血液学一般检查实验课.ppt

Logo血液学一般检查血液学一般检查Blood Testl【【目的目的】】  掌握显微镜红细胞掌握显微镜红细胞(red blood cell count, RBC)计数的原理及操作方法计数的原理及操作方法l【【原理原理】】  用用等渗稀释液等渗稀释液将血液以一定倍数将血液以一定倍数(200倍倍)稀释并充入计数池，在显微镜下计数稀释并充入计数池，在显微镜下计数一定区域一定区域内内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量Blood Testl【【器材器材】】l试管、试管架试管、试管架l2 ml吸管、吸耳球吸管、吸耳球l微量吸管、胶吸头、干脱脂棉微量吸管、胶吸头、干脱脂棉l玻璃棒l改良改良Neubauer计数板、盖玻片、绸布计数板、盖玻片、绸布l显微镜Blood TestMicropipettesMicropipettesMarkers: 10ul 20ul Warning lineBlood Testl【【试剂试剂】】  红细胞稀释液：枸椽酸钠红细胞稀释液：枸椽酸钠1.0 g ，，36%甲醛液甲醛液1.0ml，氯化钠，氯化钠0. 6 g，加蒸馏水至，加蒸馏水至100 ml，混匀，过滤两次后备用。

混匀，过滤两次后备用l【【标本标本】】  EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血抗凝静脉血或末梢血Blood Testl【【操作操作】】  l1．加稀释液．加稀释液  红细胞稀释液红细胞稀释液2 ml 于小试管于小试管l2．采血及加血．采血及加血  颠倒混匀样本，用微量吸管吸取颠倒混匀样本，用微量吸管吸取全血全血10μl，擦去管尖外部余血将吸管插入小试，擦去管尖外部余血将吸管插入小试管中红细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸管中红细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层红细胞稀释液清洗吸管取上层红细胞稀释液清洗吸管2～～3次 l3．充池．充池  充入计数池，放置充入计数池，放置2～～3 min l4．计数．计数  将光圈调到最小，光线调暗，用低倍镜将光圈调到最小，光线调暗，用低倍镜找到计数区和格子线，用高倍镜计数中央大方格找到计数区和格子线，用高倍镜计数中央大方格内内4角和正中，共角和正中，共5个中方格内的红细胞数个中方格内的红细胞数l5．计算．计算Blood TestBlood TestBlood TestBlood Test红红红红红红红红红红Blood TestBlood TestBlood TestBlood Testl红细胞数红细胞数/L=N/5*25*201*10*10E6=(N/100)*1012l【【参考值参考值】】  ①①成年人：男性（成年人：男性（4.09～～5.74））×1012/L，女，女 性性 (3.68～～5.13) ×1012/L。

②②新生儿：新生儿：(5.2～～6.4) × 1012/L ③③婴儿：婴儿：(4.0～～4.3) ×1012/L ④④儿童：儿童：(4.0～～4.5) ×1012/L 五个中方格计数和求均值乘以中方格数量乘以稀释倍数将0.1微升体积内的细胞数换算成升Blood Test【【注意事项注意事项】】 l1．器材．器材 l2．试剂．试剂  l3．标本．标本 l4．稀释液及稀释倍数．稀释液及稀释倍数 l5．采血．采血 l6．充池．充池 l7．计数．计数 Blood Test白细胞计数白细胞计数 l【【目的目的】】 掌握显微镜法白细胞计数（掌握显微镜法白细胞计数（white blood cell count）的方法l【【原理原理】】  采用采用白细胞稀释液白细胞稀释液将血液稀释一定的将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞将稀释的血液注入倍数，同时破坏溶解红细胞将稀释的血液注入血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量Blood Testl【【器材器材】】 同红细胞计数同红细胞计数,0.5ml吸管吸管l【【试剂试剂】】  白细胞稀释液：白细胞稀释液：2％冰乙酸溶液％冰乙酸溶液l【【标本标本】】  EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血。

抗凝静脉血或末梢血Blood Test【【操作操作】】 l1．加稀释液．加稀释液  吸取白细胞稀释液吸取白细胞稀释液0.38ml小试管中小试管中l2．采血及加血．采血及加血 颠倒混匀样本，用微量吸管吸取全血颠倒混匀样本，用微量吸管吸取全血20μl，擦去管尖外部余血将吸管插入小试管中白细胞稀释液，擦去管尖外部余血将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管管2～～3次l3．混匀．混匀  待细胞悬液完全变为棕褐色待细胞悬液完全变为棕褐色l4．充池．充池  再次将小试管中的细胞悬液混匀吸取细胞悬再次将小试管中的细胞悬液混匀吸取细胞悬液液1滴，注入计数板的计数池中，室温下静置滴，注入计数板的计数池中，室温下静置2～～3min，，待白细胞完全下沉后再做白细胞计数待白细胞完全下沉后再做白细胞计数l5．计数．计数 将光圈调到最小，光线调暗，用低倍镜找到计数将光圈调到最小，光线调暗，用低倍镜找到计数区和格子线，用低倍镜（或高倍镜）下计数四角区和格子线，用低倍镜（或高倍镜）下计数四角4个大方个大方格内的白细胞总数。

格内的白细胞总数Blood TestBlood Testl6．计算．计算 白细胞数白细胞数/L=（（N/4））*20*10*10E6=(N/20)*109l【【参考值参考值】】  ①①成人：（成人：（4～～10））×109/Ll②②儿童：（儿童：（15～～20））×109/L；；6个月～个月～2岁：（岁：（11～～12））×109/Ll③③新生儿：（新生儿：（15～～20））×109/L 四个大方格计数和求均值后乘以稀释倍数将0.1微升体积内的细胞数换算成升Blood Test【【注意事项注意事项】】 l类似于红细胞计数类似于红细胞计数l应注意白细胞较红细胞少，因此充池更加注重均应注意白细胞较红细胞少，因此充池更加注重均匀l稀释倍数，因细胞多少而异稀释倍数，因细胞多少而异Blood Test试验结束后试验结束后l将用过的标本、盖玻片、微量吸管和纸屑等丢到将用过的标本、盖玻片、微量吸管和纸屑等丢到大垃圾桶大垃圾桶l将玻璃试管用水冲洗干净倒插入试管架中将玻璃试管用水冲洗干净倒插入试管架中l将牛鲍计数板冲洗干净放入盒中将牛鲍计数板冲洗干净放入盒中l将显微镜按照背后的号码还原至盒中将显微镜按照背后的号码还原至盒中l关闭电灯，拔下插线板关闭电灯，拔下插线板。