蛋白质的测定方法K9860凯氏定氮仪.doc

粗蛋白的测定（K9860凯氏定氮仪）一、 实验目的：掌握常见饲料原料、饲料及样品中粗蛋白的测定方法二、 实验原理：各种饲料的有机物质在还原性催化剂（如硫酸铜、硫酸钾、硫酸 钠或硒粉）的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮都转变 成NHf并与浓硫酸化合成硫酸鞍，而非含氮物质，则以CO2、H20. SO2状态逸 出消化液在浓碱的作用下进行蒸谓，释放出镀态氮，用硼酸溶液吸收之并与之 结合成为四硼酸镀，然后以甲基红■澳甲酚绿混合作指示剂，用HC1标准溶液（0.1 mol/1）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25 计算），即为粗蛋白的含量三、 K9860凯氏定氮仪实验试剂：1. 硼酸溶液（20g/L）：称取20 g硼酸，加水稀释至1000 mL；2. NaOH溶液（400 g/L）：称取400gNaOH,加水溶解，稀释至1000 mL； 注：NaOH溶于水大量放热，将大烧杯放入水中冷却配置时必须使用塑料烧杯，严禁使用玻璃制品配制NaOH溶液3. HC1标准滴定液（O.lmol/L）：移取8.3 mL盐酸，定容至1000 mL；（浓度 很重要，一定要搞准）4. 指示剂：称取O.lg甲基红和0.5g澳甲酚绿，用无水乙醇定容至100 mL； 5•催化剂：将CuSO4和K2SO4按照1:10比例混合，研磨均匀（3.3 g）；6. 硼酸溶液：在1000 mL 2%的硼酸溶液中加入10 mL指示剂；7. H2O：必须是蒸僧水，至容积的3/4处。

硫酸镀（GB 1396）：分析纯，干燥四、 K9860凯氏定氮仪操作步骤：1•试样的消化（每个样品三个平行）消化管洗净，烘干称取试样0.2〜0.5g准确至0.0002g,用长纸条送入消化瓶底 •部，同样加入0・3g硫酸铜，3g硫酸钾，与试样混合均匀，再加入10mL浓硫酸 和4粒玻璃珠，将消化瓶放在消化炉上（约420C）（在509通风橱内）直至呈 透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少3h以下实验操作为K9860凯氏定氮仪操作步骤（不会的可以问龙萌或者李阳）1检查仪器1」检查瓶盖是否旋紧，必须确认不漏气、不漏液；1・2检查进出水、排液管道是否通畅；1.3在整个测试过程中，若仪器出现异常，应立即暂停操作2开机开机前必须先打开冷凝水开关，然后打开电源开关3调试开机后的界面上会显示“调试、测试、查询”字样，光标默认在“调试"，按确 定”键进入“调试”状态3」按“选择”键选中“滴定”，然后“确定二让机器吸滴定用的盐酸润洗管道 及排除其中的空气（非常重要）,约需45・50秒,然后选择“排液”，重复2・3次 注意观察吸收瓶里的加入量（下拉把手即可看见）3.2按“选择”键中“硼酸二让机器吸硼酸润洗管道，约需3-4秒，然后选择“排 液”，重复2・3次。

注意观察吸收瓶里的接入量（下拉把手即可看见）注意：盐酸用量较少，硼酸可多用点，先盐酸后硼酸4检测选择“测试”（或者从菜单上面通过“选择”键，选择“测试二 然后“确定”）， 进入样品测试4」空白值：每次开机测一批样品，都要测系统空白值做法如下：放上干 净的空消化管，密封好设置好参数后，选择“测试二机器会自动进行测试 更换消化管，重复儿次，待测值稳定后（盐酸变化值在0.05ml范围内较好）， 算岀盐酸标定的平均值，即为空白值做此空白值是为了消除系统误差4.2设定参数：设定参数如下，样品重量为称量重量；滴定酸摩尔数为 0.1mol/L；蛋白转换系数为6.25；空白值（设为4」所测定的值）（空白只儿乎 不用改）；定标系数为系统默认4.3标准值：准确称取硫酸钱0.1・0.2g,精确到0.0002g,送到空消化管底部， 放在定氮仪上，测定如果测定结果中硫酸钱的含氮量为21.190.2%,则可以 继续测定，如果不是在此范围内，则要对盐酸的浓度进行调整，然后测定硫酸 鞍的含氮量，直达落在21.190.2%内为止4.4测定：按“确认”键开始测定，机器将自动依次进行“排液、加硼酸、加 碱、蒸懈、滴定、排液”过程。

滴定结束后，系统将自动打印结果（没有打印 纸，要记录在记录本上）排液”结束后，光标处于“继续"位置4.5取下消化管，换上下一个样品，重复步骤4.2和4.3,继续测定5关机（直接关闭电源即可）5.1关闭电源，将消化管取下，换上一根干净的空消化管，密闭好5.2将机身、消化管仓、试剂仓和机器周围桌面反复擦洗，清理干净5.3用洗衣粉将消化管洗涤干净，最后用蒸馆水润洗后放到60C烘箱中烘 干，收到消化管架中注意：消化管价格昂贵，洗的时候要轻拿轻放五、注意事项：5.1开机前必须打开冷凝水开关5.2仪器使用前要首先确定蒸馆水桶内水量是否充足，如水量不足请加入足量 蒸馆水，以免影响仪器正常使用5.3仪器的内部存储器按样品编号存储的，因此用户应注意样品编号的设置， 存储器是循环使用的，样品编号范围是1-1000,请不要轻易修改样品编号5.4在配制碱液、酸液的过程中要小心操作，以免被化学试剂灼伤5.5仪器中有玻璃器皿，因此在搬运过程中，需要当心5.6在需要修理仪器内部部件时，一定要关机并拔掉电源线，同时等待蒸馆系 统冷却下来5.7排废液的管路的出口要比仪器安放的高度要低，以使排液畅通5.8仪器长时间不用时，应将碱液桶中的碱液倒掉，并加入清水；将消化管装 上，手动加碱，将管路中的碱液加到消化管中，并用清水清洗管路，防结晶堵塞。

5.9为保证测试结果的准确，仪器每次开机后先做一个空白样品，用以清洁仪 器管路5.10消化管内最大溶液体积不超过消化管体积的2/3o。