化妆品中水杨酸的检测方法.doc

1附件 2：化妆品中水杨酸的检测方法1 适用范围本方法规定了采用液相色谱-紫外法测定化妆品水杨酸（CAS：69-72-7）含量的方法本方法适用于肤用产品和淋洗类发用产品中水杨酸含量的测定2 方法提要样品在经过提取后，经高效液相色谱仪分离，二极管阵列检测器检测，根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量，以标准曲线法计算含量本方法对水杨酸的检出限为 0.0007 μg，定量下限为 0.002 μg；取样品 0.25 g，则检出浓度为 15 g/g，最低定量浓度为 40 g/g3 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水以下操作均在避光条件下进行3.1 水杨酸，纯度＞99.0%3.2 甲醇，色谱纯3.3 磷酸，优级纯3.4 氨水，优级纯，含量 25.0%~28.0%3.5 甲醇水溶液：甲醇 + 水（75 + 25） 3.6 流动相的配制：磷酸溶液：称取 11.5 g 磷酸（3.3） ，精确至 0.01 g，加入 950 mL 水，用氨水（3.4）调节 pH 至 2.3~2.5，加入水至 1000 mL流动相 A 液：量取磷酸溶液 200.0 mL，并用水稀释至 1000 mL。

流动相 B 液：量取磷酸溶液 250.0 mL，并用甲醇（3.2）稀释至 1000 mL3.7 水杨酸标准储备液（ρ = 1.0 g/L）：称取水杨酸 0.05 g，精确到 0.0001 g，于 50 mL 棕色容量瓶中，加入甲醇水溶液（3.5）溶解并定容至 50 mL，即得质2量浓度为 1 mg/mL 的水杨酸标准储备溶液避光保存，五 5 日内稳定3.8 系列浓度水杨酸标准溶液：配制质量浓度分别为 5 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、150 μg/mL 和 200 μg/mL 的系列水杨酸标准工作溶液4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具有二极管阵列检测器4.2 分析天平：感量 0.0001 g4.3 电子天平：感量 0.01 g4.4 pH 计：精度 0.014.5 超声波清洗器4.6 涡旋振荡器5 测定步骤5.1 样品处理称取试样 0.25 g，精确至 0.001 g，置于 25 mL 具塞比色管中，加入甲醇水溶液（3.5）20 mL，涡旋 60s，分散均匀，超声（功率：400W）提取 15 min，冷却到室温后，用甲醇水溶液（3.5）定容至 25 mL 刻度线，涡旋振荡摇匀，混液过 0.45 m 有机系滤膜，滤液可根据需要用甲醇水溶液（3.5）进行稀释，保存于 2 mL 棕色进样瓶中作为待测样液，备用。

避光保存，五 5 日内稳定5.2 色谱条件色谱柱：耐酸性 C8 柱，250 mm×4.6 mm i.d.，5 m，或等效色谱柱；流动相梯度洗脱程序：时间/min V（A 液）/% V（B 液）/%0.0 80 2010.0 10 9015.0 10 9015.1 80 2020.0 80 20流速：1.2 mL/min；3检测波长：300 nm；柱温：25℃；进样量：20 L5.3 测定在 5.2 色谱条件下，取系列浓度的标准溶液（3.8）分别进样，进行色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，建立标准曲线，得到回归方程取“5.1” 项下处理得到的待测溶液进样，根据测定成分的峰面积，代入回归方程计算水杨酸的质量浓度按“6 计算” ，计算样品中水杨酸的含量5.4 平行实验按以上步骤操作，对同一样品独立进行平行测定获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%6 计算 610DVwm式中：w —— 化妆品中水杨酸的质量分数，%；m —— 样品取样量，g； —— 测定成分的峰面积代入回归方程计算所得的水杨酸质量浓度，g/ mL；V —— 样品定容体积，mL；D —— 稀释倍数（不稀释则为 1） 。

7 回收率和精密度方法的回收率为 93.2%~106.3%，相对标准偏差小于 4%（n=6 ） 8 色谱图4杨杨杨-10010203040506070809010010120130mV2 4 6 8 10 12 14 16 18min图 1 水杨酸标准溶液（200 μg/mL ）的高效液相色谱图。