CLONTECH酵母双杂中文版#优质参考
58页1、目录(一) 介绍4(二) 试剂盒物品清单 7(三) 额外附加物品列表9(四) 酵母菌株11(五) 酵母载体14(六) 方法简述:单杂交文库的构建和筛选16方法简述:双杂交文库的构建和筛选17(七) 构建用于酵母单杂交的报告质粒载体18(八) 构建用于酵母双杂交的DNA-BD融合载体19(九) 构建生成cDNA文库21(十) 构建和筛选酵母单杂交和双杂交文库(简述)27(十一) 酵母单杂交文库的构建和筛选28(十二) 酵母双杂交文库的构建和筛选30方法A:通过酵母配对(Yeast Mating)来筛选目的蛋白30方法B:通过共转化的方法筛选目的蛋白35(十三) 分析阳性相互作用结果38(十四) 问题解决指南44(十五) 参考文献47(十六) 相关产品50 附录A: 双链 cDNA合成的典型结果51附录B: 酵母感受态的制备LiAc 法52附录C: 单杂交对照载体信息53附录D: 双杂对照载体信息54表格列表 Table I BD Matchmaker酵母菌株的基因型11Table II BD Matchmaker酵母菌株的表型11Table III单杂交系统的载体14Table IV 双
2、杂交系统的载体15Table V 各BD-Matchmaker DNA-BD 载体的比较19Table VI RNA起始浓度和PCR扩增循环数之间的关系24Table VII单杂交共转化的对照实验的设置29Table VIII单杂共转化对照实验:期望的结果29Table IX 双杂交转化的对照实验的设置33Table X 双杂交配对筛选的对照实验的设置Table XI 双杂交共转化的对照实验的设置Table XII 双杂交共转化的对照实验:期望的结果Table XIII 用于PCR筛选菌落的Assembling Master Mixs图片列表Figure 1使用BD Matchmaker单杂交系统筛选蛋白-DNA相互作用4 Figure 2使用BD Matchmaker单杂交系统筛选蛋白-蛋白相互作用 4Figure 3酵母单杂交和双杂交筛选的大致步骤5Figure 4构建和筛选BD Matchmaker酵母单杂交和双杂交文库6Figure 5酵母菌株AH109和Y187中的报告基因12Figure 6BD Matchmaker酵母单杂交文库的构建和筛选16Figure 7BD Mat
3、chmaker酵母双杂交文库的构建和筛选17Figure 8用BD SMART技术合成高质量的ds cDNA21Figure 9BD CHROMA SPIN纯化柱和收集管26Figure 10通过酵母重整合作用来构建AD融合文库27Figure 11为双杂交筛选AD融合文库32Figure 12分析和证明可能的单杂交和双杂交相互作用阳性结果的策略39Figure 13通过酵母配对来验证蛋白-蛋白相互作用42Figure 14用对照用人胎盘Poly A+ RNA合成双链cDNA51Figure 15p53HIS对照载体的图谱53Figure 16pGAD-Rec2-53 AD对照载体的图谱53Figure 17pGADT7-RecT AD对照载体的图谱54Figure 18pGBKT7-53 DNA-BD 对照载体图谱54Figure 19pGBKT7-Lam DNA-BD 对照载体图谱55(一) 介绍BD MatchmakerTM Library Construction & Screening试剂盒提供一种简便的方法构建cDNA文库用来进行酵母双杂交和单杂交的筛选,这些试剂盒结合了B
4、D Matchmaker TM Systems和BD SMART TM cDNA Synthesis的技术,只需要用任何组织的1 g poly A+ RNA 或total RNA就能构建cDNA文库。 通过一般细胞内克隆步骤,你能利用BD Matchmaker Systems所提供的灵敏的转录方法所构建的文库来进行单杂交或双杂交实验。单杂交实验的原理蛋白-DNA相互作用实验单杂交实验使你能够确定和描述蛋白与目的顺式DNA激活序列的绑定,该序列可能是处于最小限度的启动子上游的用于增强转录的元件。这个实验也可以用于预测或新蛋白的DNA绑定结构域的确定。通过BD Matchmaker One-Hybrid System你可以很容易的获得这些基因表达的蛋白在BD Matchmaker One-Hybrid实验中,潜在的DNA绑定蛋白基因是与克隆在pGADT7-Rec2(为单杂交设计的低拷贝载体)上GAL4激活结构域(AD)序列一起融合表达的。一个或多个目的DNA序列的串联拷贝被构建在pHIS2(含有HIS3营养缺陷报告基因的报告载体)。DNA绑定蛋白和目标序列的相互作用会激活HIS3的转录(F
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