超高效合相色谱法测定盐酸兰地洛尔中立体异构体的含量

1、超高效合相色谱法测定盐酸兰地洛尔中立体异构体的含量庾莉菊;黄海伟;李秀梅;盛佳;徐永威;何兰【摘 要】建立了一种超高效合相色谱法( Ultra performance convergence chromatography,UPC2)分别和测定盐酸兰地洛尔中立体异构体的方法。本方法选用 Daicel CHIRALPAK IF 手性色谱柱(150 mm 4.6 mm,3m),以 CO2 为流淌相,甲醇-正丁醇-乙腈(1：1：1, V/V)+0.5氨水为助溶剂,梯度洗脱,流速为 2.8 mL/min,检测波长为 223 nm。在建立的 UPC2 条件下,盐酸兰地洛尔的 R,R-异构体、R,S-异构体和 S,R-异构体的检出限分别为 0.3、0.4 和 0.3 mg/L；线性范围分别为 2300 mg/L、5300 mg/L 和 2300 mg/L；加标回收率分别为103.4,91.8和 101.7；进样周密度分别为 0.06,0.09和 0.08(n=6)。本方法能够满足盐酸兰地洛尔样品中 3 个立体异构体检查的相关要求。%A new method for chiral separation

2、 and purity inspection of landiolol hydrochloride and its stereoisomers was developed by ultra-performance convergence chromatography ( UPC2 ) . The mobile phase was the mixture of supercritical CO2 and methanol/n-butyl alcohol/acetonitrile (1:1:1, V/V) plus 0. 5%NH3H2O. The separation was carried out on the Daicel CHIRALPAK IF column (150 mm 4. 6 mm, 3 m) with a flow rate of 2. 8 mL/min at 50 using 223 nm as detection wavelength. Under the optimized experimental conditions, for R,R-stereoisomer

3、, R,S-stereoisomer and S,R-stereoisomer, the detection limits (LOD, S/N=3) were 0. 3, 0. 4 and0. 3 mg/L, the linear ranges were 2-300 mg/L, 5-300 mg/L and 2-300 mg/L, the recoveries of spike samples were 103. 4%2. 5%, 91. 8%2. 5% and101. 7%1. 5%, and the injection repeatabilities were 0. 06%, 0. 09% and 0.08% (n=6), respectively. The experimental results demonstrate that theUPC2-based method can be used for the analysis and determination of landiolol hydrochloride and its stereoisomers.【期刊名称】分析化

4、学【年(卷),期】2023(044)009【总页数】6 页(P1348-1353)【关键词】超高效合相色谱法;盐酸兰地洛尔;立体异构体;手性拆分【作 者】庾莉菊;黄海伟;李秀梅;盛佳;徐永威;何兰【作者单位】中国食品药品检定争论院，北京100050;中国食品药品检定争论院， 北京 100050;三门峡市食品药品检测中心，三门峡 472023;沃特世科技 上海 ，上海 202306;沃特世科技 上海 ，上海 202306;中国食品药品检定争论院，北京 100050【正文语种】中 文盐酸兰地洛尔为继艾司洛尔之后的 1-肾上腺素能受体阻断剂，具有超短效、高选择性的特点，临床应用于手术时和手术后心动过速性心律失常的紧急治疗1。盐酸兰地洛尔在临床上起效快，半衰期短，不良反响较其它同类产品少，疗效牢靠2。盐酸兰地洛尔由日本小野药品工业株式会社在 2023 年开发上市，临床常用的剂型为注射剂，在国内暂未被批准上市。在临床上应用的有精准疗效的盐酸兰地洛尔为单一的 S,S-异构体，其分子构造式如图 1 所示。盐酸兰地洛尔具有两个手性中心，另有 3 个立体异构体(R,R-、R,S- 和 S,R-)。从质量

5、掌握的角度，有必要对盐酸兰地洛尔样品中的立体异构体进展研究并限量掌握。盐酸兰地洛尔立体异构体检查方法尚未见公开报道，建立能够有效拆分其立体异构体的方法，对盐酸兰地洛尔原料药和制剂的质量掌握均具有重要意义。色谱法是手性药物分析和分别中应用最广、最有效的方法，主要包括气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、超临界流体色谱(Supercriticalfluid chromatography, SFC)、毛细管电泳(CE)等3。2023 年，Waters 公司推出超高效合相色谱法(Ultra performance convergence chromatography，UPC2)，结合了超临界流体色谱技术与传统超高效液相色谱的优点，以超临界流体 CO2 为流动相主体，同时混合一路助溶剂，依靠流淌相的溶剂化力量进展分别与分析4,5。UPC2 对分别手性异构、位置异构、构造相像和共轭等“相像”化合物具有独特的优势，并具有操作温度低、有机溶剂使用量少、灵敏度高、重现性好、分析速度快 等优点6,7。UPC2 已经在食品检测811、中药争论和质量掌握12,13及化学药手性检查14等方面得到广泛应用。

6、如 Rao 等14承受 UPC2 进展氟维司群(Fulvestran)非对映体分析，经方法学验证符合 ICH 的相关要求，且与 USP 中的正相 HPLC 方法相比，效率提高了 3 倍以上。UPC2 技术应用于盐酸兰地洛尔对映体分别尚未见报道。本争论承受 UPC2 测定盐酸兰地洛尔的立体异构体，在 10 min 内实现了盐酸兰地洛尔及其 3 个立体异构体的分别。试验结果说明，本方法快速、准确、灵敏度高、重复性好、回收率较高、有用性强，满足手性药物质量掌握争论技术指导原则(国食药监注2023639 号)中对立体异构体检查的相关要求，为盐酸兰地洛尔原料和注射用盐酸兰地洛尔中立体异构体检测供给了一种高效的色谱检测方法。2.1 仪器与试剂Waters Acquity UPC2 超高效合相色谱仪(美国 Waters 公司)，配有 Waters EmpowerTM3 数据处理系统；MS3 basic 涡旋仪(德国 IKA 公司)；Gilson-PIPETMAN 移液枪(2001000 L, 20100 L 和 110 L)。盐酸兰地洛尔比照品(纯度 98.9%，批号 101721-202301)，

7、R,R-异构体比照品(纯度 100%，批号 101722-202301)，R,S-异构体比照品(纯度 100%，批号101723-202301)，S,R-异构体比照品(纯度 100%，批号 101722-202301)，均由中国食品药品检定争论院供给；盐酸兰地洛尔原料(代码 A、B、C，企业送检样品)； 注射用盐酸兰地洛尔(规格 10 mg，代码 D、E、F，企业送检样品)； CO2(99.999%，上海振兴气体)；甲醇、乙腈、异丙醇、正丁醇，乙醇(色谱纯，美国 Thermo Fisher Scientific 公司)；氨水(国药试剂公司)；蒸馏水(18.2 Mcm)。2.2 溶液的配制异构体标准贮备液：分别取盐酸兰地洛尔 3 个异构体各约 10 mg，准确称定，以甲醇溶解并定容至 10 mL，配制成 1000 mg/L 溶液，4下贮存待用。异构体标准工作液：将标准贮备液分别稀释为 300, 200, 100, 50, 25, 10, 5.0, 2.0 和 1.0 mg/L 的溶液，4下贮存待用。测定分别度所用溶液：取盐酸兰地洛尔约 10 mg，以甲醇溶解并定容至 10 mL；准确量取

8、 1.0 mL，置 100 mL 容量瓶中，参加异构体标准储藏液 1.0 mL，以甲醇定容，4下贮存待用。测定分别度用模拟样品溶液：准确称取盐酸兰地洛尔 5 mg，参加 50 mg/L 异构体标准工作液 1.0 mL，以甲醇溶解并定容至 5 mL，4下贮存待用。2.3 超高效合相色谱条件Daicel CHIRALPAKIF 手性色谱柱(150 mm 4.6 mm，3.0 m， 大赛璐药物手性技术(上海)，流淌相 A 为 CO2，流淌相 B 为甲醇-正丁醇-乙腈(111， V/V)+0.5 % 氨水；流速: 2.8 mL/min。梯度洗脱：04 min，90 % A；46 min，80%75% A；69 min，75%55% A；911 min，55%50% A；1113 min，90% A。进样量： 8 L；柱温： 50；检测波长： 223nm；动态背压(Dynamic Back Pressure): 11.72 Pa。2.4 样品处理盐酸兰地洛尔：称取盐酸兰地洛尔样品约 10 mg，置于 15 mL 聚乙烯管中，参加10 mL 甲醇溶解，涡旋振摇 5 min 充分混匀，经 0.22

9、m 滤膜过滤后，直接进样分析。注射用盐酸兰地洛尔：称取适量样品(约相当于盐酸兰地洛尔 10 mg)，参加 10 mL 甲醇溶解，涡旋振荡 5 min 充分混匀，经 0.22 m 滤膜过滤后，直接进样分析。3.1 色谱分别条件的优化本争论中，色谱条件优化的目的是使盐酸兰地洛尔与其 3 个立体异构体的色谱峰有效分别。试验中，以这 4 个立体异构体色谱峰间的分别度(Rs)：其中，t1, t2 分别为两峰的保存时间，w1, w2 分别为两峰的峰宽。以 Rs 和盐酸兰地洛尔的拖尾因子(T=W0.05 h/2d1, W0.05 h 为 5%峰高处的峰宽， d1 为峰顶点至峰前沿之间的距离)为考察指标。3.1.1 色谱柱及助溶剂选择 为了使盐酸兰地洛尔及其 3 个立体异构体在较短时间内到达有效分别，承受 6 种适用于超临界流体分别的键合型色谱柱并结合 4 种混合助溶剂进展了初筛。用于初筛的 6 种键合型色谱柱均为大赛璐药物手性技术(上海)生产，规格均为 150 mm4.6 mm， 3.0 m，型号分别为 Daicel CHIRALPAKIA、 Daicel CHIRALPAKIB、 Daicel CHIRALPAKIC、 Daicel CHIRALPAKID、 Daicel CHIRALPAKIE 和 Daicel CHIRALPAKIF。用于初筛的 4 种混合助溶剂分别为：(1)甲醇-异丙醇(11， V/V)+0.2%氨水，(2)乙腈- 异丙醇(11， V/V)+0.2%氨水，(3)乙腈-乙醇(11， V/V)+0.2%氨水，(4)乙腈-异丙醇(11， V/V)+0.2%氨水。结果说明，在其它色谱条件不变的状况(见 2.3节)下，仅 IF 柱在甲醇-异丙醇(11， V/V)+0.2 %氨水或乙腈-乙醇(11，V/V)+0.2 %氨

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