黄芪对阻塞性黄疸大鼠白细胞介素

1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询黄芪对阻塞性黄疸大鼠白细胞介素【摘要】 目的 通过建立阻塞性黄疸大鼠动物模型，应用黄芪制剂进行干预，探讨黄芪对实验性阻塞性黄疸大鼠免疫功能受损的保护作用。方法 造模 3 组：假手术组、阻塞性黄疸组、黄芪干预组。手术后 10 天检测各组肝功能及血白细胞介素-2（IL-2） 、可溶性白细胞介素-2 受体（sIL-2R）表达水平。结果 与假手术组和黄芪干预组比较，阻塞性黄疸组大鼠 IL-2 水平降低，sIL-2R 水平升高，机体免疫功能受损明显，差异有统计学意义（P 0.05 或 P 0.01） 。结论 黄芪可提高阻塞性黄疸大鼠 IL-2 水平，降低 sIL-2R 水平，增强机体免疫功能。 【关键词】 阻塞性黄疸；黄芪；白细胞介素 2；可溶性白细胞介素 2 受体；动物模型；大鼠 Abstract： Objective To investigate the protective effect of astragalus on the immune system injury in obstructive jaundice by establi

2、shing obstructive jaundice rat model and by administering astragalus agents for intervention, thus offering a potential therapeutic strategy to obstructive jaundice diseases. Methods 30 male Wistar rats were divided into three groups at random and on the average. A: sham operation group; B: obstructive jaundice group; C: OJ+Astragalus group. Ten days later the rats were sacrificed and the serum was obtained to detect 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询the ALT, bilirubin, IL-2 and sIL-2R in the three grou

3、ps. Results Compared with groups A and C, IL-2 level in group B decreased and sIL-2R level in group B increased, with marked evidence of injury to the immune functions. There was significant statistic difference between group B and C (P 0.05 and P 0.01, respectively). The hepatic functional parameters in group C were lower than those in group B (P 0.05). Conclusion Astragalus can enhance bodys immune function by increasing the level of IL-2 and decrease the level of sIL-2 R. Key words: obstructi

4、ve jaundice; astragalus; interleukin-2; soluble interleukin-2 receptor; animal model; rat 阻塞性黄疽是一种常见的急重症疾病，病因多样，病情发展迅速，并发症发生率和病死率都很高(分别为 35%和 15%左右)，其原因与原发疾病、合并的感染内毒素血症、肝肾功能损害、胃肠道出血、营养障碍有关。但机体免疫功能的损害是其中不容忽视的因素，而目前人们对于阻塞性黄疸对免疫系统的损害认识不足1 。黄芪为扶正固本的常用中药,但是对阻塞性黄疸大鼠白细胞介素-2（IL-2）及可溶性白细胞介素-2 受体（sIL-2R）表达影响的研究国内少见报道，本文旨在探讨黄芪对实验性阻塞性黄疸大鼠免疫功能的保护作用。 1 材料和方法 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.1 动物和分组 健康雄性清洁级 Wistar 大鼠 30 只，体重250300 g，由徐州医学院实验动物中心提供SCXK(苏)2002-0031 ，饲养室内温度控制在（242）。所有大鼠随机分成 3 组，假手术组、阻塞性黄疸组、黄芪干预组，每组 10

5、 只。 1.2 试剂和仪器 戊巴比妥粉剂（西塘公司，上海） ；大鼠 IL-2、sIL-2R 定量 ELISA 试剂盒（美国 BPB 公司） ；黄芪注射液（中国杭州正大青春宝药业有限公司，国药准字号：Z33020179） 。OLYMPUS AU7200 全自动生化分析仪（OLYMPUS 公司，日本） ；外科手术器械（上海医疗器械厂） ；自制大鼠固定手术台。 1.3 方法 1.3.1 手术方法 适应性喂养 1 周，术前禁食 12 h，自由饮水。3%戊巴比妥生理盐水溶液，按 40 mg/kg 进行腹腔注射。麻醉 10 min 后，固定大鼠于手术台上，术区消毒、铺巾。上腹部正中切口，向外拉开肝脏，暴露肝十二指肠韧带，假手术组只分离肝十二指肠韧带而不结扎胆总管，阻塞性黄疸组、黄芪干预组均分离出胆总管以 3-0 号丝线结扎2 。检查术野无出血，温生理盐水冲洗后 4 号丝线逐层缝合腹壁。 1.3.2 术后处理 术后灯照保温约 0.5 h，麻醉清醒后自由进水、进食、活动；手术后， 黄芪干预组每日腹腔注射黄芪注射液 3 ml。假手术组、阻塞性黄疸组相同部位注射等量生理盐水。各组大鼠均在手术后第 2 周再

6、次麻醉，打开腹腔，下腔静脉采血,立即用离心机 3 000 r/min 离心 15 min，取血清待检。 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.4 标本采集和检测指标 1.4.1 血清学检查 利用 OLYMPUS AU7200 全自动生化分析仪进行谷氨酸氨基转移酶（ALT）和直接胆红素（TB）测定。 1.4.2 IL-2、sIL-2R 水平检测 严格按照试剂盒的要求进行操作。首先利用标准品建立标准曲线，充分反应后在 492 nm 测量光密度值。1.4.3 肝组织的病理变化 剪取肝右叶组织置于 40 g/L 多聚甲醛固定，然后脱水、透明、浸蜡、包埋，制成 4 m 厚的石蜡片，苏木精-伊红染色，显微镜(100)观察病理变化。 1.5 统计学处理 采用 SPSS 11.0 软件对实验数据进行处理，以s 表示，采用方差分析。P 0.05 认为差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 大鼠一般情况 大鼠无麻醉和手术致死。造模后皮肤黏膜渐黄染，食欲减退，体重下降，精神差，嗜睡，反应迟钝，行动少，粪便呈白色。假手术组大鼠无上述变化。 2.2 血清学检查结果 黄芪干预组 ALT 低于阻塞

7、性黄疸组（P 0.05） 。见表 1。表 1 各组大鼠术后 ALT 和 TB 的变化 与假手术组比较：*P 0.01；与阻塞性黄疸组比较：P 0.05 2.3 IL-2、sIL-2R 水平检测结果 与假手术组和黄芪干预组比较，阻塞性黄疸组大鼠 IL-2 水平降低，sIL-2R 水平升高，差异有统计学意义（P 0.05 或 P 0.01）见表 2。说明黄芪可提高阻塞性黄疸大鼠机体免疫功能。表 2 各组大鼠术后 IL-2、sIL-2R 水平检测结果精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询与假手术组比较：*P 0.01；与阻塞性黄疸组比较：P 0.05 2.4 肝脏病理改变 假手术组肝色质正常，无腹水；阻塞性黄疸组和黄芪干预组肝门部近侧胆管呈囊样扩张，充满胆汁，阻塞性黄疸组有 5 只、黄芪干预组有 3 只有大量腹水。光镜下假手术组肝组织结构正常，阻塞性黄疸组有明显的小胆管、毛细血管及结缔组织增生，肝细胞肿胀、空泡变性并有灶性坏死，部分肝细胞坏死呈片状及有大量炎性细胞浸染。黄芪干预组的肝脏病理改变明显较阻塞性黄疸组轻，即使肝细胞坏死也呈小片状（图 1） 。 3 讨 论 阻塞性黄疸对

8、机体免疫功能有多方面的损害，其中以细胞介导的免疫损害尤为明显，由于免疫功能受损机体防御功能下降，阻塞性黄疸患者并发症发生率高。本实验以 IL-2 和 sIL-2R 为检测指标来反映阻塞性黄疸大鼠的免疫功能受损情况，结果显示阻塞性黄疸大鼠机体免疫功能损害明显。 近年来研究已经证实阻塞性黄疸患者的 T 细胞免疫功能低下，动物实验也显示相同的结论，并且观察到阻塞性黄疸动物接受同种皮肤和心脏移植的存活时间明显较正常动物为长。阻塞性黄疸患者存在不同程度的代谢障碍和营养不良，后者已被证实可以降低机体的细胞介导免疫功能3 。在阻塞性黄疸时，因胆盐不能进入肠道，影响 T 淋巴细胞分化成熟，进而使肠道黏膜固有层的 CD4、CD8 细胞减少。Vane 发现用胆总管结扎的动物血浆培养 T 淋巴细胞，见其对植物血凝素（PHA） 、刀豆素 A(Con-A)的刺激反应明显下降，如取胆精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询总管结扎以前的动物血浆做培养则不见上述刺激反应下降现象，因此认为阻塞性黄疸时 T 淋巴细胞功能下降4 。大多数阻塞性黄疸患者血浆内毒素含量增高，而且内毒素血症的发生与黄疸患者术后感染

9、密切相关。阻塞性黄疸对肝脏枯否细胞和肝外吞噬细胞有广泛的影响，Marshall 发现肝脏枯否细胞功能紊乱可导致细胞免疫功能的改变5 。Greve 发现腹膜吞噬细胞产生肿瘤坏死因子（TNF）的活性与阻塞性黄疸大鼠的免疫功能抑制有显著的相关性，巨噬细胞的功能紊乱可改变细胞免疫功能6 。 以上研究表明阻塞性黄疸对机体免疫系统有明显的损害，IL-2是辅助 T 淋巴细胞分泌的一种可溶性淋巴因子，该因子一方面可促进单核巨噬细胞分泌 IL-1，另一方面可使静止的 T 细胞表达 IL-2受体，后者与 IL-2 结合后导致淋巴细胞 DNA 合成能力增强，细胞发生增值，同时分泌其他的淋巴因子而引起 B 细胞的免疫应答7 ，所以 IL-2 分泌功能下降势必影响机体的特异性免疫功能，降低机体抵抗力。IL-2 在免疫反应中起重要作用，如可刺激 T 淋巴细胞和自然杀伤细胞的增生，诱导毒性 T 淋巴细胞和淋巴因子激活杀伤细胞（LAK） ，刺激 B 淋巴细胞产生抗体。因此 IL-2 产生的减少可致细胞免疫功能的抑制。目前，越来越多的研究证实，阻塞性黄疸患者血中存在着免疫抑制因子，使机体细胞免疫功能紊乱而处于不应答状态， sIL-2R 是重要的免疫抑制因子8 。sIL-2R 是由活化的淋巴细胞及单核细胞产生的多肽，是反映机体免疫系统功能的敏感指标，升高的 sIL-2R 与 IL-2 结合，使 sIL-2R 廓清加速，活化的 T 细胞静精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询息下来，恢复成休止期细胞。高水平的 sIL-2R 可与膜白细胞介素-2受体（mIL-2R）竞争与 IL-2 结合，作用类似封闭因子并抑制淋巴细胞浸润，抑制 T 细胞单克隆增殖。sIL-2R 水平增高常常伴有CD4/CD8 比值降低和 NK 细胞活性降低，影响 B 细胞功能和 IgE 浓度，导致机体细胞免疫功能严重低下7 。 本研究结果显示，阻塞性黄疸患者血清 IL-2 水平明显下降，sIL-2R 水平明显升高，且多数研究认为，血清总胆红素水平与手术危险性密切相关。因此，动态观察胆道阻塞患者血清 IL-2 及 sIL-2R 水平的变化，对估价病情、观察治疗效果和判断预后有一定的临床意义。 上一页 1

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