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方法8321 b溶剂萃取非挥发性化合物高性能液相色谱/ THERMOSPRAY /质量光谱法(hplc / ts / ms)或紫外(uv)检测 SW-846不打算成为分析培训手册因此,方法程序的编写是基于这样的假设:它们 将由分析师执行至少在化学分析的基本原理和学科的使用方面接受过正式培训 技术此外，SW-846方法，除所需方法外，均用于分析方法定义的参数，旨在指导方 法，其中包含一般实验室可使用的分析方法或技术的执行信息作为一个基本的起 点来产生它自己的详细的标准操作程序(SOP),无论是用于一般用途，还是用于 特定的工程应用程序性能数据本方法中包含的内容仅用于指导目的，并不打算这样做，也不是必须这样做不得 作为实验室认可的绝对质量控制接受准那么1.0范围和应用1.1本方法采用高效液相色谱法，结合TS-MS(热喷雾质谱)和紫外(UV)探测器，为各种溶剂萃取非挥发性化合物的 测定，包括染料、有机磷化合物，苯氧酸除草剂和氨基甲酸酯以下化合物已由 这种方法确定，虽然不是所有的化合物都是易受紫外线检测：分析物CAS No.a偶氮染料分散红 1 2872-52-8分散红 53769 -57-1分散红色 13 126038-78-6分散黄色56439 -53-8分散橙3 730-40-5分散橙 30 5261-31-4分散棕 1 17464-91-4溶剂红 3 6535-42-8溶剂红23 85-86-9慈醍染料分散蓝色3 2475-46-9分散蓝色14 2475-44-7分散红 60 17418-58-5分析物CAS No.a有机磷化合物灭多虫 16752-77-5Thiofanox 39196-18-4节）或用于质量校准的其他化合物。

可选三联四极杆质谱仪一一可用碰撞气体在第二四极产生子离子光谱单 四极工作模式数据系统一一允许连续采集的计算机系统并在机器可读介质上存储所有在 整个过程中获得的质谱色谱程序的持续时间必须与质谱仪连接计算机必须有软 件，允许任何MS数据文件搜索离子指定的质量，这样的离子丰度被绘制与时间 或扫描数这图的类型定义为提取离子电流剖面（EICP）软件也必须是可得的， 允许在任何EICP指定的时间或之间的丰度整合scan-number限制必须有计算 机软件来操作特定的质谱仪的模式6.2 高效液相色谱配备紫外检测器具有溶剂可编程泵送系统的分析系统二元溶剂 系统，以及所有必要的配件，包括注射器，10-9注射科，分析柱、净化气体等 自动注入器是可选的，但是对于多个样本第6.3节中列出的列也用于这个系统 至少，紫外探测器必须能够在两种波长下工作在这个过程中描述，例如254和 280 nm传统的（光电倍增管）可以使用探测器或光电二极管阵列探测器如果UV 探测器是要用在与热喷涂接口串联，检测器电池必须能够承受高压（高达6000 psi）o然而，紫外检测器可以连接到高效液相色谱与HPLC/MS无关，在这种情况 下，标准的HPLC压力是可接受的。

6.3 高效液相色谱柱保护柱和分析柱是必要的本节中列出的列是开发该方法时使用的列清单对于这些列，此方法并不打算排 除其他列的使用现有的或可能开发的实验室可以使用这些柱或其他柱其它尺寸 和/或装有不同固定相的实验室记录方法性能数据（例如，色谱分辨率，分析物分 解，和灵敏度），提供适合预期应用的分析性能6.3.1 保护柱——C18反相保护柱，10mm X 2.6 mm ID, 0.5-|im熔块或同等物 保护柱应使用相同或类似的固定装置相作为分析柱6.3.2 分析柱——C18 反相柱,100 mm x 2 mm ID, 5-ODS-Hypersil 颗粒尺寸;或 C8 反相柱，100 mm x 2 mm ID, 3-|imMOS2-Hypersil或同等的颗粒尺寸6.4 偶氮染料标准净化设备索氏提取装置6.4.1 提取套管——单厚度，43 X 123毫米滤纸,9.0 cm （Whatman定性1号或同等尺寸）6.4.2 硅胶柱-3英寸x8o ,填充硅胶（60型，EM试剂70/230目或同等）氯化苯氧酸类化合物的提取设备6.4.3 Erlenmeyer烧瓶-500毫升宽口玻璃,500毫升玻璃,24/40毛玻璃接头, 1000ml玻璃别离漏斗-2000毫升6.4.4 量筒1000-mL漏斗一直径75mm6.4.5 腕振器-Burrell 75型或同等型号酸度计6.5 库德娜-丹麦（K-D）仪器（可选）浓缩管-10毫升刻度。

毛玻璃塞子是用来防止提取物蒸发662蒸发烧瓶-500毫升用弹簧连接到浓缩管上，夹,或同等学历6.6.3 双球微斯奈德柱弹簧一1/2英寸6.6.4 溶剂蒸气回收系统（Kontes K-545000-1006 或 K-547300-0000, Ace Glass 6614-30,或同等）注意:此玻璃器皿推荐用于溶剂回收过程中浓缩程序需要使用库德纳-丹麦的蒸发 集中器联邦，管理挥发性气体排放的州或地方市政法规有机物环保署建议采 用这种回收系统作为一种实施减排计划的方法溶剂回收是一种符合减少废物和 防止污染措施的方法6.7 一次性血清学吸液管收集管-15ml锥形，刻度6.8 瓶-5毫升锥形，玻璃，内衬聚四氟乙烯（PTFE）螺旋盖或卷曲顶部硅烷化玻璃棉6.9 微注射器一100瓜、50HL、10|iL（Hamilton701N或同等量）和50piL钝化（汉密 尔顿705SNR或同等）旋转蒸发器——配备1000ml接收瓶6.10 天平——分析重量可达0.0001 g,顶部装载可达重量至0.01克容量瓶,A 类-10-mL 至 1000-mL6.11 量筒——100毫升别离漏斗-250毫升6.12 别离漏斗-2-L,装有聚四氟乙烯旋塞浓缩器适配器(可选)一一用于氨基甲酸酯提取6.13 N-Evap 111型分析蒸发器组织协会，Northborough, MA,或同等职位7。

试剂和标准品所有试验必须使用试剂级化学品除非另有说明，否那么目的是使所有试剂符 合分析美国化学学会的试剂，如有这种规格其他只要首先确定试剂具有足够高 的纯度，就可以使用等级允许其使用而不降低测定的准确性试剂应储存在玻璃 中，以防止污染物从塑料容器中渗出7.1 无有机试剂水本方法中所有涉及到水的引用均为无有机试剂水，如第一章 所定义7.2 硫酸钠(颗粒状，无水)，Na2SO4o 400℃加热4小时净化在浅托盘中，或用二 氯甲烷预先清洗7.3 醋酸镂(NH4OOCCH3)溶液(0.1 M)用0.45|iM滤镜过滤膜过滤器(Millipore HA 或等效)7.4 乙酸，CH3CO2H(l%v/v, 0.1N)硫酸溶液——1:6,v/v缓慢加入50毫升H2so4 (sp.gr.)1.84)至50毫升水7.5 氮气，纯度99%以上萃取溶剂在感兴趣的浓度下，从样品基质中提取的感兴趣的分析物萃取溶剂的选择将取 决于所研究的分析物，没有单一的溶剂普遍适用于所有分析物组无论采用何种 溶剂体系，包括在这个方法中特别列出的那些，分析师必须证明足够的性能感兴 趣的分析物，在感兴趣的水平至少，这样的示范会包含方法3500中描述的熟 练程度的初步证明，使用清洁参考矩阵。

方法8000描述了可用于开发性能的过 程这种演示的标准以及基质峰值和实验室对照样品结果除非另有说明，所有溶 剂必须是hplc级或同等的溶剂可能使用前除气7.5.1 二氯甲烷 CH2CI2甲苯、C6H5CH37.5.2 丙酮、CH3COCH3乙醴，C2H5OC2H5——检测中必须不含过氧化物条（EM Quant,或等效）提 供了去除过氧化物的程序测试条清洗后，必须添加20毫升的乙醇防腐剂升酸7.5.3 甲醇，CH3OH-hplc级或同等物乙月青,CH3CN-hplc级或同等品7.5.4 乙酸乙酯，CH3CO2C2H5标准材料一一每种分析物的纯标准材料或经认证的溶液有针对性的进行分析 根据第7.10节的规定，使用分散偶氮染料前必须进行净化警告:Tris-BP已被列为致癌物净化标准物料和原料药标准溶液应在罩内处理7.6 分散偶氮染料净化这涉及两个程序第一步是索氏提取染料24小时用甲苯将萃取液蒸发至干燥， 采用旋转蒸发器的然后从甲苯重结晶固体，并在约100 EC的烤箱中干燥如 果这步骤不给出必要的纯度，应采用柱层析法负载将固体置于硅胶柱上（第6.4.4 节），并用乙酸洗脱别离杂质采用色谱法，并收集主要染料微分。

7.7 标准的解决方案下面的章节描述了原料、中间体和工作的准备利息化合物的标准这个讨论是作 为一个例子提供的，以及其他目标化合物的方法和浓度，可用于适当的目的应用 程序有关准备的其他信息，请参阅方法8000校准标准7.8 储藏标准溶液标准品可以用纯标准品材料制备，也可以按要求购买认证解决方案商业准备的 库存标准可以被使用，如果他们被认证制造商和验证的标准由纯材料制成7.8.1 精确称量0.0100 g纯溶液配制标准溶液材料将物料溶解在甲醇或其他合 适的溶剂中（例如，制备tris-BP）在乙酸乙酯），稀释到体积在容量瓶注意油于氯代除草剂的反响性，标准必须准备在乙月青如果标准品在甲醇如 果化合物纯度认证为96%或更高，重量可以不使用以校正标准计算出库存的浓度 商业制备如果经过制造商认证，可以在任何浓度下使用库存标准或者由一个独立 的来源7.8.2 将标准溶液装入装有聚四氟乙烯0内衬螺旋盖或压边盖的玻璃瓶中储存 在#6 EC和保护避光股票的标准特别是溶液应经常检查是否有退化或蒸发的迹 象在准备校准标准之前7.9 校准标准每个感兴趣的参数应该至少有5种不同的浓度用甲醇（或其他合适的）稀释标准溶 液制备溶剂）。

至少有一个校准标准应与样品浓度相对应到达或低于到达工程业 绩目标所必需的水平剩下的浓度应与实际发现的浓度的预期范围相对应或应确 定HPLC-UV或HPLC-TS/MS系统的工作范围（见方法8000年）校正标准应在一或 两个月后更换，或在以下情况下更早更换与检查标准的比拟说明存在问题参见 方法8000获取更多信息有关编制校准标准的信息7.10 代理标准分析人员应监视提取、清理（使用时）和分析系统，以及该方法在处理每个样品时 的有效性矩阵，通过在每个样品、标准品和空白上加一个或两个替代品（例如， 有机磷或氯代苯氧酸化合物预计不会出现在样本）7.11 HPLC/MS调质标准推荐使用聚乙二醇400 （PEG 400）、PEG 600或PEG 810进行调谐标准但是，分 析人员可以使用仪器制造商或其他文件来源如果使用PEG溶液,稀释到10% （v/v） 的甲醇使用哪种聚乙二醇取决于分析物分子感兴趣分析物的重量范围对于分 子量小于500的，使用PEG 400,分子量大于500的，使用PEG 600或PEG 8107.12 内部标准当内标校准选项用于HPLC/MS分析时，它是建议分析人员使用同一化学物质的 稳定同位素标记化合物类（例如，13c6 -吠喃可作为内部标准氨基甲酸盐的分析）。

7.17矩阵峰值标准有关矩阵加峰解决方案的信息，请参阅方法3500o准备一个解决方案在适当的 溶剂中含有感兴趣的分析物的注意:用于加钉的化合物的形式应与目标分析物对于苯氧酸类除草剂，尤其要 采用酸的形式酸分析物，而不是酯形式或酸形式，因为使用这些其他形式不会代 表整体萃取、清理和决定的性能相对于目标分析物的方法相反，当酯的形式是 感兴趣的分析物，例如2,4-d, 丁氧乙醇酯，使用分析物的酯形式用于制备基质 掺杂溶液8.0样品的采集、保存和储存参见第四章“有机分析物”的介绍性材。