总25羟基维生素D操作规程.docx

文件编号：YHBE-JYK-MYS-01125羟轟生素D测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：41-45页25羟基维生素D测定标准操作规程1 检验申请单独检验项目申请：25羟基维生素D测定（缩写VD-T）；组合检验项目申请： 贫血组合项目测定；临床医生根据需要提出检验申请2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中或采用含分离胶的真空 采血管2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科专人负责标本的接收 并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于 0.3ml 的全血标本，或少于 0.1ml 的血清或血浆2.1.5.2 对于测定和吸样有干扰的标本2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等2.2 标本保存2.2.1 接收标本后在 30min 内将标本离心分离出血清, 避免溶血。

2.2.2 标本保存时间：室温（15〜25°C ）下可稳定8h，普通冰箱中（2〜8°C） 稳定48h需较长时间保存应将血清存放于-20C冰冻标本仅可冻融一次为 避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1d的标本均加塞密闭或覆盖 湿巾2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置2〜8C冰箱内保存7d2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动2.3.2 采血后应使血液充分凝固，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维 蛋白；可使用选用分离胶促凝的血液标本3 方法原理VD-T 测定采用竞争化学发光免疫分析法，其检测原理来如下： 第一步：将标本、预处理试剂1和预处理试剂2 添加到反应管中，经过孵化， 释放出与维生素 D 结合蛋白结合的 25-羟基维生素 D第二步：将预处理后的标本，抗25-羟基维生素D抗体碱性磷酸酶结合物添加 到反应管中，经过孵化，样本中的 25-羟基维生素 D 和抗 5-羟基维生素 D 抗体碱 性磷酸酶结合物形成复合物第三步：将生物素化25-羟基维生素D和链霉亲和素磁珠添加到反应管中，结合 剩余的 25-羟基维生素 D 抗体碱性磷酸酶结合物。

经过孵化，磁场吸住磁珠，洗 去未结合的物质第四步：将化学发光物添加到反应管内，发光底物（AMPPD ）被碱性磷酸酶所 分解，脱去一个磷酸基，生成一个不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电文件编号：YHBE-JYK-MYS-01125羟轟生素D测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：41-45页子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发 态返回基态时，产生化学发光，再通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行 测量所产生光子数与样本内的25-羟基维生素 D 浓度成正比样本内分析物的 量油校准曲线来确定4 试剂及其他用品4.1试剂：专用25羟基维生素D测定试剂盒，由深圳迈瑞公司出品未打开的 试剂包保存于2〜8°C内，有效期365天开启的试剂包载入系统中可使用28d4.2 试剂盒组分4.2.1试剂1磁珠包被物（Ra）： 组分包被着链霉亲和素的超顺磁性微粒，悬浮于缓冲液，含防腐剂原料及含量：包被着链霉亲和素抗的超顺磁性微粒， 0.2g/L;Tris 缓冲液，50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L。

装量:2X30 人份/盒，2X2.7ml； 2X50 人份/盒,2X3.8ml； 2X100 人份/盒,2 X 6.6ml4.2.2试剂2酶标记物（Rb）组分：抗 VD-T 抗体-碱性磷酸酶标记物稀释于缓冲液，含防腐剂原料及含量：抗VD-T抗体-碱性磷酸酶标记物，3mg/L;磷酸盐缓冲液，200mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L4.2.3试剂3生物素结合素（Rc）：生物素-25-羟基维生素 D 结合物稀释于缓冲液，含防腐剂 原料及含量：生物素 -25-羟基维生素 D 结合物， 1ug/l；Tris 缓冲液， 50mmol/L,Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L装量:2X30 人份/盒，2X2.4ml； 2X50 人份/盒,3.5ml； 2X 100 人份/盒,6.3ml4.2.4试剂4样本处理液（PT1）组分：样本处理液 1原料及含量：Tris 缓冲液，50mmol/L;Proclin300,0.5g/L;叠氮钠，0.9g/L装量：2X30 人份/盒，2X2.1ml； 2X50 人份/盒，3.0ml； 2X100 人份/ 盒,5.3ml。

4.2.5试剂5样本处理液（PT2）组分：样本处理液 2原料及含量：0.5M氢氧化钠溶液装量：2X30 人份/盒，2X1.5ml； 2X50 人份/盒，2.0ml； 2X100 人份/盒,3.3ml4.2.6 试剂包即开即用，临用时轻柔颠倒混匀数次，无须特殊准备4.3 其他试剂与用品4.3.1 化学发光底物：发光剂底物液4.3.2 清洗缓冲液、反应杯等5 校准品与校准模式5.1校准品：深圳迈瑞公司提供的配套校准液，需贮2〜8C5.2 校准类型和校准点数目：非线性模式，5个校准点5.3校准周期：在同一批号试剂的使用效期内校准曲线有效，但在间隔28d后文件编号：YHBE-JYK-MYS-01125羟轟生素D测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：41-45页需要重新校准每当：①更换试剂批号或出现质控漂移时；②仪器进行全面保养 后；③仪器的重要零件更换后，进行一次校准5.4 校准液重建方法：液体试剂，直接使用6 质控品与室内质控规则6.1 质控品：采用深圳迈瑞公司提供配套的质控品6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。

6.3 质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次6.4质控规则：采用L-J质控图，以±3s为失控限标准差由本室实验数据得 出6.5 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时 纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测7 适用仪器深圳迈瑞公司CL-1200i自动发光免疫分析仪8 标本检测步骤装载试剂f进行校准f进行质控f输入标本检测项目f加载标本 f标本测定f结果复核f报告9 主要分析参数 无须输入操作参数，仪器根据预设的分析项目参数和试剂条码的信息自动进行分 析标本量40吐10 结果计算仪器根据校准曲线自动给出每个标本测定结果测定结果单位以ng/mL表示11 检验结果的报告及范围11.1 结果的报告11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和 审核者签名，并有与申请单相同的医学信息11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出11.2报告范围：30 ~ 300ng/mL,超过此范围的结果报告时必须附有证明该结 果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。

12 操作性能12.1 精密度：批内CVV6.5%，批间CVV7.5%12.2 分析范围：3~150 ng/mL12.3 灵敏度：4.0ng/mL12.4 方法的有限性及干扰因素：胆红素W 20mg/L、TG <1500 mg/L、Hb <5 0g/dL, TPW10g/dL时，测试结果的干扰偏差在±10%范围内当样本中RF浓度<400IU/ml时测试结果的干扰偏差在±15%范围内当样 本中含ANA干扰物时，测试结果的偏差在±10%范围内13 参考范围及医学决定水平参考值（血清）： 30.00 ~ 300.00ng/mL14 临床意义文件编号：YHBE-JYK-MYS-01125羟轟生素D测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数:41-45页14. 1由于25-0H-VD是人体内维生素D的主要储存形式，因此，通过检测 25-0H-VD可以确定总体维生素D的情况25-OH-VD检测的临床应用主要与佝偻 病（儿童），骨软化症、绝经后骨质疏松和肾性骨病的诊断、治疗和监测有关维 生素D缺乏还和许多其他的疾病有关，包括癌症、心血管疾病、自身免疫性疾病、 糖尿病和抑郁症。

测定25-OH-VD可应用于：1•监测骨相关疾病例如佝偻病（儿童）、骨软化症、绝经后骨质疏松症和肾性 骨病或非骨相关疾病补充维生素D的效果2. 诊断维生素D毒性，例如有可疑毒性的患者（高钙血症）3. 诊断维生素D不充足或缺乏，有助于确认那些可能通过补充维生素D达到 最佳水平从而受益的个体15 结果审核以及与相关项目的联系15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核15.2 审核者认真审核每一个测定结果，对发出报告结果的可靠性负责，并在报 告单的审核者处签名15.3 相关项目：审核与临床用药情况是否相符，如出现与临床不符甚至相悖的 情况，应分析与查找原因16 有关引用程序与文件16・1 CL-1200i自动发光免疫分析仪仪器标准操作规程16.2 免疫检验室内质控标准操作程序16.3 检验结果审核程序16.4 标本送检和接收程序17 参考文献17.1 陆永绥，张伟民主编.临床检验管理与技术规程. 杭州：浙江大学出版社, 2004.17・2 25羟基维生素D测定试剂盒说明书17.3 叶应妩，王毓三，申子瑜主编. 全国临床检验操作规程 （第三版）. 东南 大学出版社，2006.18本SOP变动程序 任何一位使用本SOP的工作人员如提出对本SOP改动意见，或本测定项目的方法、 试剂有变动的情况，可以对本SOP作出改动，但必须先报经专业主管和科主任批 准。

19本SOP涉及的记录与表单19.1 剂装载记录表19.2 质控记录19.3 失控及失控处理记录19.4 检验结果审校核记录文件编号：YHBE-JYK-MYS-01125羟轟生素D测定编制人：刘凤婷生效日期：2018年1月1日审核人：钟剑版本号/修订号：1/4批准人：张延亮发布部门：检验科页码数：41-45页。