竹笋对人杂交瘤细胞hb4c5的生长及单克隆抗体igm产生的研究

! 鱼曼三塑垫! 苎壁竺! 竺皇墅竺! ! 墅堕些塑! 里璺竺! 望! 塑! 塑型 竹笋对人杂交瘤细胞( 3 4 C 5 ) 的生长及 单克隆抗体I g M 产生的研究 贺稚非李洪军周泽扬 ( 西南农业大学食品学院，重庆4 0 0 7 1 6 ) 佐佐木毅管原卓也 ( 日本爱嫒大学农学部微生物利用学研究室) 摘要：本实验利用人杂交瘤细胞( | 4 c 5 ) 研究竹笋对其生长、产生单克隆抗体I 州的影响作用，竹笋制成干燥粉末，l 帅 竹笋粉溶F1 0 I M 磷酸盐缓冲液( N a P B ) 中，1 2 1 2 0 分灭菌，离心取上清液，稀释，以3 8 浓度的竹笋液添加在耶4 c 5 细胞培养液中，同时设对照组，每天榆测次细胞总数，活细胞数，共6 天，并收集细胞培养液做E L I s 实验检测单克隆抗 体T g M 量，研究发现，竹笋对H B 4 c 5 细胞的生长有一定的抑制作用，但产生的单克隆抗体I g M 量比对照组高，这种作用在初 期就出现，随时间的延长而增大。 关键诃：人杂史瘤细胞( | 4 c 5 ) 生氏竹笋l 州 竹笋是禾本科多年生植物( 竹) 的嫩芽，以冬 春两季的品质最好，很鲜嫩，其蛋白质含量丰富， 故味极鲜美，还含有丰富的维生素、膳食纤维竹 笋在国际上一直是畅销食品，倍受青睐，被誉为理 想的保健食品。我国的江南各省如浙江、安徽、江 西、福建、广东、台湾等省产竹很多，在日本南方 也不少。日本爱嫒大学医学部在小白鼠肿瘤抑制实 验中发现饲喂竹笋粉组的小白鼠肿瘤明显得到了 控制，变小了，有少数肿瘤消失了为了进一步研 究竹笋中的活性因子存在与否，其化学成分、作用 机理等本实验利用人杂交瘤细胞( 皿4 c 5 ) 研究竹 笋对细胞生长、产生单克隆抗体I 蜊的影响作用， 为竹笋的抗肿瘤保健机理的研究及保健食品的开 发奠定理论基础，提供实验依据。 1 材料与方法 1 1 材料 l _ L1竹笋：由日本爱嫒大学医学部提供干燥粉 束。 1 1 2 人杂交瘤细胞株( m 4 c 5 ) ：日本爱嫒大学提 供。 、：· 1 1 3 标准人穗M 、一次抗体、抗人I 州( T A c T 0 4 1 0 2 ) 、二次抗体，遵t 人I g M ( T A G 02 3 9 2 ) ，为美国 s i 肿a 公司产品。吸附液：5 0 m M 磷酸盐缓冲液p H 9 6 ： 底物液：0 0 6 H 2 0 2 ，O 1 M 柠檬酸缓冲液p H 4 0 ( 贮 藏于4 冰箱) ：洗液0 0 5 吐温2 0 P B S ( T P B s ) ； E R D F 细胞培养液：实验室配制灭菌冰箱保存备用； l I T E s 液：分别为胰岛素、铁传递蛋白、乙醇胺、亚 硒酸钠溶液。 1 2 主要仪器设备 超净工作台：日本日立公司、 高速离心机：T O M l fs E I K oc 0 ，L T D T O Y D T A J A P A N 岛津自动分光光度计，日本岛津公司。 自动高压杀菌锅，自动控制干燥箱等。 0 L Y 肝u s 显微镜。 1 3 实验方法 1 3 1 竹笋液的制备及最佳浓度的确定 竹笋粉5 9 溶于5 0 l1 0 删N a P B 中，1 2 l 杀 菌2 0 分钟吸取上清液离心，按3 0 、3 1 0 稀 释，于细胞培养板内每孔加5 0 l ，平行样4 孔，第 列设对照，加5 0 m l1 0 埘N a P B ，每孔加入4 倍 I T E s 的细胞培养液5 0 m 1 每孔加2 2 5 ×1 0 5 m l I B 4 c 5 细胞悬液1 0 0 m l ，于5 c 0 2 、9 5 空气、3 7 培养6 小时，用E L I s A 法检测I 酬的产量I g M 产 量最大者确定为竹笋液的最佳浓度。 1 3 2 实验用细胞培养液制各 基础细胞培养液E R D F 9 5 m 1 + I T E s l 0 0 m 1 + 3 8 竹笋液1 0 0 1 n l 混匀，对照组E R D F 9 6 m l + f T E s l 0 0 m l 混匀分别于6 个细胞培养皿中，每个 加1 m l ，然后每个小培养皿中加1 m l2 2 5 ×1 0 5 m 1 旧4 c 5 细胞悬液，3 7 、5 c 0 2 、9 5 空气培养6 天。 1 3 3 当天检测一次试验组，对照组的细胞数， 一一 ： ·二 ； ： c ， ， ： ，I；I，J： ，： t 。 4 -：，I；4 ，： ，；i，Ii，i：t；， ：t，；自， 1 3 4 同样方法用血球计数板检渊死亡细胞数， 活细胞数，计算存活率。 1 3 5 每天检测细胞数，活细胞数之后，收集细 胞离心液冻藏备用，做E L I s A 实验检测I g M 量。 2 结果与分析讨论 2 1 竹笋液量佳浓度实验鳍果 表l 竹笋液最佳浓度确定实验结果单位：n g 2 3 即4 c 5 杂交庸细胞活细臆致检翱结果 由图2 可知，实验组的活细胞数低于对照组，在初 期差异不显著。培养3 天后差异增大，推测竹笋液 对l 琚4 c 5 细胞生长有抑制作用。 2 4 I 硝产量的检测结果 稀对照 3 03 一l3 23 33 4 释度 抗体量 I g M1 7 1 6l O 1 31 0 9 21 1 5 21 2 6 91 3 8 平均教 由表l 可看出，竹笋液浓度以3 8 稀释度I g M 抗体产量最高，3 7 次之，浓度高了，I g M 产量反 而降低推测竹笋液中有某种活性成分抑制细胞生 长，或抑制细胞蛋白质合成。 1 6 0 0 0 0 0 】4 0 0 0 0 0 萋勰： 型 8 0 0 0 0 0 再6 0 0 0 0 0 4 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 0 + 实验组 O123456 时间( 天) 图l 细胞总数检测结果 2 2 B 哇c 5 杂交瘤细胞总数检测结果 由图1 可知，实验组中的细胞总数低于对照组 表明此竹笋液对H B 4 C 5 细胞生长有一定的抑制作用 但抑制因子是什么不详，有待于进一步研究。 1 4 0 0 0 0 0 1 2 0 0 0 0 0 鼎1 0 0 0 0 0 0 蘧8 0 0 0 0 0 害6 0 0 0 0 0 诹 4 0 0 0 0 0 2 0 0 0 0 0 O + 实验组 Ol23456 时间( 天) 图2 活细胞数检测结果 1 8 0 0 1 6 0 0 聪 4 0 0 2 0 0 O 卜实验组 0l23456 时间( 天) 图3f g l f 的生产量 由图3 可知：竹笋液对 m 4 c 5 细胞产生抗体I 蒯 有促进作用。在初期有一点表现，第三天差异大一 点，到第五天差异明显。结合细胞总数、活细胞数 检测结果分析推测出竹笋液使细胞I 础产量增加， 不是由于细胞总数增加，活细胞数增加而致，而是 由于活性成分使细胞蛋白质生产增大，而且这种作 用有时间性后期明显。 3 绪论 3 1 竹笋液对船4 c 5 杂交瘤细胞的生长有抑制作 用，但活性成分、抑制机理不详，有待于进一步深 入研究其活性因子的化学成分、作用机理。 3 2 竹笋液对H B 4 C 5 细胞抗体I g M 产生有促进作用， 增加细胞的抗性，由以上实验结果推测是通过增加 细胞蛋白质合成作用实现的。 3 3 竹笋的抗肿瘤保健作用，分析是通过抑制肿 瘤细胞生长以及促进生物体抗体I g M 产生增加抗性 协同完成的值得深入地研究。 参考文献 1 司徒镇强等著细胞培养世界图书出版社1 9 9 6 2 朱玉贤等著现代分子生物学高等教育出敝社1 9 9 8 3 L o d i s hI l ，B a l t i r e0 ，B e r k e ta 1 l e c u l 盯C e l l B i o l o g y 3 r d e d N 髑T o r k ：S c i e n t i f i c 肿r i c 帅 I 食品工业科技 S c e n a d1 酬h 0 1 0 盱0 fF 0 0 dh d u s t r y2 0 0 1 增刊 B D o k s 1 9 9 5 4 s u g a h a r a ，T ，ir a h a L a S ，A k iy o s h j K 1 舳b e ，T ，0 k u v a M T a n dM u r a k a m i H I 哪u n o g l o b u L i np r o d u c t i 叽 s t i m u l a t i n g r a c t o r 【i a( 【P s E 1 1 a )i s 9 1 y c e r a ld o h y d e s 一3 一p h D s p h a l cd e h y d r o g e n a s e 1i k e p r o t e i n C y t o t o c h n o l o g y 6 ，l1 5 1 2 0 ，1 9 9 I l 惦 5r a k 锄jH Y a n a d aKP r o d u c “o no fc a n c e rs p e c i f i c m o n o c l 【l n a la n t j b o d i e sw iL hh u n a nh u m a nh v b r i d o 口a sa n d t h e i rs e r u mf r e e ，h j g hd e n s 】L y p e r f u s i o nc u i t u r e ，【n ： s 口i c rR C r i f f i t h sJ B ，e d S M o d e r na p p r o a c h e st oa n i m a l c e l lt o c h n 0 1 0 9 yB u t t e 刑o r 七h s 1 9 8 7 ：j 2 7 2 p ，； - ， ， ，； 1÷t_ 、I1 4 i ，t ：， l、：i，ti ，；， i ， 、 ，