胡萝卜的组织培养.docx

胡萝卜的组织培养（一）组织培养1. 准备（1） 器具准备：① 高压蒸汽灭菌锅： 培养基，接种工具，蒸馏水的消毒手持喷雾器： 装70%的酒精，用于外植体，接种工具，操作人员的消毒② 超净工作台： 用于无菌操作③ 设备：培养架，温度控制器，摇床，光照培养箱，烘干器，蒸馏水器，冰箱，电炉，天 平，温度计，酸度计，显微镜，分注器，移液器，磁力搅拌器，④ 常用玻璃器具：量筒，培养皿，烧杯，50ml锥形瓶，容量瓶，广口瓶，滴管，移液管， 试管，酒精灯，玻璃棒，⑤ 常用金属仪器：镊子，剪刀，解剖刀，解剖针，接种针，刀架⑥ 其他用品：滤纸，标签，消毒酒精棉球，封口用品（2） 试剂：MS基本培养基2,4-D:生长素类似物NAA：生长素类似物6-BA :细胞分裂素类似物酒精（体积分数70%）：消毒次氯酸钠（体积分数20%）：消毒无菌水2 .配制类别化合物称取量/mg扩大倍 数体积/mL1L培养基的吸收量/mL大量元 素储备 液nh4no3kno3CaCl2 • 2H2OMgSO4 • 7H2O KH'PO』33000380008800740034002020202020100050微量元素储备 液KI h3bo3MnSO4 • 4H2OZnSO4 • 7H2ONaMoO4 • 2H2O CuSO4 • 5H2O CoCl2 • 6H2O166124044601720505520020020020020020020010005铁盐储 备液FeSO4 • 7H2ONa2 • EDTA5560746020020010005有机物储备液肌醇烟酸维生素b6维生素B1甘氨酸200001001002040020020020020020010005A. MS基本培养基配方：上述4种储备液+30g蔗糖+8g琼脂+蒸馏水定容至1000mL(pH5.6〜5.8)B,分别向MS基本培养基中加入植物激素：(pH5.6〜5.8) 诱导愈伤组织形成培养基：MS+0.5mg/L 6-BA+0.125 mg/L2,4-D 诱导分化芽的培养基：MS+1.0mg/L 6-BA + 0.1 mg/LNAA 诱导生根的培养基：MS+0.1 mg/L NAA3. 灭菌：灭菌后冷却置于常温下观察3天，检查灭菌是否彻底。

4. 取材接种：a. 将萝卜洗净削皮切段，擦手消毒b. 在超净工作台上将萝卜用酒精消毒30秒，用无菌水清洗两到三次，用次氯酸钠溶液处理 30min，用无菌水清洗两到三次c. 用无菌滤纸吸取水分，在培养皿上用无菌刀将萝卜切成1cm厚的横切片，选取有形成层的部位，切取1cm2的小块d. 将组织块接种到培养基上，封口贴上标签，写明材料、日期、编号e. 将培养基放在23-26° C的恒温箱培养4天后观察材料污染情况，14天后，观察愈伤组 织生长情况5观察记录：每天观察外植体的生长情况，记录愈伤组织的大小、质地、颜色等情况6转接，培养：培养一段时间后，将生长良好的愈伤组织转接到分化培养基上，培养一段时 间后，胡萝卜的愈伤组织就可以诱导出试管苗二）露地栽培1. 培育壮苗:添加一定数量的生长延缓剂（如矮壮素、pp333）同时打开瓶盖，持续一周2. 选用合适的培养基3. 转栽试管苗:洗去附着在根系上的培养基4. 移栽后的条件控制:保持空气湿度，遮挡强光，降低温度5. 栽培。