菌种保藏真空冷冻干燥法操作步骤.docx

菌种保藏真空冷冻干燥法操作步骤（总3页）本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21 year.March真空冷冻干燥法保藏菌种操作步骤操作过程1、安甑管准备选取规格约直径为8mm,高100mm的中性玻璃安甑管，先用2%盐酸浸泡8〜10h,再经自来 水冲洗多次，用蒸憾水涮洗2〜3次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字而朝向管 壁，管口塞好脱脂棉塞，12VC下高庄灭菌20分钟，备用2保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂，115°C下高压蒸汽火 菌25min,备用3冻干样品的准备⑶菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳泄期为好，抱子是新鲜的每支长好的斜 而加 2〜3ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起（注意勿刮起培养基），制成菌悬液如用液体培养的 菌种，则需经离心收集和用火菌生理盐水洗涤细胞，收集的菌体用保护剂悬浮制 成菌悬液悬 液中菌数要求达到108八1010 个/ml为宜悬液制备完成尽快分装和冻结分装安甑时可用火菌 的长滴入安甑管底部，每管分装量约〜毫升，分装安甑管时间尽量要短，最好在1-2小时内分装 完毕并预冻。

分装时应注意在无菌条件下操作4预冻-80°C冰箱预冻1-2小时5冷冻干燥将冷冻后的样品安甑管宜于冷冻干燥机的F燥箱内，开始冷冻干燥，时间一般为8-20小时 终止干燥时间应根据下列情况判断：①安甑管内冻干物呈酥块状或松散片状：②真空度接近空 载时的最高值；③选用1-2支对照管，其水份与菌悬液同量，视为干燥完结6真空封口将安甑管颈部棉塞以下处用强火焰拉细进行熔封7保藏安靠管保藏在20C冰箱里8活化如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外璧消毒，用蹑/敲下 已开裂的安瓯管的顶端，使管子破裂，在安音景管中加入lml液体培养基，慢慢旋转 安^管，是冻干菌种复水，然后直接接种到琼脂斜面或涂布平板。