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精编制作实验4 肠道致病菌分离鉴定PPT课件

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卖家[上传人]：ahu****ng1

文档编号：127016935

上传时间：2020-03-29

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1、微生物学实验四肠道致病菌分离鉴定微生物学教研室郭棵棵综合性实验录像球菌操作 1 化脓性球菌分离鉴定二 1 革兰染色 2 转种甘露醇或血清肉汤 3 血浆凝固酶实验 4 触酶实验2 肠道菌分离鉴定一粪便标本接种S S平板材料 1 载玻片1 2张人 2 甘露醇或血清肉汤1支人 3 新鲜兔血浆生理盐水各1支 6人 4 S S平板1块人 5 粪便标本伤寒痢疾副甲副乙1套教室实验内容了解肠道致病菌的血清学鉴定触酶实验血浆凝固酶实验的原理掌握 1 肠道致病菌分离鉴定的方法步骤及生化反应2 化脓性球菌转种甘露醇或血清肉汤的目的3 触酶血浆凝固酶实验的结果观察教学目标观察上次实验结果进行分析紫外线杀菌实验抗生素敏感试验抑菌圈直径如果细菌对药物敏感则在药片周围有抑菌圈形成敏感度越高抑菌圈直径越大 20mm 极度敏感5 20mm 中度敏感10 15mm 轻度敏感 10mm 不敏感无抑菌圈耐药化脓性球菌分离鉴定二脓汁血平板菌落葡萄状排列链状排列血浆凝固酶实验甘露醇发酵实验血清肉汤管接种三线法 37 24h 革兰染色触酶

2、实验排列不典型 2 操作革兰染色及镜检触酶实验血浆凝固酶实验转种甘露醇或血清肉汤涂片先在玻片上放一滴生理盐水然后刮取菌落在盐水中乳化涂成直径约为1 0cm的膜干燥最好在室温中自然干燥也可在远离火焰上方微微烘干但切勿靠火焰以免烤焦标本固定火焰固定革兰染色过程初染结晶紫1分钟媒染碘液1分钟脱色 95 酒精半分钟复染稀释复红半分钟镜检球阳杆阴阳紫阴红 1 革兰染色葡萄球菌链球菌 2 触酶实验原理产生过氧化氢酶的细菌能催化过氧化氢生成水和分子氧出现气泡操作步骤在洁净玻片上滴一滴生理盐水用接种环取少许细菌培养物与生理盐水中乳磨均匀然后加3 过氧化氢数滴或直接滴加3 过氧化氢于不含血液的细菌培养物中立即观察结果结果观察有大量气泡产生者为阳性不产生气泡者为阴性 G 球菌中葡萄球菌和微球菌均产生过氧化氢酶而链球菌属为阴性故此试验常用于G 球菌的初步分群 3 血浆凝固酶试验 1 原理致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶在血浆中激活剂的作用下可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性的纤维蛋白导致血浆凝固而非致病性葡萄球菌由于不产生此酶故不

3、能凝固血浆二者可据此予以区别 2 操作玻片法取干净玻片一块血浆及生理盐水各一滴分别置于玻片两端用接种环取细菌少许分别与生理盐水及血浆充分混匀结果观察 30秒钟内盐水中的细菌呈均匀浑浊而兔血浆则呈块状或颗粒状者为阳性 4 甘露醇试验或血清肉汤接种 1 甘露醇发酵试验接种甘露醇单糖管观察颜色改变及气体产生情况发酵甘露醇产酸者使酸碱指示剂溴麝香草酚兰在酸性环境下由蓝色转变为黄色 2 接种血清肉汤观察细菌生长状态沉淀生长混浊生长部分沉淀上清液混浊生长肠道菌分离鉴定一肠道杆菌是一大群寄居在人类和动物的肠道中的生物学性状近似的革兰阴性的杆菌该类细菌无芽胞多数有周鞭毛需氧或兼性厌氧能分解葡萄糖及其他碳水化合物产酸有些产气多数肠道菌是肠道的正常菌群当宿主免疫力降低或侵入肠道外等部位时也可成为条件致病菌引起疾病有的肠道杆菌例如伤寒沙门菌志贺氏菌致病性大肠杆菌等是肠道致病菌可导致人类某些肠道传染病肠道菌的种类繁多为成功地检出病原菌通常选用选择或鉴别培养基除提供细菌生长所需营养物外还含有抑菌剂和指示剂可有选择性抑制某些肠道细菌的生

4、长指示剂则能鉴别细菌的生化特性本次试验以粪便为标本进行肠道菌的分离鉴定粪便标本中含有伤寒杆菌副伤寒杆菌痢疾杆菌以及大肠杆菌等肠道菌要求从标本中分离出单一的致病菌并通过后续的试验鉴定出致病菌 S S琼脂培养基中含有胆盐煌绿和枸橼酸钠等成分不仅能抑制G 菌的生长也能抑制肠道非致病菌的生长 S S琼脂培养基大肠杆菌在此平板上生长可分解培养基中乳糖产酸与胆盐作用形成胆酸沉淀使中性红指示剂变红形成红色浑浊不透明菌落肠道致病菌则不分解乳糖形成无色或淡黄色菌落因分解蛋白质产生碱性物质 SS琼脂培养基 Salmonella Shigellaagar 大肠埃希菌沙门菌志贺菌操作粪便 S S 平板挑选可疑菌落培养24h 37 接种三线法肠道菌分离鉴定一 1 用无菌接种环挑取少量粪便标本用划线法接种于S S平板上进行分离培养 2 放置于37 C孵箱内培养18 24小时观察平板上所生长的菌落依据其形态大小透明度和颜色等特点初步识别致病菌和非致病菌操作化脓性感染采取哪些标本送检有辅助诊断意义为什么要用血浆凝固酶试验鉴别致病性与非致病性葡萄球菌思考题 thanks

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