食品中非法添加西地那非和他达拉非的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿)
6页1、附件1食品中非法添加西地那非和他达拉非的快速检测 胶体金免疫层析法(征求意见稿)1 范围本方法规定了食品及保健食品中非法添加西地那非和他达拉非的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于声称具有抗疲劳、调节免疫等功能的保健食品及涉嫌添加化学药品的食品中西地那非和他达拉非的快速测定。2 原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的西地那非和他达拉非等物质经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中西地那非和他达拉非进行定性判定。3 试剂材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇:色谱纯。3.1.2 三羟甲基氨基甲烷,Tris碱。3.1.3 浓盐酸。3.1.4 吐温-20。3.1.5 盐酸溶液:量取浓盐酸(3.1.3)16.7 mL,用水溶解并稀释至100 mL。3.1.6 缓冲液:称取12.1 g Tris碱(3.1.2),加适量水溶解,混匀,用盐酸溶液(3.1.5)调节pH至8.0,加入5.0 g吐
2、温-20(3.1.4)搅拌均匀,定容至1000 mL。3.2 参考物质参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1,纯度均99%。表1 参考物质信息表序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量1西地那非Sildenafil139755-83-2C22H30N6O4S474.582他达拉非Tadalafil171596-29-5C22H19N3O4389.40注:或等同可溯源物质。3.3 标准溶液的配制3.3.1 西地那非标准储备液(1.0 mg/mL):精密称取西地那非标准品(3.2)适量,用甲醇(3.1.1)溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。-20避光保存,有效期1年。3.3.2 西地那非标准工作液(10g/mL):精密移取适量西地那非标准储备液(1.0 mg/mL)(3.3.1)置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为10g/mL的标准工作液。-20避光保存,有效期3个月。3.3.3 他达拉非标准储备液(0.5 mg/mL):精密称取他达拉非标准品(3.2)适量,用甲醇(3.1.1)溶解
3、并稀释至刻度,摇匀,配制成浓度为0.5mg/mL的标准储备液。-20避光保存,有效期1年。3.3.4 他达拉非标准工作液(10g/mL):精密移取适量他达拉非标准储备液(0.5mg/mL)(3.3.3)置于10mL容量瓶中,用甲醇(3.1.1)稀释至刻度,摇匀,制成浓度为10g/mL的标准工作液。-20避光保存,有效期3个月。3.4 材料3.4.1 西地那非胶体金免疫层析试剂盒及配套的试剂(可选),适用基质为保健食品及食品。3.4.2 他达拉非胶体金免疫层析试剂盒及配套的试剂(可选),适用基质为保健食品及食品。4 设备与仪器4.1 天平:感量为0.01g。4.2 涡旋混合器。4.3 移液器: 200L,1m L,5mL。4.4 离心机:转速4000 r/min。4.5 读数仪:产品配套可使用的检测仪器(可选)。4.6 环境条件:温度10-40,相对湿度80%。5 分析步骤5.1 试样制备液体样品充分混匀,固体样品充分粉碎混匀。5.2 试样提取和净化5.2.1 液体基质量取0.5 mL(精确至0.01 mL)试样于15 mL离心管中,加入4 mL缓冲液(3.1.6),涡旋混合30 s,作
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