实验1,大肠杆菌的培养和分离.doc

实验1,大肠杆菌的培养和分离 篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲 实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲 实验目的 1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作 2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养 3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理 实验材料 1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解 2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面） 实验步骤 1. 培养基灭菌 在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜既可以通气，又不使细菌进入将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时） 同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌 2. 倒平板，倒斜面 灭菌后待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯 将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面 倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL试管斜靠在平放的铅笔上，冷却凝固 3. 液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养 将大肠杆菌和有液体培养基的三角瓶放在左手中，靠近酒精灯火焰；右手拿着接种环，并用右手无名指和小指夹住斜面的棉塞和三角瓶封口膜接种环在火焰上烧红，再深入到斜面，使环接触培养基冷却后，再取菌种将菌体放入三角瓶的封口膜和斜面的棉塞复原三角瓶在37℃摇床上震荡培养12h（转速200转/分）这一步骤由老师完成4. 划线分离，分离菌种。

在酒精灯火焰上灼烧接种环，将摇床上培养12h的菌液（老师代做）打开，接种环部分深入到菌液中（只一次）然后，在固体培养基的平板上连续划，接种环只在菌液中蘸菌液一次，划线后盖好培养基将培养皿倒置（盖在下面），放在37℃恒温培养箱中培养12~24h后，可看到在划线的末端出现不连续的单个菌落，表明菌已经被分离 划线的目的是分离菌种用接种环以无菌 操作取细菌悬液一环，在平板培养基的一边， 做第一次平行划线2～3条转动培养皿约70 度角，用烧过冷却的接种环，通过第一次划线 部分，做第二次平行划线用同法通过第二次 平行划线，做第三次平行划线注：每下一次的划线之前都需要 将接种环灼烧灭菌，待接种环冷却后，接种环需通过上一次的划 线获得菌种后再进行下一次的划线分离（如图B、C，我们这么做 就是为了使第一次划线后的菌种浓度降低，以达到得到单菌落（分 离菌种）的目的） 5．菌种保存 在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种到斜面上，37℃培养24h后，4℃冰箱保存4℃是一个保菌温度篇二：大肠杆菌的培养与分离 一、大肠杆菌 1.大肠杆菌属于革兰氏________性菌,为________型的肠道杆菌。

2.结构:属于________生物 3.用途:是在________技术中被广泛采用的工具 4.与人类的关系:它生活在人类的________中,一般对人________(“有”还是“无”)害有一些菌株对人体能产生危害,因为它们可以侵蚀________并产生________任何大肠杆菌如果进入人的________系统,都会对人体产生危害 答案:1.阴 兼性厌氧 4.肠道 无 肠黏膜 毒素 泌尿 二、细菌的培养和分离 1.细菌的培养: (1)细菌的繁殖:细菌以________的方式繁殖,分裂速度很快,约________分裂一次 (2)培养细菌的方法:培养细菌,需要将________________________________________________________________________ 转移到________中,一般用________来转移带菌的培养物 (3)用不同培养基培养细菌的差别: 接种后,培养细菌的培养基类型 接种方法 接种后培养的时间(单位:小时) 培养结果 液体培养基 接种环直接接种 培养8 h后 每毫升培养基中有________个细菌 固体培养基 用接种环在培养基上用________________________________________________________________________的方式接种(该法还可以用于______) 培养10~20 h后 一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞,这些细胞 ________________________________________________________________________________,形成____________________________________________________________ 2.细菌的分离: (1)分离的方法与特点:分离细菌有________和________2种。

前者方法简单,后者操作复杂,但是______________________________________________________________更易分开 (2)本实验进行大肠杆菌分离,是用________法,就是在________培养基上进行细菌的________ 答案:1.(1)分裂 20 min (2)已有细菌的培养物 新的培养基 接种环 (3)几亿 划线 分离细菌 紧紧聚集在一起 菌落 2.(1)划线分离法 涂布分离法 单菌落 (2)划线分离 固体平面 划线培养 三、灭菌操作 1.灭菌操作的原因:为了获得________的培养物,其关键是防止外来________的入侵污染因此,在培养微生物时必须进行________操作 2.无菌操作的条件: (1)首要条件是________必须是无菌的; (2)________必须是无菌的; (3)________的过程必须是无菌的等 答案:1.纯净 杂菌 无菌 2.(1)各种器皿 (2)各种培养基 (3)菌转移操作 四、大肠杆菌的培养和分离实验 1.实验目的: (1)进行大肠杆菌的________,利用________培养基进行细菌培养的操作; (2)进行大肠杆菌的________,用________培养基进行细菌的________培养; (3)说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。

验步骤 (1)灭菌:用________在________压力下对lb液体培养基、lb固体培养基和培养皿进行灭菌________min (2)自________向________中转移并分装固体培养基: 待冷却至______左右,将三角锥形瓶中的______培养基,在______上分装至几个______中,制成______培养基 (3)将大肠杆菌自________转移到________中的________培养基中培养: 将大肠杆菌用________在无菌操作下接种至三角锥形瓶中的________培养基中,在________摇床振荡培养________,完成大肠杆菌的培养 (4)将菌液在________培养基上进行________分离: 从前一步培养得到的菌液中获取菌种,用________以__________法接种至第二步所制得的__________培养基中,在________℃恒温箱中培养________h后观察菌落 (5)菌种保存: 在无菌操作下将________用________取出,再用________法接种在________上,________培养________后,________冰箱保存。

3.分离实验的结果及相应结论: 观察中若看到在________的末端出现________,则表明菌已被分离了 4.大肠杆菌分离的用途:________的通用方法,也是用于________的最简便方法之一 答案:1.(1)扩增 液体 (2)分离 固体平面 划线 2.(1)高压锅 1 kg 15 (2)三角瓶 培养皿 60 ℃ 固体 超净台 培养皿 固体平面 (3)斜面 三角瓶 液体 接种环 液体 37 ℃ 12 h (4)固体平面 划线 接种环 划线 固体平面 37 12~24 (5)单菌落 接种环 划线 斜面 37 ℃ 24 h 4 ℃ 3.划线 不连续的单个菌落 4.消除污染杂菌 筛选高表达量菌株 核心解读hexinjiedu1.微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系? (1)概念内涵:其关系图解见下 (2)结构上:三者都是结构简单,形体微小的生物,但是从细胞角度看其结构是不同的,具体如下: 2.培养大肠杆菌的lb培养基中有各种物质,为什么选择这些物质,这些物质有什么作用呢? (1)人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出了供其生长繁殖的营养基质——培养基。

虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有五大营养要素,即水、无机盐、碳源(提供碳元素)、氮源(提供氮元素)和生长因子(不同的细菌需要的各不相同,有物种差异,它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的,但却是生长繁殖必需的物质)见下表: 微生物的营养要素 定义 功能 类型 化合物类型 常用物质 碳源 凡可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营养物质称为碳源 构成细胞物质,供给微生物生长发育所需要的能量 无机碳(自养型微生物用) 无机物 co2、nahco3、caco3等 有机碳(异养型微生物用) 蛋白质、核酸类 牛肉膏、蛋白胨、花生粉饼、明胶、氨基酸等 糖类脂质等 葡萄糖、蔗糖、淀粉等 氮源 凡是构成微生物的细胞物质或代谢产物中氮素来源的营养物质称为氮源 主要是提供合成原生质和细胞其他结构的原料,一般不作能源 无机氮 铵盐 nh3、(nh4)2so4 硝酸盐 kno3 n2 空气 有机氮 牛肉膏、蛋白胨、醇母膏、尿素、明胶等 生长因子 一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物 一般是酶和核酸的组成成分 酵母膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦芽汁等,复合维生素 水 作用:组成成分;反应介质;物质运输媒体;热的良导体 无机盐 作用:维持渗透压、ph等 (2)大肠杆菌的lb培养基 微生物的营养要素 本实验中大肠杆菌lb培养基配方 培养基配方与微生物营养要素的对应关系 lb液体培养基 。