人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准分析-重庆狂犬疫苗抗体检测

泓域健康/重庆狂犬抗体检测 人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准分析 一、 人用狂犬病疫苗的免疫机制、毒株及质量标准 狂犬病病毒RNA编码核蛋白（N）、M1、M2、病毒包膜糖蛋白（G）和L五种蛋白，其中G蛋白是狂犬病病毒最主要的抗原，可有效刺激特异性辅助性T细胞和细胞毒性T细胞（CTL）增生，并诱导机体产生特异性抗体。G蛋白特异性抗体是狂犬病疫苗最重要的保护性抗体，免疫效果主要依赖其抗原表位、结构、蛋白折叠及糖基化等。N蛋白也是一种有效的保护性抗原，能够刺激B细胞和Th细胞诱导产生细胞和体液免疫。磷蛋白（P）可诱导CTL，但保护作用较弱。机体在接种狂犬病疫苗约7天左右产生IgM抗体，在约14天后产生IgG抗体并迅速升高。IgM和IgG抗体均具有中和病毒的能力，有些中和抗体能进入感染狂犬病病毒的神经细胞内抑制病毒复制。CTL的高峰出现在免疫后12天，可清除中枢神经系统内的狂犬病病毒，Th细胞可增强抗核蛋白和糖蛋白抗体，也能增加保护效果。但Suss的研究认为细胞免疫在狂犬病中的作用不明。 由于狂犬病病毒核蛋白序列高度保守，氨基酸同源性达78%至93%，故病毒之间在核壳体水平上存在着广泛的抗原交叉反应。狂犬病病毒的主要抗原部位为G蛋白外功能区，当其氨基酸同源性>74%时，病毒之间能够交叉中和，为同一遗传谱系内的病毒；膜外区的氨基酸同源性<62%时，则无交叉中和反应。目前疫苗株均属于遗传谱系I，对遗传谱系II中的病毒感染不具保护作用。 现已经有十余个种类或基因型的狂犬病病毒属病毒被描述为狂犬病的病原体。目前为止，遗传谱系I的狂犬病病毒是引起人狂犬病的最常见的病毒型别，也是至今应用于狂犬病疫苗生产的唯一病毒种类。故现有疫苗可能无法为遗传谱系I外的其他血清型病毒感染提供保护。因此，用于疫苗的病毒种类必须慎重选择。生产用毒种应是在实验室细胞培养适应和减毒，并具有稳定生物学特性的固定毒株，其历史和来源应确证清楚，并经过全面的特征性检定，符合国家相关文件的要求。病毒灭活后制成的疫苗对人体安全且能产生有效的免疫保护作用。WHO推荐用于疫苗生产的病毒固定毒株包括PasteurVirus、Pitman-Moore、Vnukovo-32、Flury鸡胚细胞低传代株和CTN株等。 人用狂犬病疫苗应符合WHO生物制品标准专家委员会（ECBS）制定的指导原则中对疫苗特性、生产及质量控制的要求。用于制备疫苗的细胞基质应来源于健康动物，动物来源品系清楚。根据现行《中国药典》的要求，动物必须是清洁级或以上的动物。所用动物应符合实验动物微生物学和寄生虫学检测要求的相关规定。人二倍体及传代细胞应在限定代次内使用。病毒在细胞（或胚蛋）中增殖后，将收获的病毒进行浓缩、纯化、灭活，加入保护剂冻干而成。细胞培养疫苗的最低效价为在效期内每一剂肌注剂量达2．5IU以上，由NIH法检测确定。ELISA法检测糖蛋白等其他体外测定方法目前仍处于实验室验证阶段，但该方法已用于生产过程中抗原含量的控制。疫苗需经临床前研究及临床试验，企业需获得国家食品药品监督管理总局批准的生产许可证方可生产疫苗。WHO建议对新申请注册的疫苗，在临床试验中检测0、14、28/30、180、360天血清中和抗体水平。已经获准生产的人用狂犬病疫苗需按照国家食品药品监督管理总局的要求申请批签发，仅有获得批签发合格证的狂犬病疫苗批次方可上市使用。分析 二、 中国动物狂犬病现状 在2004年至2018年期间，科研人员从17个省的185只疑似狂犬病动物中收集了动物脑组织，FAT（directfluorescentantibodytext（FAT），直接荧光抗体检测）检测后发现其中有144株（77．8％）为狂犬病病毒阳性样品。在阳性物种中，狗是主要感染动物，占总病例数的68．8％（99/144），其次是牛（12．5％），绵羊（9．7％），骆驼（4．2％），狐狸（2．1％），猪（1．4％），（0．7％）和驴（0．7％）。同时，研究人员在对中国7个省的健康犬进行主动监测的10，118个脑组织样本中，有33个（0．33％）呈FAT阳性。在33份阳性样本中，有31份来自随机检测狗和无主人的狗（包括流浪狗），另外2份来自紧急情况下被处死的狗（具体不详）。而对于畜禽狂犬病，科研人员查询到2013-2018年期间内蒙古和新疆报告了29例牛、绵羊和骆驼病例，且所有这些病例都是由狐狸叮咬引起。 三、 狂犬疫苗行业市场格局 2021年中国城镇家庭宠物猫的数量是5806万只，犬的数量是5429万只。整个城镇犬猫市场的规模达到2490亿，同比增长20．6%，比2021年社会消费品零售总额高8个百分点。 从渗透率来看，我国宠物市场增量空间仍较大。公开数据显示，我国城市养宠家庭为10%，宠物数量高达2．5亿只，其中猫与狗占大部分。对比美国、加拿大、英国以及日本的宠物渗透率分别高达68%、52%、40%、28%，中国宠物渗透率仅6%。 宠物经济增势强劲叠加涨价等因素，利好狂犬疫苗产业。据悉，受长生生物事件遗留影响，2021年哈尔滨、安徽以及河北等多地曾出现疫苗部分短缺的情况，此后新一轮的狂犬疫苗招标，河北、内蒙、海南等多个省市的狂犬疫苗中标价有所提升。据信达证券近日研究报告数据，2021年人用二倍体狂苗在广东、安徽、湖北等9个省均有提价，平均提价幅度为12%。 纵观目前国内狂犬疫苗市场，主要有三类狂犬疫苗，一是以成大生物（831550．OC）、赛诺菲为主的Vero细胞狂犬疫苗，二是以远大为主的地鼠肾细胞，三是以康华生物为主的人二倍体狂苗。其中Vero细胞狂苗市占率高达八成以上。 由于狂犬病患病高死亡率，狂犬病疫苗使用接种尤为刚性。据头豹研究院数据显示，2018年中国的狂犬疫苗行业市场规模为29亿元，2023年将有望达到70亿。近年来，国内狂犬疫苗每年的批签发总量维持在6000-8000万支，即1200-1600万人份（4-5针/人份），根据前瞻研究院数据显示，2020年，狂犬病疫苗批签发数量达到7．86亿剂，在中国所有疫苗种类中排名第一。由于产能受限和政策监管，市场一度供不应求，因此，不少企业选择在这一赛道掘金。 从供应企业来看，我国生产狂犬疫苗的企业有辽宁成大、广州诺诚、宁波荣安、河南远大等。凭借巨大的产能优势，辽宁成大占据着过半的市场份额，其批签发量占比达到47．2%;宁波荣安与大连雅立峰的批签发量占比分别为24．7%和7．5%;此外，成都康华三代狂犬疫苗的批签发量占比为4．7%。 四、 国内狂犬疫苗市场持续增长 近年来，随着我国狂犬病预防教育普及、人用狂犬病疫苗接种数量增加，我国狂犬病预防工作取得了重大进展，在控制狂犬病发病率方面起到了重要作用。2018年，中国人用狂犬疫苗市场规模达到28．4亿元，预计2022年将达到38．7亿元的市场规模。 Vero细胞人用狂犬病疫苗是狂犬病疫苗市场的主导者，占据75．0%的市场份额；人二倍体细胞培养狂犬病疫苗和原代细胞培养狂犬病疫苗（包括地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗和鸡胚细胞人用狂犬病疫苗）分别占据18．2%和6．8%的市场份额。 中国疾病预防控制中心报告显示，我国狂犬病疫情主要分布在人口稠密的华中、华南、西南、华东地区。人群分布上呈三多特征：农村地区病例较多、15岁以下儿童和50岁以上人群发病较多。中国的犬数超过1亿只，其中大部分在农村散养。消除狂犬病必须免疫动物，而与欧洲等发达国家的动物普遍免疫不同，中国接种疫苗的动物比例较少。因此，人用狂犬病疫苗属于刚性需求。随着人均可支配收入的增加，国内民众将愈发重视对疾病的预防和管理。随着中国人均可支配收入快速增长，人们付费接种疫苗的意愿和能力也将随之提高。此外，教育程度的提升会提高狂犬病疫苗接种率，这将促进人用狂犬病疫苗的销量增长。 五、 狂犬疫苗市场现状及前景分析 2022年1-6月兽用狂犬病疫苗签发批次均较2021年同期增长了约46．2%，截止2021年底总批签发数量为4536次，2015-2021年禽流感疫苗批签发次数年均批签发超过4000次。 近年来，我国狂犬病防控成效显著，狂犬病发病人数逐年下降，从2007年高峰时的3300例下降到2020年的202例，降幅高达94%。但由于狂犬病的高病死率，而且现在社会上饲养宠物猫狗的人越来越多，狂犬病防控仍然任重道远。 目前，我国大部分地区的狂犬病已呈低水平散发，部分地区已达区域性消除状态。但与此同时，也面临困难和挑战：我国传染源（犬只）数量庞大，约0．8-1．3亿只，分布广，而犬的免疫率不高;部分群众文明养犬意识淡薄，不登记、不免疫、随意遗弃犬只;狂犬病流行在农村地区，尤其是贫困地区更为严重。 中国每年卖出的人用狂犬疫苗数量都在1000-1500万份，也就是5000-7500万只疫苗。全球范围内，中国的狂犬疫苗产量和销量世界第一，但这并不是一个值得骄傲的成绩。其背后对应的是，在中国，每年最少有1000万人被狗咬伤，80%的狂犬疫苗都注射到了中国人体内，而在美国，人用狂犬疫苗一年的销量仅有5万份，不足在中国销量的1%。 数据显示，2020年中国狂犬疫苗批签发量7855．29万剂，同比33．5%，其中人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）、狂犬疫苗（Vero细胞）、狂犬疫苗（Vero细胞）冻干、冻干狂犬疫苗（人二倍体细胞）批签发量分别为492．46万（支/瓶/袋）、735．05万（支/瓶/袋）、6271．6万（支/瓶/袋）、356．19万（支/瓶/袋）。 中国疾病预防控制中心报告显示，我国狂犬病疫情主要分布在人口稠密的华中、华南、西南、华东地区。人群分布上呈三多特征：农村地区病例较多、15岁以下儿童和50岁以上人群发病较多。中国的犬数超过1亿只，其中大部分在农村散养。消除狂犬病必须免疫动物，而与欧洲等发达国家的动物普遍免疫不同，中国接种疫苗的动物比例较少。因此，人用狂犬病疫苗属于刚性需求。随着人均可支配收入的增加，国内民众将愈发重视对疾病的预防和管理。随着中国人均可支配收入快速增长，人们付费接种疫苗的意愿和能力也将随之提高。此外，教育程度的提升会提高狂犬病疫苗接种率，这将促进人用狂犬病疫苗的销量增长。 预计未来随着国内企业在宠物疫苗领域的研发投入加大，有望对进口产品实现替代。有行业分析报告指出，中国是全球最大的人用狂犬病疫苗市场，近年来人用狂犬病疫苗批签发量均保持在5000万剂以上。该市场预计到2030年，将增至145亿元。 狂犬病是由狂犬病毒引起的一种急性传染病。临床上对于狂犬病尚无有效的治疗办法。在暴露后接种狂犬疫苗可刺激机体产生抗狂犬病病毒免疫力，预防狂犬病。近年来，通过各种防疫措施，我国狂犬病发病人数不断下降。 六、 中国狂犬病疫苗行业市场现状分析 近年来，我国人用狂犬病疫苗批签发量均保持在5000万瓶之上。2019年我国人用狂犬病疫苗批签发量为5883万瓶，同比下降6．5%，批签发量下降的原因主要与行业事件导致长生生物停产及行业监管趋严有关。截至2020年我国人用狂犬病疫苗批签发量为6563万瓶，同比增长11．56%。 我国人二倍体狂苗批签发量从2016年的29．51万剂增长至2020年的370．36万剂，复合增长率高达88．2%。 七、 当前狂犬疫苗发展面临的问题与困境 疫苗的质量直接关系到国家公共卫生健康与安全，下一代人类疫苗通常是为了减少不良事件或提高现有疫苗的功效而开发的。目前上市的几款狂犬疫苗在预防狂犬病方面已经取得了巨大的成功，但仍然存在一定的局限性，因此仍然需要利用现代生物技术进一步改进完善。 疫苗本身开发模式具有特殊性：研发即生产。车间产能的持续迭代背后存在大量时间成本、审批成本，产量决定了临床规模及商业化规模。 血清问题：无血清培养是狂犬疫苗研制中世界性的技术难题，疫苗生产均使用动物来源的牛血清和猪胰酶，产品存在外源病毒因子污染风险，给后续产品生产带来挑战。降血清至无血清是国内疫苗生产企业共同的研究趋势。 二倍体狂犬疫苗安全性强，为狂犬疫苗未来主要发展趋势之一。但存在成本高、制备困难、产量低、大规模培养难度较大等