您所在位置：网站首页 > 行业资料 > 食品饮料液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）

液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）

5页

卖家[上传人]：j****

文档编号：105227339

上传时间：2019-10-11

文档格式：DOC

文档大小：176KB

文档加载中……请稍候！
如果长时间未打开，您也可以点击刷新试试。

下载文档到电脑，查找使用更方便

5 金贝

/ 5 举报版权申诉马上下载

文本预览

下载提示

常见问题

1、附件7液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）1 范围本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中三聚氰胺进行定性判定。3 试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇。3.1.2 三羟甲基氨基甲烷（Tris）。3.1.3 1mol/L盐酸：移取79.36mL浓盐酸，加水100mL水中，定容至1L。3.1.4 甲醇水溶液：准确量取50 mL甲醇和50 mL水，混匀后备用。3.1.5 稀释液：准确称取6.05 g Tris（3.1.2）和8.5 g 1 mol/L盐酸（3.1.3），加水定容至1 L，混匀后备用。3.2 参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度99%

2、。表1 三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量三聚氰胺Melamine108-78-1C3H6N6126.12注：或等同可溯源物质。3.3 标准溶液的配制三聚氰胺标准储备液（1 mg/mL）：精密称取三聚氰胺标准品（3.2）适量，置于10 mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1 mg/mL的三聚氰胺标准储备液；或可直接购三聚氰胺标准储备液。4避光保存备用，有效期3个月。3.4 材料三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒：适用基质为液体乳。3.4.1 金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。3.4.2 试纸条或检测卡。4 仪器和设备4.1 移液器：200 L、1000 L和5 mL。4.2 涡旋混合器。4.3 电子天平：感量为 0.01 g。4.4 环境条件：温度1535，湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备取适量有代表性样品充分混匀。5.2 试样提取准确称取样品0.5 g于离心管中，加入5 mL稀释液（3.1.5），涡旋混匀提取5 min，即得待测液。5.3 测定步骤5.3.1

3、试纸条与金标微孔测定步骤吸取150200 L样品待测液于金标微孔（3.4.1）中，抽吸510次使混合均匀，不要有气泡，40温育3 min，将检测试纸条（3.4.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，40温育5 min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。5.3.2 检测卡测定步骤吸取150200 L样品待测液于检测卡加样孔（3.4.2）中，室温反应35 min，进行结果判定。5.4 质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。5.4.1 空白试验称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。5.4.2 加标质控试验准确称取空白试样100 g（精确至0.01 g）置于100 mL玻璃溶液瓶中，加入250 L三聚氰胺标准溶液（1mg/mL）（3.3.1），使试样中三聚氰胺浓度为2.5 mg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。6 结果判定要求通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视结果判读如图1。6.1 无效控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。6.2 阳性结果6.2.1 消线法检测线（T线）不显色，控制线（C线）显色，表明样品中

4、三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性。6.2.2 比色法检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅或几乎不显色，表明样品中三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性。6.3 阴性结果6.3.1 消线法检测线（T线）、控制线（C线）均显色，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，判定为阴性。6.3.2 比色法检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，判定为阴性。图1试纸条/检测卡目视判定示意图6.4 质控试验要求空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。7 结论三聚氰胺与灭蝇胺有交叉反应，当检测结果为阳性时，应对三聚氰胺结果进行确证。8 性能指标8.1 检测限：2.5mg/kg。8.2 灵敏度：灵敏度应99%8.3 特异性：特异性应85%。8.4 假阴性率：假阴性率应1%。8.5 假阳性率：假阳性率应15%。注：性能指标计算方法参见附录A。9 其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定，可根据试剂盒说明书进行操作。方法使用者应使用经过验证的满足本方法规

5、定的各项性能指标的试剂、试剂盒。本方法参比标准为食品安全国家标准原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法（GB/T 22388-2008）。本方法使用试剂盒可能与灭蝇胺存在交叉反应，当结果判定为阳性时，应采用实验室仪器方法食品安全国家标准原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法（GB/T 22388-2008）对三聚氰胺结果进行确证。附录A快速检测方法性能指标计算表表A.1性能指标计算方法样品情况a检测结果b总数阳性阴性阳性N11N12N1.=N11+N12阴性N21N22N2.=N21+N22总数N.1=N11+N21N.2=N12+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2显著性差异（2）2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21），自由度（df）=1灵敏度（p+，%）p+=N11/N1.特异性（p-，%）p-=N22/N2.假阴性率（pf-，%）pf-=N12/N1.=100-灵敏度假阳性率（pf+，%）pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%c（N11+N22）/(N1.+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：N11表示第一行，第一列，N1.表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。C为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：北京市食品安全监控和风险评估中心（北京市食品检验所）验证单位：山东省食品药品检验研究院、四川省食品药品检验检测院、江南大学主要起草人：史娜、吴燕涛、孙蕊、王丽、潘攀、张丽华5

《液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）》由会员j****分享，可在线阅读，更多相关《液体乳中三聚氰胺的快速检测胶体金免疫层析法（征求意见稿）》请在金锄头文库上搜索。

点击阅读更多内容

TA的资源