南农动物繁殖学课件第九章.ppt

第九章第九章 配子与胚胎生物工程配子与胚胎生物工程－胚胎移植－胚胎移植本章内容本章内容u胚胎移植技术概述胚胎移植技术概述u胚胎移植的意义胚胎移植的意义u国内外发展概况国内外发展概况u胚胎移植的基本原则胚胎移植的基本原则u牛胚胎移植操作步骤牛胚胎移植操作步骤u山羊胚胎移植概述山羊胚胎移植概述八八戒戒飞飞抵抵岛岛城城跨跨国国娶娶妻妻v加拿大加拿大846846头猪运抵青头猪运抵青岛，价值岛，价值190190万美元万美元（（2007-10-172007-10-17））v成本高，时成本高，时间长，可用间长，可用ETET代替活体代替活体引种一、胚胎移植技术概述一、胚胎移植技术概述1.1.定义定义v胚胎移植是指将一头胚胎移植是指将一头良种母畜配种后的早期胚良种母畜配种后的早期胚胎取出（或通过体外受精及及其他方式得到体胎取出（或通过体外受精及及其他方式得到体外生产的胚胎），外生产的胚胎），移植到另一头移植到另一头同种且生理状同种且生理状态相同态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程v实际上是由实际上是由产生良种胚胎的供体产生良种胚胎的供体和和养育胚胎的养育胚胎的受体受体分工合作共同繁殖后代的技术。

分工合作共同繁殖后代的技术牛牛牛牛胚胚胚胚胎胎胎胎移移移移植植植植技技技技术术术术路路路路线线线线示示示示意意意意图图图图v着床前早期胚胎的游离状态；着床前早期胚胎的游离状态；v不同个体（物种）早期胚胎发不同个体（物种）早期胚胎发育内环境相似；育内环境相似；v不会发生免疫排斥不会发生免疫排斥2.2.理论基础理论基础发挥发挥优良母畜繁殖潜力优良母畜繁殖潜力羊每年自然繁殖：羊每年自然繁殖：2 2－－3 3只，胚胎移植：只，胚胎移植：1010－－1515只山羊繁殖山羊繁殖 供体生产胚胎供体生产胚胎 受体妊娠分娩受体妊娠分娩 后后 代代 18901890年年 英国第一次兔获得胚胎移植成功英国第一次兔获得胚胎移植成功19341934年年 绵羊绵羊19491949年年 山羊山羊19511951年年 猪猪19511951年年 牛牛19701970年年 马马19751975年年1 1月月 美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会19801980年代年代 欧洲使用欧洲使用MOET MOET 奶牛育种奶牛育种3. 3. 胚胎移植历史胚胎移植历史二、二、 胚胎移植的意义胚胎移植的意义v充分发挥优良母畜的繁殖潜力，扩大充分发挥优良母畜的繁殖潜力，扩大良种畜群良种畜群v加速育种进程加速育种进程v简化良种引进方法简化良种引进方法v保存品种资源保存品种资源v诱发单胎动物产双胎诱发单胎动物产双胎v研究手段研究手段v在胚胎移植中，供体母畜职能是生产遗传性能优秀在胚胎移植中，供体母畜职能是生产遗传性能优秀的胚胎，而胚胎后期发育完全可以由遗传性能一般的胚胎，而胚胎后期发育完全可以由遗传性能一般的代孕受体来完成。

的代孕受体来完成v母畜再通过促性腺激素处理后，一个发情周期中生母畜再通过促性腺激素处理后，一个发情周期中生产的胚胎数将比自然状态多几倍到几十倍，通过胚产的胚胎数将比自然状态多几倍到几十倍，通过胚胎移植其繁殖力可提高几十甚至是几百倍胎移植其繁殖力可提高几十甚至是几百倍1.1.充分发挥优良母畜的繁殖充分发挥优良母畜的繁殖潜力，扩大良种畜群潜力，扩大良种畜群 v以奶牛为例，按照目前的技术水平，供体母牛每隔以奶牛为例，按照目前的技术水平，供体母牛每隔60d60d可进行超排处理一次，每次能获得可用胚胎可进行超排处理一次，每次能获得可用胚胎4-54-5枚，一头良种母牛每年能生产可用胚胎枚，一头良种母牛每年能生产可用胚胎25-3025-30枚，移枚，移植到受体内能获得植到受体内能获得12-1512-15头头犊牛，而犊牛，而在自然状态下，在自然状态下，一头母牛平均每年只能获得一头犊牛一头母牛平均每年只能获得一头犊牛JIVET技术简介技术简介JIVET ：： juvenile in vitro embryo transfer幼畜胚胎体外生产与移植幼畜胚胎体外生产与移植激素诱导后的犊牛卵巢激素诱导后的犊牛卵巢•充分利用优良母畜的遗传资源充分利用优良母畜的遗传资源(多多) •缩短世代间隔，加快育种进程缩短世代间隔，加快育种进程 （快）（快）2.2.加速育种进程加速育种进程vMOETMOET技术能大幅度提高母畜繁殖力，扩大优秀母畜技术能大幅度提高母畜繁殖力，扩大优秀母畜在群体中的影响，增加后代选择强度。

在群体中的影响，增加后代选择强度v如在奶牛育种中，如在奶牛育种中，MOETMOET技术能技术能获得更多具有高产性获得更多具有高产性能的半同胞和全同胞，在较短的时间内达到后裔测能的半同胞和全同胞，在较短的时间内达到后裔测定所要求后代的数量，定所要求后代的数量，提早完成后裔测定工作，增提早完成后裔测定工作，增加选择强度和准确性，缩短育种进程加选择强度和准确性，缩短育种进程v应用应用MOETMOET核心群育种方案，公牛的遗传评定核心群育种方案，公牛的遗传评定时间可时间可缩短缩短4040％，％，生产性状的年遗传进展比生产性状的年遗传进展比常规的人工授精提高常规的人工授精提高2020％左右v如果在青年母牛或母羊中应用活体采卵和胚如果在青年母牛或母羊中应用活体采卵和胚胎移植技术，年遗传进展可胎移植技术，年遗传进展可提高提高3030％％-70-70％％3.3.简化良种引进方法简化良种引进方法v活畜引进活畜引进不仅价格高、运输不便、检疫和隔离程序不仅价格高、运输不便、检疫和隔离程序复杂，而且还存在风土驯化的问题复杂，而且还存在风土驯化的问题v胚胎移植与胚胎冷冻胚胎移植与胚胎冷冻技术相结合后，良种的引进可技术相结合后，良种的引进可简化为冷冻胚胎的引进，不仅运输方便、检疫程序简化为冷冻胚胎的引进，不仅运输方便、检疫程序简单、成本低廉，而且后代对引种地生态环境适应简单、成本低廉，而且后代对引种地生态环境适应性和抗病力增强。

性和抗病力增强v目前，牛羊胚胎移植与冷冻技术已成为国际、地区目前，牛羊胚胎移植与冷冻技术已成为国际、地区间良种遗传资源交流廉价而简便的方式间良种遗传资源交流廉价而简便的方式4.4.保存品种资源保存品种资源v结合结合胚胎冷冻技术胚胎冷冻技术为可保存国家或地区间特有的家为可保存国家或地区间特有的家畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，还可还可降低种质资源保存费用降低种质资源保存费用活畜保种不仅成本很活畜保种不仅成本很高、规模有限，而且还容易发生基因漂变胚胎冷高、规模有限，而且还容易发生基因漂变胚胎冷冻保种也优于精液冷冻保种，因为一个胚胎是一个冻保种也优于精液冷冻保种，因为一个胚胎是一个完整的个体，这样，冷冻或冷藏一个胚胎不仅保存完整的个体，这样，冷冻或冷藏一个胚胎不仅保存了一个个体的基因，也保存了基因组织了一个个体的基因，也保存了基因组织v而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，仅在一个世代内即可实现仅在一个世代内即可实现。

v胚胎冷冻保种不仅胚胎冷冻保种不仅成本低廉、方法简单成本低廉、方法简单，而且能，而且能避避免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质消亡消亡的风险5.5.诱发单胎动物产双胎诱发单胎动物产双胎v性别控制性别控制v避免异性孪生不育症避免异性孪生不育症 6.6.研究手段研究手段v目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后代，胚胎移植是代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道胚胎工程的最后一道“工序工序”因此，可以说它是因此，可以说它是胚胎工程技术的基础胚胎工程技术的基础胚胎移植技术与其他繁育技术的关系胚胎移植技术与其他繁育技术的关系v 胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一项胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一项基础性的、关键的技术基础性的、关键的技术人工授精核移植技术发情控制与超数排卵技术胚胎移植干细胞技术胚胎采集、鉴定与冷冻保存技术胚胎分割技术卵子体外成熟，体外受精嵌合体技术三、国内外发展概况三、国内外发展概况1.1.背景背景 胚胎移植技术是胚胎移植技术是2020世纪畜牧业中继人工世纪畜牧业中继人工授精技术之后又一次巨大变革，业已成为一授精技术之后又一次巨大变革，业已成为一项充分发挥优良母畜繁殖潜力的实用繁殖新项充分发挥优良母畜繁殖潜力的实用繁殖新技术。

技术•19511951年，美国诞生第一头胚胎移植犊牛年，美国诞生第一头胚胎移植犊牛•19761976年，牛非手术法胚胎移植获得成功年，牛非手术法胚胎移植获得成功v国国际际间间胚胚胎胎贸贸易易非非常常活活跃跃，，早早在在19941994年年，，全全世世界界仅仅胚胚胎胎移移植植牛牛就就已已超超过过350,000350,000头头，，其中进出口的胚胎约占总数的其中进出口的胚胎约占总数的10%10%v近近年年来来，，国国际际上上胚胚胎胎的的产产量量和和贸贸易易量量则则成成倍增长流动实验车（新疆）流动实验车（新疆）流动实验车（新疆）流动实验车（新疆） 2.2.发展前景发展前景• •我国胚胎移植技术已较成熟，基本技术队伍初步形成我国胚胎移植技术已较成熟，基本技术队伍初步形成我国胚胎移植技术已较成熟，基本技术队伍初步形成我国胚胎移植技术已较成熟，基本技术队伍初步形成• •农业产业结构的调整，畜牧业发展形势一片大好；农业产业结构的调整，畜牧业发展形势一片大好；农业产业结构的调整，畜牧业发展形势一片大好；农业产业结构的调整，畜牧业发展形势一片大好；• •胚胚胚胚胎胎胎胎移移移移植植植植技技技技术术术术作作作作为为为为扩扩扩扩大大大大良良良良种种种种牲牲牲牲畜畜畜畜数数数数量量量量的的的的一一一一种种种种最最最最好好好好手手手手段段段段，，，，将将将将在在在在畜畜畜畜牧牧牧牧业业业业生生生生产产产产中中中中起起起起到到到到越越越越来来来来越越越越大大大大的的的的作作作作用用用用，，，，胚胚胚胚胎胎胎胎移移移移植植植植技技技技术术术术产业化前景十分广阔。

产业化前景十分广阔产业化前景十分广阔产业化前景十分广阔 四、胚胎移植的基本原则四、胚胎移植的基本原则u移植前后所处的环境应是相同移植前后所处的环境应是相同或或相似的相似的u移植的时间要适宜移植的时间要适宜u胚胎的发育应当正常胚胎的发育应当正常v供体和受体在供体和受体在种属种属上必须一致；上必须一致； v供供体体和和受受体体在在生生理理上上必必须须一一致致：：供供、、受受体体在在发发情情时时间间上上应应同同期期化化，，一一般般相相差差不不超超过过24h24h，，否否则则移移植植成功率显著下降；成功率显著下降；v从从供供体体中中收收集集胚胚胎胎的的部部位位与与给给受受体体移移植植胚胚胎胎的的部部位位必必须须一一致致：：即即从从供供体体子子宫宫角角内内收收集集到到的的胚胚胎胎应应该移植到受体的子宫角内该移植到受体的子宫角内1.1.移植前后所处的环境应是相同或相移植前后所处的环境应是相同或相似的似的Follicular (egg) development, hormonal changes, endometrial (uterine lining) changesv胚胚胎胎收收集集与与移移植植的的时时间间不不能能超超过过周周期期黄黄体体的的寿寿命命，，因因此此，，胚胚胎胎的的收收集集时时间间不不能能超超过过发发情情配配种种后后第第7 7天天，，最最好好是是在在发发情情配配种种后后的的第第5-75-7天天内进行。

内进行2.2.移植的时间要适宜移植的时间要适宜v胚胎的收集及移植过程应当严格按照要求进行，胚胎的收集及移植过程应当严格按照要求进行，尽量不使其受到物理、化学或生物方面的影响尽量不使其受到物理、化学或生物方面的影响v同时，胚胎移植前需进行鉴定，确定其发育正常同时，胚胎移植前需进行鉴定，确定其发育正常者才能进行移植者才能进行移植3.3.胚胎的发育应当正常胚胎的发育应当正常 五、牛胚胎移植操作步骤五、牛胚胎移植操作步骤Ø供、受体牛的选择供、受体牛的选择Ø供体的超数排卵与人工授精供体的超数排卵与人工授精Ø受体的同期发情受体的同期发情Ø胚胎的收集胚胎的收集Ø胚胎的检查和评定胚胎的检查和评定Ø胚胎的移植胚胎的移植1.1.供、受体的选择供、受体的选择v供供体体应应是是良良种种，，而而且且为为性性状状表表现现优优秀秀、、具具有有较较高高育种价值与遗传优势的个体；育种价值与遗传优势的个体；v供供体体应应健健康康无无病病，，膘膘情情中中等等偏偏上上，，年年龄龄以以青青壮壮年年为佳；为佳；v供供体体生生殖殖机机能能应应处处在在较较高高水水平平既既无无难难产产、、流流产产等等繁繁殖殖病病史史，，也也无无子子宫宫卵卵巢巢疾疾病病，，超超排排处处理理前前应应有两个或两个以上的正常情期。

有两个或两个以上的正常情期 1.1 1.1 供体母畜的选择供体母畜的选择ü一般选用一般选用价格低廉、生产性能比较低的同种母畜，达到配价格低廉、生产性能比较低的同种母畜，达到配种年龄和体型；种年龄和体型；ü要具有良好的健康状态，体型与膘情中上等，初产或经产要具有良好的健康状态，体型与膘情中上等，初产或经产青壮年母畜检疫和疫苗接种与供体相同；青壮年母畜检疫和疫苗接种与供体相同；ü应具有良好的繁殖性能，既无难产、流产等繁殖病史，也应具有良好的繁殖性能，既无难产、流产等繁殖病史，也无子宫卵巢疾病，无子宫卵巢疾病，移植胚胎前应有两个或两个以上的正常移植胚胎前应有两个或两个以上的正常情期，也不能与公畜同群情期，也不能与公畜同群 1. 1.2 2 受体母畜的选择受体母畜的选择2.1 2.1 超排定义超排定义v在母畜（供体）发情周期的某一时期，用外源性在母畜（供体）发情周期的某一时期，用外源性的促性腺激素处理，从而促使其卵巢上较正常有的促性腺激素处理，从而促使其卵巢上较正常有更多个卵泡同时发育，并且能够同时或准同时排更多个卵泡同时发育，并且能够同时或准同时排出多个具有受精能力的卵子，这一技术称为超数出多个具有受精能力的卵子，这一技术称为超数排卵，筒称排卵，筒称“超排超排”。

2.2.供体的超数排卵与人工授精供体的超数排卵与人工授精v牛有牛有PGPG法和法和CIDACIDA法两种；法两种；v发情后发情后9 9－－1313天开始；天开始；v常用的激素为常用的激素为FSHFSH；注射方法一般是连续；注射方法一般是连续4d4d递减注递减注射射, ,每天每天2 2次次, ,间隔间隔1212小时（半衰期短）小时（半衰期短）；；v发情后发情后8 8－－1212小时配种，间隔小时配种，间隔1212小时再配种一次小时再配种一次 2.2 2.2 超数排卵方法超数排卵方法v在在发发情情周周期期第第1010、、1111、、1212、、1313天天每每头头牛牛分分别别肌肌注注FSH FSH 160160、、140140、、110110、、90 90 单单位位（（共共500IU)500IU)，，每每天天分分两两次次注注射射，，在在第第1212天天注注射射FSHFSH的的同同时时肌肌注注PGPG，，上上午午2 2支支/ /头，下午头，下午1 1支支/ /头v发情后供体发情后供体AIAI或配种或配种2 2-3 3次供体牛的超排方案供体牛的超排方案 3.3.受体的同期发情受体的同期发情3.1 3.1 定义定义v利用某些外源激素利用某些外源激素人为控制人为控制并调整一群母畜发情并调整一群母畜发情周期的过程周期的过程, ,使之在预定的时间内集中发情使之在预定的时间内集中发情, ,以便以便有计划地合理组织胚胎移植所进行的同期化处理有计划地合理组织胚胎移植所进行的同期化处理方法方法, ,也称也称同步发情同步发情。

v缩短黄体期的前列腺素法缩短黄体期的前列腺素法(PG(PG法法) )v延长黄体期的孕酮法延长黄体期的孕酮法 3.2 3.2 同期发情方法同期发情方法 PGF PGF2α2α有溶解黄体的作用，从而引起发情，所有溶解黄体的作用，从而引起发情，所以只对卵巢上存在黄体的受体有效以只对卵巢上存在黄体的受体有效v在情期第在情期第9 9天以后，注射天以后，注射PGFPGF2α2α，常可在注射后，常可在注射后2-32-3天内发情天内发情(WHY?)(WHY?)v对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔对于不能确定发情周期的受体，可采用间隔10-1210-12天的两次注射法天的两次注射法v此方法方便可靠，但费用较高此方法方便可靠，但费用较高v为何要进行两次注射？为何要进行两次注射？ 3.2.1 3.2.1 前列腺素处理法前列腺素处理法s母牛发情周期母牛发情周期 第第7-17天，对前列腺素（天，对前列腺素（PG）有反应）有反应v孕孕酮酮能能够够抑抑制制腺腺垂垂体体释释放放FSHFSH，，每每日日肌肌注注或或口口服服孕孕酮酮，，或或经经阴阴道道海海绵绵栓栓给给予予孕孕酮酮或或其其类类似似物物，，一一般般处处理理12-1812-18天天后后，，可可以以抑抑制制卵卵泡泡发发育育。

停停止止处处理理或或撤撤除除海海绵绵栓栓后后，，孕孕酮酮的的抑抑制制作作用用消消失失，，卵卵巢巢上上即即有卵泡发育，通常在有卵泡发育，通常在2-32-3天内发情天内发情v为为了了提提高高排排卵卵的的效效率率，，在在孕孕激激素素处处理理结结束束的的前前一一天，可以给予小剂量的天，可以给予小剂量的FSHFSHv此法费用低，但处理时间长此法费用低，但处理时间长 3.2.2 3.2.2 孕激素处理法孕激素处理法4.1 4.1 冲卵液和保存液的制作冲卵液和保存液的制作v冲卵液有很多种，目前最常用的为含冲卵液有很多种，目前最常用的为含5%5%犊牛血清犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBSD-PBS），也可用于体外），也可用于体外短期保存胚胎短期保存胚胎v保存时间长或体外培养多用保存时间长或体外培养多用M-199M-199液4.4.胚胎的收集胚胎的收集 4.2 4.2 回收过程回收过程v牛牛适宜于适宜于5-75-7日龄日龄胚胎胚胎; ;v现现均均采采用用二二通通管管非非手手术术采采卵卵法法：：用用直直肠肠把把握握子子宫宫颈颈法法插插入入带带有有探探针针的的二二通通管管直直至至一一侧侧子子宫宫角角的的基基部部，，通通过过打打气气孔孔注注入入8--10ml8--10ml空空气气, ,抽抽出出探探针针，，通通过过中中心心管管道道反反复复注注入入----回回收收冲冲卵卵液液, ,连连续续5--65--6次次。

同样方法冲另一侧子宫角同样方法冲另一侧子宫角PBS集卵杯集卵杯子宫颈子宫颈 子宫角子宫角卵巢卵巢 牛的非手术法回收胚胎牛的非手术法回收胚胎a.a.冲卵液冲卵液 b.b.硬膜外麻醉硬膜外麻醉 c.c.插入子宫中的插入子宫中的FoleyFoley管管 d.d.子宫颈子宫颈v子子宫宫角角回回收收的的液液体体较较多多，，可可以以通通过过专专用用胚胚胎胎漏漏斗斗除除去去多多余余的的冲冲卵卵液液，，在在连连续续变变倍倍解解剖剖显显微微镜镜（实体显微镜）下进行（实体显微镜）下进行检卵检卵；；v胚胚胎胎的的质质量量评评定定：：主主要要采采用用形形态态学学方方法法，，优优质质胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植胚胎才能用于进行胚胎冷冻或移植 5. 5.胚胎的检查和评定胚胎的检查和评定vA A级级; ;形态完整形态完整, ,轮廓清晰轮廓清晰, ,呈球形呈球形, ,分裂球大小均分裂球大小均匀匀, ,透明带适中；透明带适中；vB B级级; ;轮廓清晰轮廓清晰, ,色调和细胞密度良好；色调和细胞密度良好； vC C级级; ;轮廓不清楚轮廓不清楚, ,色调发暗色调发暗, ,结构较松散结构较松散, ,游离的游离的细胞和液胞较多；细胞和液胞较多； vD D级级; ;轮廓模糊轮廓模糊, ,色调暗色调暗, ,结构松散结构松散, ,碎片细胞和液碎片细胞和液泡很多。

泡很多 5.1 5.1 胚胎的分级标准胚胎的分级标准 5.2 5.2 不同发育阶段的正常胚胎不同发育阶段的正常胚胎5.3 5.3 未受精卵或异常胚胎未受精卵或异常胚胎2-cell4-cell8-cell16-cellMorulaBlastocyst5.4 5.4 正常胚胎的形态正常胚胎的形态 6.6.胚胎的移植胚胎的移植v重点应检查重点应检查子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张子宫和卵巢的异常情况以及子宫的紧张性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小）性，然后检查卵巢上黄体的发育情况（位置、大小），只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，只有黄体发育良好者才能正式列为待移植母牛，，并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧并记录和在牛臀部标出黄体位于左右哪一侧 v牛站立保定于六柱栏保定架内，用牛站立保定于六柱栏保定架内，用2%2%盐酸利多卡因盐酸利多卡因或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用或普鲁卡因进行荐尾椎硬膜外麻醉，用1818号针头，号针头，每只牛约每只牛约5ml5ml1.1.受体母牛的准备受体母牛的准备1.1ml注射器 2.装管接头 3.细管A.棉塞 B.气泡 Ⅰ、Ⅲ、保护液 Ⅱ.含胚段装管器械和装管方法装管器械和装管方法2.2.胚胎的移植方法胚胎的移植方法直肠把握法直肠把握法20032003年年9 9月月4 4日降生的良种胚胎移植牛日降生的良种胚胎移植牛 （江苏省农业三项工程项目） 受体黄牛与胚胎移植生产的良种肉牛受体黄牛与胚胎移植生产的良种肉牛 （江苏省农业三项工程项目） 外国专家来访外国专家来访外国专家来访外国专家来访六、山羊胚胎移植概述六、山羊胚胎移植概述山羊胚胎移植产业化1.1 1.1 超排方案超排方案v超超排排方方案案1(FSH+PG1(FSH+PG法法) )：：从从供供体体发发情情周周期期的的第第9-139-13天天开开始始注注射射FSHFSH，，以以日日递递减减剂剂量量连连续续注注射射3 3天天6 6次次，，每每次次间间隔隔1212小小时时, ,总总剂剂量量为为150-300IU150-300IU，，在在第第5 5次次注注射射FSHFSH的的同同时时肌注氯前列稀醇肌注氯前列稀醇0.10.1毫克。

毫克 1.供体的超数排卵技术v超超排排方方案案2(CIDR+FSH+PG2(CIDR+FSH+PG法法) )：：在在发发情情周周期期的的任任何何一一天天给给供供体体阴阴道道内内放放入入CIDRCIDR，，计计为为0 0天天，，然然后后于于第第9-139-13天天任任何何一一天天开开始始肌肌注注FSHFSH，，递递减减法法连连续续注注射射3 3天天共共6 6次次，，在在第第5 5次次肌肌注注FSHFSH时时取取出出CIDRCIDR，，并并肌肌注注氯氯前前列列稀稀醇醇0.10.1毫毫克克，，一一般般在在取取出出CIDRCIDR后后24-24-4848小时发情小时发情 2.2.胚胎的回胚胎的回收收v 场所、器械和人员的准备场所、器械和人员的准备v 供体羊的术前准备：供体羊的术前准备：术前术前1 1日停止喂食但日停止喂食但不停水；术部剃毛；麻醉现多用速眠新处理；不停水；术部剃毛；麻醉现多用速眠新处理；术部皮肤先用术部皮肤先用2%-4%2%-4%的碘酒消毒，晾干后再的碘酒消毒，晾干后再用用70%-75%70%-75%的酒精棉涂擦脱碘将创巾固定的酒精棉涂擦脱碘将创巾固定在术部周围并露出术部。

在术部周围并露出术部2.1 2.1 术前准备术前准备 2.2 2.2 手术过程手术过程v皮皮肤肤用用外外科科刀刀一一次次切切开开，，4 4—6 6厘厘米米肌肌肉肉用用钝钝性性分分离离的的方方法法沿沿肌肌纤纤维维的的走走向向分分层层切切开开，，最最后后切切开开腹腹膜膜注意及时止血注意及时止血v手手术术者者将将食食指指及及中中指指由由切切口口伸伸入入腹腹腔腔触触摸摸子子宫宫角角，，用用二二指指夹夹持持，，因因势势利利导导地地牵牵引引至至创创口口表表面面，，先先循循一一侧侧的的子子宫宫角角至至该该侧侧的的输输卵卵管管，，在在输输卵卵管管的的末末端端弯弯转转处处找找到到该该侧侧的的卵卵巢巢，， 观观察察卵卵巢巢表表面面的的排排卵卵点点和和卵卵泡发育情况并做记录泡发育情况并做记录2.3 2.3 冲洗输卵管法冲洗输卵管法v适宜于适宜于2--32--3日龄日龄的胚胎 v将一根长将一根长5-7cm5-7cm，外径，外径3-4mm3-4mm的硅胶管插入输卵管的硅胶管插入输卵管喇叭口内喇叭口内1-1.5cm1-1.5cm，用血管夹或手固定固定以，用血管夹或手固定固定以左手母指和食指捏住子宫角前端，右手持吸有冲左手母指和食指捏住子宫角前端，右手持吸有冲卵液的针管并将针头插入子宫角尖端，注入冲卵卵液的针管并将针头插入子宫角尖端，注入冲卵液约液约1010—15ml15ml。

 输卵管回收胚胎示意图输卵管回收胚胎示意图供体的冲胚供体的冲胚2.4 2.4 冲洗子宫法冲洗子宫法v适宜于适宜于5-75-7日龄胚胎日龄胚胎 子子宫宫角角回回收收胚胚胎胎示示意意图图( (1 1) ) 子宫角回收胚胎示意图子宫角回收胚胎示意图(2)(2)v用用作作受受体体的的母母畜畜应应具具有有明明显显的的发发情情症症状状，，发发情情时间应与供体母畜一致时间应与供体母畜一致v羊采用羊采用手术法移植手术法移植v受、供体同时做好术前准备，在进行胚胎检查受、供体同时做好术前准备，在进行胚胎检查的同时或之后，立即在受体母畜腹部做一切口，的同时或之后，立即在受体母畜腹部做一切口，轻轻拉出子宫角，找到排卵侧的卵巢并观察黄轻轻拉出子宫角，找到排卵侧的卵巢并观察黄体数量与发育情况体数量与发育情况3. 3. 胚胎的移植胚胎的移植v只有黄体发育良好的受体才能用于胚胎移植，只有黄体发育良好的受体才能用于胚胎移植，黄体过小、发育异常或退化的受体都不能用于黄体过小、发育异常或退化的受体都不能用于胚胎移植，否则很难受孕胚胎移植，否则很难受孕v卵巢上有卵巢上有1 1个黄体的受体一般只给移个黄体的受体一般只给移1 1枚胚胎，枚胚胎，有有2 2个或个或2 2个以上黄体者可以移个以上黄体者可以移2 2枚胚胎。

枚胚胎v根据胚胎的发育阶段以及回收与移植部位根据胚胎的发育阶段以及回收与移植部位一致的原则，用移植管将胚胎注入黄体同一致的原则，用移植管将胚胎注入黄体同侧子宫角前端或通过喇叭口侧子宫角前端或通过喇叭口送至输卵管壶送至输卵管壶腹部腹部（如图），然后迅速复位、缝合如图），然后迅速复位、缝合v注意：注意：保护受体卵巢黄体保护受体卵巢黄体 山羊手术法移胚山羊手术法移胚A.A.子宫移胚器子宫移胚器 B.B.子宫角移胚子宫角移胚 C.C.输卵管移胚输卵管移胚1.1.移植针移植针 2.2.硅胶管硅胶管 3.3.吸有胚胎的细管吸有胚胎的细管 麻醉、固定麻醉、固定刮刮 毛毛消毒消毒 供体的手术供体的手术超排后的黄体超排后的黄体 非正常的卵巢：大卵泡非正常的卵巢：大卵泡供体的冲胚供体的冲胚检检 胚胚 移植胚胎移植胚胎缝缝 合合 供体受体的解麻供体受体的解麻 受体与产的羔羊受体与产的羔羊 肉羊基地与胚胎移植产业化肉羊基地与胚胎移植产业化扬中市种羊场扬中市种羊场 如东县种羊场如东县种羊场 睢宁波尔种羊场睢宁波尔种羊场 丰县合作种羊场丰县合作种羊场 苏州湖羊种羊场苏州湖羊种羊场 东台新街种羊场东台新街种羊场 常州新世纪农业常州新世纪农业 萧县恒发牧业公司萧县恒发牧业公司 睢宁南非波尔种羊场睢宁南非波尔种羊场 如皋天顺恒牧业公司如皋天顺恒牧业公司 南京农业大学南京农业大学 动物胚胎工程技术中心动物胚胎工程技术中心 2002 2002年年8 8月月5 5日，时任江苏省省委书记的回良玉副总理视察日，时任江苏省省委书记的回良玉副总理视察睢宁基地睢宁基地—睢宁波尔种羊场。

睢宁波尔种羊场　　 南京农业大学动物胚胎工程技术中心常州南京农业大学动物胚胎工程技术中心常州基地基地本章小结本章小结u重点重点 胚胎移植步骤胚胎移植步骤 胚胎移植意义胚胎移植意义u难点难点 手术法移植和非手术法移植手术法移植和非手术法移植思考题思考题u胚胎移植的意义胚胎移植的意义u胚胎移植的生理基础胚胎移植的生理基础u羊的手术法移植羊的手术法移植谢谢谢谢! !个人观点供参考，欢迎讨论。