三金片对大鼠慢性细菌性前列腺炎的作用及其机制研究.doc

三金片对大鼠慢性细菌性前列腺炎的作用及其机制研究郭超1石玲东1曾春1吴桂甫1凌兰兴1杨斌2（1广两医科大学药学院广两南宁530021;2广丙医科大学药理毒理教研室 广丙南宁530021）【摘要】目的探讨三金片对慢性细菌性前列腺炎的治疗作用及机制方法健康 成年雄性SD大鼠随机分为以下6组：空白对照组、模型对照组、阳性对照组、 三金片高剂量组、三金片中剂量组、三金片低剂量组前列腺注射大肠杆菌菌液 （107个/ml）,建立大鼠慢性细菌性前列腺炎模型给药14天后，观察三金片（高、中、低剂量组）对模型大鼠前列腺/体重系数比、前列腺组织中SlgA、NO, Zn2+ 的含量，以及细胞因子IL-lβ、TNF-α的含量结果三金片能够提高前 列腺组织中SlgA、Zn24•的含量，并能降低前列腺组织中NO、IL-lβ、TNF-α 的含量结论三金片对大鼠慢性细菌性前列腺炎有一定的治疗作用，其机制可 能与促进免疫，抗炎，升高组织内Zn2+浓度等有关关键词】慢性细菌性前列腺炎SlgA IL-lβ TNF-α Zn2+ NO慢性细菌性前列腺炎（CBP）是泌尿系统常见的多发病症，其发病原因多由革兰阴性细菌感染所致，其中最主要的是埃希蘭属。

［1］目前对于慢性细菌前 列腺炎的病理生理还不是十分清楚，治疗方法依然是以抗菌为主［2］而单纯使 用抗生素治疗效果不甚满意三金片为桂林三金集团研制生产的中药制剂，主要 成分有海金沙、金樱根、金刚刺（瑗葜）、八月札、积雪草等，有抗菌，消炎，提 高免疫等药理作用在祖国传统医学中，则異有清热解毒、利湿通淋、补虚益肾， 对肾虚湿热下注证的疗效显著目前在临床上已经使用三金片作为治疗慢性细菌 性前列腺炎的药物，疗效显著［3］，但其具体作用机制尚无报道，木课题即以该 药治疗慢性细菌性前列腺炎的机制作为切入点进行研究1实验材料 1.1实验动物健康的雄性大鼠，SPF级，60只,体重250±20g,广西医科大 学动物实验中心提供，生产许可证：SCXK桂2006-00051.2实验药品与试剂三金片，购自桂林三金药业股份有限公司，批号：1011018；大肠埃希 氏菌,ATCC25922国内编号:44113;诺佛沙星批号100606;大鼠分泌型免疫球蛋 白A （SlgA）酶联免疫分析试剂盒，批号S06075523;人鼠白介素-lβ定量酶 联免疫检测试剂盒，批号S06075524;大鼠肿瘤坏死因子α （TNF-α） 酶联免疫分析试剂盒，批号1101072； 一氧化氮合酶试剂盒，批号20110412；— 氧化氮试剂盒，批号20110411;梓离子测定试剂盒，批号20110701;1.3主要仪器雷勃 Thermo Multiskan Ascent 酶标仪。

2实验方法2.1大鼠慢性细菌性前列腺炎模型的建立随机抽取10之SD雄性大鼠，作为生理盐水对照组，其余50只为实验 组乙醚麻醉人鼠，切开下腹腔，轻轻挑起膀胱，是附着于膀胱外侧的前列腺充 分暴露实验组大鼠实验组大鼠从左侧腹叶注入新配制的大肠杆菌菌液（108个 /ml） 0.1ml，生理盐水对照组（NS组）注入生理盐水0.1ml，分别缝合腹壁肌肉和 皮肤，待大鼠清醒后放冋鼠笼内，自由饮食2.2药与分组实验组50只大鼠，在造模成功后分别随机的分为以下5组：模型对照 组、诺氟沙星（阳性对照）组、三金片高剂量组、三金片中剂量组、三金片低剂量 组造模成功的第7天后开始给药其中，三金片高剂量组、三金片中剂量组中、 三金片低剂量组的给药剂量分别为1.05g / 100g、0.525 g / 100g、0. 2625g / lOOg, 分别为人用剂量的5、10、20倍诺氟沙星组给药剂量为0. 014g / 100g,为人 用剂量的10倍生理盐水对照组、模型对照组则分别给予相同剂量的蒸馏水 以上各组均灌胃给药，每日1次分别于给药第I、7、14天给大鼠称重2.3各组人鼠前列腺/体重系数比连续给药14天后，脱颈椎处死大鼠，称重；另取前列腺组织，称重，并计算各组大鼠前列腺/体重比值。

2.4各组大鼠前列腺组织匀浆中SlgA IL-lβ TNF-α的测定给药14d后，各组大鼠脱颈椎处死，取前列腺组织，按比例加入生理盐 水，制成10%前列腺组织匀浆，离心后取上清液，用酶联免疫分析试剂盒分别测 定大鼠前列腺组织匀浆上清液中的SlgA、IL-lβ、TNF-α进行含量测定2.5各组大鼠前列腺组织匀浆中NO、Zn2+、NOS的测定连续给药14天后，颈椎脱臼处死大鼠，取前列腺制成10%匀浆，用比 色法测定大鼠前列腺组织匀浆中NO、Zn2+、NOS的含量2.6统计学处理应用SPSSI3.0软件进行统计分析，实验结果采用均数&plUSmn;标准差 (χ-±S)表示，采用t检验进行分析3结果3.1慢性细菌性前列腺炎人鼠前列腺/体重系数的比较各组大鼠前列腺/体重系数的比较(χ-±S)注：与模型组比较，* P<0.05，** P<O.OI各组大鼠的前列腺脏器系数显示，模型组的脏器系数与生理盐水组的脏 器系数有明显的统计学差异，艽数据可以说明模型组的前列腺奋不冋程度的萎缩 三金片高剂量，中剂量的脏器系数和模型组相比，冇明显差异，低剂量组无差别，说明三金片可以抑制慢性细菌性前列腺炎所导致的前列腺萎缩。

3.2各组大鼠前列腺组织匀浆中SlgA、IL-lβ、TNF-α的含量比较各组大鼠前列腺组织中SlgA、IL-lβ、TNF-α含量比较(n,χ-±S)注：①与模型组比较，* P<0.05, ** P<0.01o②给药过程中有动物死亡，原因为操作失误从实验结果可知，模型组的SlgA含量与生理盐水组比较，其含量明显 下降(P<0.05)o诺氟沙星(阳性)组，三金片高剂量组，三金片低剂量组与 模型组相比，SlgA的含量明显升高，而且有明显差异(P<0.05)三金片中剂 量组与模型组相比，无明显差异正常组大鼠前列腺内的IL-lβ含量与模型组大鼠前列腺内的 IL-lβ含量相比，奋明显的降低，(P<0.05)，三金片高剂量组与模型组相比， IL-lβ含量明显降低，有统计学差异(P<0.05),三金片中剂量，低剂量对 大鼠前列腺IL-lβ的含量有所降低，但差异无统计学意义正常组大鼠与模型组大鼠相比较，前列腺内TNF-α的含量明显降 低(P<0.05)，三金片中剂量与模型组比较，TNF-α含量明显下降， (P<0.05),三金片高剂量，低剂量对大鼠前列腺组织内TNF-α的含量与 模型组相比，有所下降，但其差异无统计学意义。

3.3各组大鼠前列腺组织匀浆中NO、Zn2+、的含量比较(n， χ-±S)各组大鼠前列腺组织匀浆中NO、Zn2+、的含量比较注：①与模型组比较，* P<0.05, ** P<0.01o②给药过程中有动物死亡，原因为操作失误从结果可知，模型组大鼠的NO含量与正常组相比，有显著地升高， (P<0.05),三金片高剂量组与模型组相比，NO含量下降，(P<0.05)；三金 片中剂量组，三金片低剂量组的NO含量与模型组相比，无明显差异模型组大鼠前列腺内的Zn2+含量与正常组大鼠相比，有显著地降低 (P<O.Ol),三金片高剂量组的Zn2+与模型组相比，含量明显增加，差异有明 显统计学意义(P<O.Ol),三金片中剂量组与模型组相比，Zn2+的含量明显增加，其差异有统计学差异(P<0.05)o三金片中剂量组与模型组比较,Zn2+的 含量有所增加，但差异无统计学意义4讨论0前，祖国的传统中医中药治疗慢性细菌性前列腺炎，主要包括从一下 方面：抗菌，抗炎，调节免疫，提高微量元素锌的含量等其中，中药的抗炎， 调节免疫作用，近年来在临床上受到重视。

调节免疫功能的机制可能与该类药物 可以增强调节细胞免疫功能，以及增强或调节体液免疫功能有关［4】肿瘤坏死因子(TNF-α)是机体产生的促炎症性细胞因子，在体内 参与炎症反应当发生感染或者免疫性疾病时,肿瘤坏死因子可见不同程度的升 高［5】另有报道认为，在慢性细菌性前列腺炎的发病过程中，肿瘤坏死因子可 能起到重要作用，主要通过对内皮细胞的作用,从而加剧局部炎症细胞浸润［6】 IL-lβ是一种旁分泌型细胞因子，在前列腺炎发生发展中，IL-lβ介导一 系列免疫炎症反应，从而产生一系列对细胞有损害作用的反应［7】实验结果显 示，慢性细菌性前列腺炎模型大鼠的前列腺组织中，其TNF-α、IL-lβ 的含量可见提高，在经过三金片治疗后，其含量冇一定程度的下降，说明三金片 能够抑制 TNF-α、IL-lβ的生成，从够抑制由 TNF-α和 IL-lβ 两种细胞因子所介导的免疫反应因此，可以得出：通过对免疫系统的调节是三 金片治疗慢性细菌性前列腺炎的重要机制之一分泌型免疫球蛋白A(SlgA)在前列腺液中并不依赖于血清的反应，SlgA 对感染性的病原体具有特异性对抗作用。

SlgA的含量占总IgA含量的60%以上, 有报道显示，前列腺对感染反应的主要是SlgA，目前，前列腺液中SlgA的含量 可作为是否患有慢性细菌性前列腺炎的诊断依据之一［8】实验结果表明，与模 型组比较，三金片能够提高慢性细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织内的SlgA的含 量，经过三金片治疗后，慢性细菌性前列腺炎大鼠前列腺内的SlgA含量己和正 常组比较无明显差异因此可以推断，三金片通过调节SlgA的含量水平，来增 强对感染性病原体的局部抵抗作用，从而改善机体的局部免疫功能这可能是三 金片治疗慢性细菌性前列腺炎的重要机制之一NO是生物体产生的一种自由基，既奋具奋第二信使的功能和神经递质 的能能，同时又具有细胞毒性,NO可在体内参与炎症反应，并且能够破坏正常的细 胞组织同时，NO可弥散至周围组织产生广泛炎症反应冇报道显示，内源性 NO在前列腺炎症的发生发展中扮演着重要角色［9］实验结果表明，细菌性前列 腺炎模型大鼠中，NO的含量与正常组相比，明显升高经过三金片治疗后，其 前列腺内的NO含量已明显下降，并II与正常组无差异，提示三金片可能是通过 抑制体内NO的合成，从而减轻机体组织的炎症反应锌是一种人体的微量元素，人体前列腺液或精液中的Zn2+含量明显高 于其它器官和体液。

在前列腺液中存在一种具含锌离子蛋白的抗炎活性物质 Zn2+作为多种酶系统的激活因子，可以奋效地减轻慢性细菌性前列腺炎组织的损 伤或炎症有报道显示，前列腺内的Zn2+与抗感染能力有关［10］此外，Fait等 人己经证实，前列腺中所含有的抗菌活性因子(RAF)的成分为自由锌本课题 研宄中，与正常组相比，慢性细菌性前列腺炎模型大鼠前列腺组织中Zn2+水降 低，经SjP治疗后，艽含量有一定的提高因此可以推断，三金片可以通过提高 前列腺组织内的Zn2+含量，来增强机体的抗菌作用，这可能为三金片治疗抗慢 性细菌性前列腺炎的另一重要机制参考文献［1】王墦.慢性细菌性前列腺炎药物治疗的进展［」］.赤峰学院学报(自然科学 版),2007,23(6).［2】晏斌，赖维奇.综合治疗慢性细菌性前列腺炎的效果分析［」］.西南军医，2010,12。