第四章中药制剂含量测定.ppt

第四章中药制剂含量测定v样品品处理的目的理的目的第一第一节 样品品处理理1. 释放被放被测组分，制成分，制成稳定定试样2. 除去除去杂质，，纯化化3. 浓缩或衍生化或衍生化4. 试样形式符合形式符合测定的要求定的要求——使其符合所使其符合所选定的分析方法的要求定的分析方法的要求v一、一、样品的粉碎品的粉碎 目的目的——取取样均匀，提取完全均匀，提取完全›粉碎粉碎设备——粉碎机、研粉碎机、研钵、匀、匀浆机机注意：粒度大小合适注意：粒度大小合适 防止防止污染或染或损失失溶溶剂的的选择v水、酸水、碱水水、酸水、碱水v亲水性的有机溶水性的有机溶剂：乙醇（酒精）、甲：乙醇（酒精）、甲醇（木精）、丙醇（木精）、丙酮v亲脂性的有机溶脂性的有机溶剂：石油：石油醚、苯、、苯、氯仿、仿、乙乙醚、乙酸乙、乙酸乙酯、二、二氯乙乙烷v二、二、样品的提取品的提取关关键——提取完全提取完全1.1.浸泡提取法浸泡提取法›冷浸法冷浸法 v优点：操作点：操作简单，适于，适于热不不稳定的定的样品，且提取品，且提取杂质少少v缺点：缺点：费时（（12-24 h）、）、费溶溶剂（（10-50倍）倍）›放置或指定放置或指定25℃℃›温浸（温浸（40℃℃~50 ℃℃）） ›热水浸泡（水浸泡（70℃℃~80 ℃℃）） 部分部分测定法定法——等量等量测定法定法全部全部测定法定法——总量量测定法定法灵宝灵宝护心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量心丹（牛黄、麝香等）中胆酸的含量测定定 取本品适量，研取本品适量，研细，取，取约0.5g，精密称定，置具塞，精密称定，置具塞锥形瓶中，加石油形瓶中，加石油醚（（60-90℃℃））4ml，浸泡，浸泡1小小时，，滤过，，滤渣及渣及滤纸挥去溶去溶剂，放回，放回锥形形瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（瓶中，精密加入冰醋酸无水乙醇溶液（1 → 10））15ml，，摇匀，密塞，匀，密塞，称定重量，浸泡称定重量，浸泡12小小时，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（，再称定重量，用冰醋酸无水乙醇溶液（1 → 10））补足减失的重量，足减失的重量，摇匀，匀，滤过，取，取续滤液作液作为供供试品溶液。

品溶液1.1.浸泡提取法浸泡提取法2.2.回流提取法回流提取法加快溶出速度，省加快溶出速度，省时（每次提取（每次提取时间0.5~2h，提取次数，提取次数1~3次）次）适宜受适宜受热稳定的定的药物物适宜适宜较难溶出的溶出的组分分特点特点采用回流装置，用采用回流装置，用单一溶一溶剂或混合溶或混合溶剂于水浴上加于水浴上加热回流提取回流提取万万应胶囊（黄胶囊（黄连等）中等）中盐酸小檗碱酸小檗碱测定定+HCl-70%乙醇溶液，加热回流1h3.3.连续回流提取法回流提取法特点特点样品置于索氏提取器中，利用低沸点的品置于索氏提取器中，利用低沸点的有机溶有机溶剂进行行连续回流提取回流提取保和丸（保和丸（陈皮等）中橙皮皮等）中橙皮甙测定定+甲醇，加甲醇，加热回流至提取液无色回流至提取液无色为止止节省溶省溶剂，提高提取效率，提高提取效率适宜受适宜受热稳定的定的药物物费时4.4.超声提取法超声提取法利用超声波的助溶作用利用超声波的助溶作用进行提取超声波振超声波振荡器（超声波清洗器）器（超声波清洗器）简便便 省省时 提取率提取率高高保保济丸（厚朴等）中厚朴酚丸（厚朴等）中厚朴酚测定定+石油石油醚（（30-60℃℃），超声），超声处理（功率理（功率500W，，频率率33kHz））2次，每次次，每次30min5.5.超超临界流体萃取法界流体萃取法（（SFE））以超以超临界流体（常用界流体（常用CO2）作溶）作溶剂的的样品提取新技品提取新技术。

当当压力和温度超力和温度超过气体的气体的临界点界点时所形成的所形成的单一相一相态超超临界流体界流体——特殊的物特殊的物质状状态密度密度 d ~ 液体液体 → 溶解能力溶解能力强粘度粘度 ~ 气体气体 → 传质快，有利于待快，有利于待测组分的分的扩散散表面表面张力几乎力几乎为 0 → 浸浸润性能好性能好密度受密度受压力、温度的影响大力、温度的影响大→ 改改变对溶溶质的溶的溶解能力，加入甲醇、解能力，加入甲醇、氯仿、苯等改仿、苯等改变极性极性→ 提提取不同极性的成分取不同极性的成分优点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、点：速度快、萃取效率高、方法准确度高、选择性性较高高1.沉淀法沉淀法v二、二、样品的分离品的分离净化化关关键——保留有效成分保留有效成分复方益母草口服液中水复方益母草口服液中水苏碱的含量碱的含量测定定利用雷氏利用雷氏盐（硫（硫氰酸酸铬铵）作沉淀）作沉淀剂，在酸性介，在酸性介质中可与大部中可与大部分有机碱生成分有机碱生成难溶于水的配合物与其它溶于水的配合物与其它杂质分离 2.蒸蒸馏法法w适用于具适用于具挥发性的待性的待测组分，如分，如挥发油、油、小分子的生物碱、丹皮酚等小分子的生物碱、丹皮酚等3. 液液—液萃取法液萃取法v直接萃取法直接萃取法›萃取萃取剂的的选择 亲脂性有机溶脂性有机溶剂，如苯、，如苯、氯仿或乙仿或乙醚 弱弱亲脂性的溶脂性的溶剂，如乙酸乙，如乙酸乙酯、正丁醇等、正丁醇等›多次萃取（多次萃取（3-43-4次）次）›调整水相酸度，提取有机酸、有机碱整水相酸度，提取有机酸、有机碱›利用利用盐析作用，提高提取率析作用，提高提取率BH+（水相）+ In-(水相) BH+·In-（水相） BH+·In- （有机相） ›适合于高度适合于高度电离的有机酸、碱化合物的萃取离的有机酸、碱化合物的萃取 水相酸度的控制 离子对试剂的选择v离子离子对萃取法萃取法v分离的原理：吸附色分离的原理：吸附色谱、分配色、分配色谱、离子交、离子交换色色谱、、 凝胶色凝胶色谱v按操作方式：柱色按操作方式：柱色谱、薄、薄层色色谱、、纸色色谱v装柱方法：湿法装柱、干法装柱装柱方法：湿法装柱、干法装柱v微柱色微柱色谱（固相萃取）（固相萃取）›柱的大小：柱的大小：长5～～15cm，内径，内径0.5～～1cm ›柱填料：硅胶、氧化柱填料：硅胶、氧化铝、活性炭、聚、活性炭、聚酰胺、大孔胺、大孔树脂、硅藻土、离子交脂、硅藻土、离子交换树脂、脂、键合相硅胶合相硅胶C8、、C18等等 4. 色色谱法（法（层析法）析法）v制制剂中所中所选被被测成分主要是：成分主要是： 化学化学结构已构已经明确的有效成分；明确的有效成分； 能大致明确的某能大致明确的某类主要活性物主要活性物质；； 能反映某味主要能反映某味主要药物特征的指物特征的指标性成分；性成分； 剧毒性成分或毒性成分或贵重重药材的成分。

材的成分第二第二节 常用含量常用含量测定方法定方法v常用方法：常用方法： 高效液相色高效液相色谱法；法； 气相色气相色谱法；法； 薄薄层色色谱法；法； 紫外可紫外可见分光光度法；分光光度法； 化学分析法化学分析法 重量分析法重量分析法 容量分析法容量分析法第三第三节 含量含量测定方法定方法验证分析方法分析方法验证的目的的目的 是是证明采用的方法适合于相明采用的方法适合于相应的的检测要求需需验证的分析的分析项目目 鉴别试验、、杂质检查、原料、原料药及制及制剂中有效成分含中有效成分含量量测定及其它成分定及其它成分测定定验证内容内容 准确度、精密度、准确度、精密度、专属性、属性、检测限、定量限、限、定量限、线性、性、范范围和耐用性和耐用性 准确度是指准确度是指测得得结果与真果与真实值或参考或参考值接接近的程度，表示分析方法近的程度，表示分析方法测量的正确性量的正确性 准确度准确度（Ａ（Ａccuracyccuracy）） 由于由于““真真实值””无法准确知道，因此，通无法准确知道，因此，通常采用回收率（常采用回收率（% %）来表示。

来表示  要求至少要求至少测定高、中、低三个定高、中、低三个浓度，每个度，每个浓度度测定三次，定三次，共提供共提供9个数据个数据进行行评价中中药制制剂含量回收率一般含量回收率一般为95%~105%，，RSD一般一般应为2％以内 用已知用已知纯度的度的对照品做加照品做加样回收回收测定，即于已知被定，即于已知被测成分成分含量的供含量的供试品中再加入已知品中再加入已知纯度的被度的被测成分成分对照品回收率回收率计算公式算公式为：：回收率回收率%=C-AB×100%A 供供试品所含被品所含被测成分量成分量B 加入加入对照品量照品量C 实测值 系指在系指在规定定测试条件下，同一均匀供条件下，同一均匀供试品，品，经多多样取取样测定所的定所的结果之果之间接近的程度接近的程度精密度精密度（（precisionprecision））在在药物分析中，常用相物分析中，常用相对偏差偏差(RD)(RD)、、标准偏差准偏差（（S S）和相）和相对标准差（准差（RSDRSD）表示至少至少 6 6 次次结果果进行行评价价精密度是考察分析方法在不同的精密度是考察分析方法在不同的时间、操作人、操作人员、、实验室，所室，所获得得结果之果之间的重的重现性和重复性和重复性。

性 1.1.重复性重复性 在在较短短时间间隔内，在相同的操作条件下由隔内，在相同的操作条件下由同一分析人同一分析人员测定所得定所得结果的精密度果的精密度精密度精密度验证内容包括重复性、中内容包括重复性、中间精密度精密度和重和重现性性2.2.中中间精密度精密度 在同一在同一实验室，由于室，由于实验室内部条件的室内部条件的改改变，如不同，如不同时间由不同分析人由不同分析人员用不同用不同设备测定所得定所得结果的精密度果的精密度3.3.重重现性性 在不同在不同实验室由不同分析人室由不同分析人员测定定结果的精果的精密度 是指在是指在样品介品介质中有其他中有其他组分（如分（如杂质、降解、降解产物、物、辅料等）可能存在下，采用的方法能准料等）可能存在下，采用的方法能准确确测定出被定出被测物的特性物的特性专属性属性（（specificityspecificity）） 检测限（限（limit of detection, LODlimit of detection, LOD））试样中被中被测物能被物能被检测出的最低出的最低浓度或量 定量限定量限（（limit of quantitation, LOQlimit of quantitation, LOQ））是指在保是指在保证具有一定准确度和精密度的前提具有一定准确度和精密度的前提下，分析方法能下，分析方法能够测定出的定出的样品中品中药物的最物的最低量。

低量 线性（性（linearitylinearity））在在设计的范的范围内，内，测试结果与果与样品中供品中供试物物浓度成正比关系的程度度成正比关系的程度范范围（（rangerange））范范围指能达到一定精密度、准确度和指能达到一定精密度、准确度和线性，性，测试方法适用的高低限方法适用的高低限浓度或量的区度或量的区间表示：表示：mg/L~mg/L 耐用性耐用性（（robustnessrobustness））指在指在测定条件有小定条件有小变动时，，测定定结果不受影果不受影响的承受程度响的承受程度v高效液相色高效液相色谱法法v双黄双黄连口服液的含量口服液的含量测定（反相定（反相HPLC外外标一点法）一点法）v [含量含量测定定] 黄芩黄芩 照高效液相色谱法（附录VI D）测定v 色色谱条件与系条件与系统适用性适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:1）为流动相；检测波长为274nm理论板数按黄芩苷峰计算应不低于1500v 对照品溶液的制照品溶液的制备 取黄芩苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。

v 供供试品溶液的制品溶液的制备 精密量取本品1ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理20分钟，放置至室温，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得v 测定法定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，测定，即得v 本品每1ml含黄芩按黄芩苷（C21H18O11）计，不得少于8.0mgv 金金银花花 照高效液相色谱法（附录VI D）测定。