竹笋对人杂交瘤细胞hb4c5的生长及单克隆抗体igm产生的研究
3页1、! 鱼曼三塑垫! 苎壁竺! 竺皇墅竺! ! 墅堕些塑! 里璺竺! 望! 塑! 塑型 竹笋对人杂交瘤细胞( 3 4 C 5 ) 的生长及 单克隆抗体I g M 产生的研究 贺稚非李洪军周泽扬 ( 西南农业大学食品学院,重庆4 0 0 7 1 6 ) 佐佐木毅管原卓也 ( 日本爱嫒大学农学部微生物利用学研究室) 摘要:本实验利用人杂交瘤细胞( | 4 c 5 ) 研究竹笋对其生长、产生单克隆抗体I 州的影响作用,竹笋制成干燥粉末,l 帅 竹笋粉溶F1 0 I M 磷酸盐缓冲液( N a P B ) 中,1 2 1 2 0 分灭菌,离心取上清液,稀释,以3 8 浓度的竹笋液添加在耶4 c 5 细胞培养液中,同时设对照组,每天榆测次细胞总数,活细胞数,共6 天,并收集细胞培养液做E L I s 实验检测单克隆抗 体T g M 量,研究发现,竹笋对H B 4 c 5 细胞的生长有一定的抑制作用,但产生的单克隆抗体I g M 量比对照组高,这种作用在初 期就出现,随时间的延长而增大。 关键诃:人杂史瘤细胞( | 4 c 5 ) 生氏竹笋l 州 竹笋是禾本科多年生植物( 竹) 的嫩芽,以冬 春两季的
2、品质最好,很鲜嫩,其蛋白质含量丰富, 故味极鲜美,还含有丰富的维生素、膳食纤维竹 笋在国际上一直是畅销食品,倍受青睐,被誉为理 想的保健食品。我国的江南各省如浙江、安徽、江 西、福建、广东、台湾等省产竹很多,在日本南方 也不少。日本爱嫒大学医学部在小白鼠肿瘤抑制实 验中发现饲喂竹笋粉组的小白鼠肿瘤明显得到了 控制,变小了,有少数肿瘤消失了为了进一步研 究竹笋中的活性因子存在与否,其化学成分、作用 机理等本实验利用人杂交瘤细胞( 皿4 c 5 ) 研究竹 笋对细胞生长、产生单克隆抗体I 蜊的影响作用, 为竹笋的抗肿瘤保健机理的研究及保健食品的开 发奠定理论基础,提供实验依据。 1 材料与方法 1 1 材料 l _ L1竹笋:由日本爱嫒大学医学部提供干燥粉 束。 1 1 2 人杂交瘤细胞株( m 4 c 5 ) :日本爱嫒大学提 供。 、: 1 1 3 标准人穗M 、一次抗体、抗人I 州( T A c T 0 4 1 0 2 ) 、二次抗体,遵t 人I g M ( T A G 02 3 9 2 ) ,为美国 s i 肿a 公司产品。吸附液:5 0 m M 磷酸盐缓冲液p H 9 6 : 底
3、物液:0 0 6 H 2 0 2 ,O 1 M 柠檬酸缓冲液p H 4 0 ( 贮 藏于4 冰箱) :洗液0 0 5 吐温2 0 P B S ( T P B s ) ; E R D F 细胞培养液:实验室配制灭菌冰箱保存备用; l I T E s 液:分别为胰岛素、铁传递蛋白、乙醇胺、亚 硒酸钠溶液。 1 2 主要仪器设备 超净工作台:日本日立公司、 高速离心机:T O M l fs E I K oc 0 ,L T D T O Y D T A J A P A N 岛津自动分光光度计,日本岛津公司。 自动高压杀菌锅,自动控制干燥箱等。 0 L Y 肝u s 显微镜。 1 3 实验方法 1 3 1 竹笋液的制备及最佳浓度的确定 竹笋粉5 9 溶于5 0 l1 0 删N a P B 中,1 2 l 杀 菌2 0 分钟吸取上清液离心,按3 0 、3 1 0 稀 释,于细胞培养板内每孔加5 0 l ,平行样4 孔,第 列设对照,加5 0 m l1 0 埘N a P B ,每孔加入4 倍 I T E s 的细胞培养液5 0 m 1 每孔加2 2 5 1 0 5 m l I B 4 c 5 细胞悬液
4、1 0 0 m l ,于5 c 0 2 、9 5 空气、3 7 培养6 小时,用E L I s A 法检测I 酬的产量I g M 产 量最大者确定为竹笋液的最佳浓度。 1 3 2 实验用细胞培养液制各 基础细胞培养液E R D F 9 5 m 1 + I T E s l 0 0 m 1 + 3 8 竹笋液1 0 0 1 n l 混匀,对照组E R D F 9 6 m l + f T E s l 0 0 m l 混匀分别于6 个细胞培养皿中,每个 加1 m l ,然后每个小培养皿中加1 m l2 2 5 1 0 5 m 1 旧4 c 5 细胞悬液,3 7 、5 c 0 2 、9 5 空气培养6 天。 1 3 3 当天检测一次试验组,对照组的细胞数, 一一 : 二 ; : c , , : ,I;I,J: ,: t 。 4 -:,I;4 ,: ,;i,Ii,i:t;, :t,;自, 1 3 4 同样方法用血球计数板检渊死亡细胞数, 活细胞数,计算存活率。 1 3 5 每天检测细胞数,活细胞数之后,收集细 胞离心液冻藏备用,做E L I s A 实验检测I g M 量。 2 结果与分析讨论 2
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