应用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法。,Colloidal gold immunochromatography strip,0755-83376489,检验结果的解释,阴性结果：仅质控线（C）有一条红线。 阳性结果： C 和T 都有一条红线。 无效结果：质控线不出现红线。 注意：检测线很强时，质控线可能相对减弱，属正常现象。,注意事项,1试验敏感性87%,特异性98.8%，但标本中需要有 一定的抗原量，量低于敏感性可出现假阴性； 2.检测试剂盒仅证明标本中存在沙眼衣原体抗原， 不能区别是衣原体感染还是携带者，也不能区别 衣原体死活，不能作为判愈试验； 3.标本采集是关键,NGU-支原体感染,非淋支原体感染：UU为主，MH次之 我国报道7个地区健康人携带率 解脲支原体（UU）占10.59% 人型支原体（MH）占5.34% 正常菌群的组成部分,支原体检测方法,1.分离培养 2.聚合酶链反应-PCR/DNA探针技术诊断 3.血清学检测：代谢抑制试验、ELISA、间接免疫荧光 都仅用于科研和流行病学调查上，不适于诊断用,支原体培养,固体培养基：生长耗时5天左右 液

9、体培养基-原理： UU尿素氨 PH 含酚红培养基由黄红 MH精氨酸氨 PH 含酚红培养基由黄红,生殖道支原体,方法,R1,R2,运送,溶解,R1+R2,接种试剂条(55 l) + 2滴矿物油,O Uu Mh Uu Mh 104 104 4 2 1 1 4 1 0.12 1 2,Mycoplasma IST2,37C培养2448 h,红色 阳性 (+) 黄色 阴性 (-),五、生殖器疱疹实验室检查,病因：单纯疱疹病毒HSV SHV-1主要感染上半身部位（15岁以下多） SHV-2主要感染腰以下部位（多见于青春期后）,生殖器疱疹检查方法,病原体检查： 1.病毒体外细胞培养和鉴定： 技术条件要求较高，不宜用于临床 2.单纯疱疹病毒抗原检查 (1）ELISA (3）DNA杂交 (2)IFA (4）PCR PCR和DNA不能单独作为确诊指标 病原学检查ELISA有敏感性高，特异性强，准确率高应用面广，操作简便等优点,生殖器疱疹检查方法,血清学检查-抗体检测： 所有用于检测抗原的方法经适当改良后，均可用于抗体检查 SHV感染个体中的不均一性和不稳定性成年人群中有很高的HSV 抗体检出率，大多获自隐性感染，且抗体的存在尚不能完全保护机体免受疱疹病毒的重复感染; HSV 抗体检测阳性对临床诊断帮助不大; 对新生儿、婴幼儿感染诊断有一定意义,六、尖锐湿疣实验室检查,病因：人类乳头瘤病毒-HPV 发病率：持续增长，我国急剧上升，已占 各种性病第二位,六、尖锐湿疣实验室检查,尖锐湿疣检测： 典型的尖锐湿疣通常不需作实验室检测便可作出诊断 临床医生观察为主 醋酸白试验有助于检查不明显的疣,尖锐湿疣检查方法,1.细胞学检查 ： 病理皮损活检:发现有HPV感染的特征性凹空细胞的组织病

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