RNA恒温扩增技术快速检测（ＴＢ－ＳＡＴ）痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病的临床观察.doc

RNA恒温扩增技术快速检测(T E — S A T )痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病的临床观察哈尔滨市胸科医院150056结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病由于肺结核病的症状，体征和 X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别肺结核病确诊目前我 们在临床主要靠痰涂片和痰结核菌培养阳性來定诊但是依据常规痰涂片阳性率 低，痰培养时间长需45天，这些原因给快速诊断病情带来困难2014年我院引 进RNA恒温扩增技术快速检测痰结核分枝杆菌给临床带来希望一种利用RNA 恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒目的用RNA恒温扩增实时检测(SAT —TB)快速检测临床痰标本中的MTB,并对检测效果进行评估方法痰标本取 自哈尔滨市肺科医院的肺部感染性疾病与肺结核鉴别的患者 资料和方法1 •研究对象；2014年7月至2015年1月就诊于哈尔滨市胸科医院的患者 76例，男43例，女76例年龄最高89岁，最少7岁平均年龄48岁咳嗽 46例，胸闷23,咳痰31,低热19.,高热3例咳血6例，体检发现肺阴影3 例盗汗8例消瘦10例76例病人肺CT显示肺部阴影不能除外肺结核2 .方法，以上病例全部留取痰结核菌涂片，痰结核菌培养，及T B-S AT结核 菌。

TB-S AT原理；同一温度下，首先通过M・MLV反转录酶产生靶标核酸(RNA)的一个双链DNA拷贝，然后利用T7 RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多 个(100〜1000个)RNA拷贝；每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增 循环；同时，带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光该荧 光信号可由荧光检测仪器实时捕获，实时反映扩增循环情况3 •结果；痰结核培养阳性4例，痰涂片阳性6例，TB-S AT阳性5例诊断 明确肺结核6例，临床诊断30例肺癌7例肺炎18,声带结核2例，间质肺2例支气管扩张2例，肺化脓2例，淋巴瘤1例讨论；结核病是由结核分枝杆菌引起的肺部疾病由于肺结核病的症状， 体征和X线表现同许多胸部疾病相似肺，因此在诊断时常需鉴别肺结核病确诊 目前我们在临床主要靠痰涂片和痰结核菌培养阳性来定诊但是依据常规痰涂片 阳性率低，痰培养时间长需45天，这些原因给快速诊断病情带来困难2014年 我院引进RNA恒温扩增技术快速检测痰结核分枝杆菌给临床带来希望一种利 用RNA恒温扩增的结核分枝杆菌核酸检测试剂盒RNA检测的优势美国基因 探针公司Gen-Probe——RNA转录介导RNA恒温。

国内为SAT技术，即实时荧光 的TMAe RNA扩增技术用于病原体检验的优势可以区分“死菌” “活菌病 原体死亡，RNA很快降解可以诊断“活动性感染”，指示RNA转录活跃潜伏 感染：指示RNA不转录不易污染：靶标和扩增产物都是RNA操操作简单一 —无需核酸提取，最快2小时出结果可区分结核杆菌和非结核分枝杆菌更高 的灵敏度和特异性但是我们发现76例患者仅5例TB-S AT阳性，同时这 5例患者痰结核菌阳性，灵敏度83%临床诊断30例经过抗结核治疗均好转 因此我们认为T B-S AT检查在痰结核阳性病人的检测中阳性率高，痰结核菌 阴性的患者TB-S AT检查也是阴性研究结果没有提高结核分枝杆菌的检出 率・，可能是标本留的时间较长，或其他人为因素还待观察总之RNA恒温扩增 技术快速检测(T B — S A T)痰结核杆菌在鉴别肺部感染性疾病为我们提供了 一个检测方法值得探讨在目前对诊断鉴别肺感染性疾病基础上，又提供了一种 新的既经济又易掌握的技术方法Objective To study the cross-resista nee betwee n rifampi n and rifabuti n in multidrug resista nt Mycobacterium tuberculosis complex strains, and therefore to provide laboratory data for using rifabuti n in the treatme nt of multidrug resista nt tuberculosis.Methods An alysis was con ducted on drug susceptibility tests to ison iazid, rifampin, ofloxacin, streptomycin, ethambutoh amikacin and capreomycin of the pulm on ary tuberculosis patie nts with sputum culture positive in Shanghai Pulm on aryHospital Affiliated Tongji Uniersity from June2009to January2011.The MIC90of rifabuti n and rifampi n agai nst99multidrug resista nt Mycobacterium tuberculosis clinical strains were determined by microplate assays.Results The cross-resistanee rate between rifampin and rifabutin was85・9%， but the MIC90of rifabutin ($amp； $lt； 16mg/L, median2mg/L) was sign讦icantly lower than those of rifampin ($amp； $gt； 2mg/L, median$amp； $gt； 32mg/L) .The MIC90of rifabutin were8to32times lower tha n those of rifampi n.The cross-resista nee strains in the lower and the media n groups were0/9and5/9respectively, the strains of the higher rifampin-resistant group were almost all cross-resistant (98.8%, 80/81) (χ2=9.14, P$amp； $lt； 0.01) .The cross-resista nee rate betwee n rifampi n and rifabuti n in creased with the resista nee level of rifampin.lt was con firmed that differe nt drug resista nee spectrum (P=0.799) was not significantly associated with the cross-resistance rate between rifampin and rifabutin.Conclusions Rifabutin had activities against multidrug resistant Mycobacterium tuberculosis complex strains in vitro, and therefore may be used as an alter native for the treatme nt of multidrug resista nt tuberculosis.。