不同品种车前子中多糖含量比较.pdf

研究报告#不同品种车前子中多糖含量比较付志红?谢明勇3?聂少平?彭日煌?陈军辉?南昌大学 食品科学教育部重点实验室?江西 南昌???????车前子为车前科植物车前的干燥成熟种子∀车前科有?属?约???种?车前属Π λ ανταγο约有???种?广布于世界各地≈??∀目前在国际市场上售量较大的车前子为法车前Π .α φρα!印度车前Π. οϖ α τα的种子∀长叶车前和海滨车前的种子在朝鲜也作为车前子入药≈??∀我国只有车前属? 5中国种子植物科属辞典6记载有??种≈???各地均产∀5中国药典6记载≈???车前药用的只有?种?即车前Π. ασ ια τ ιχα ???又称大粒车前和平车前Π. δεπρ εσ σα •? ? ????又称小粒车前∀目前我国对车前子的应用多限于利尿通淋?认为桃叶珊瑚苷是其主要活性成分?而将其种皮中含有的大量粘液质视为杂质弃而不用∀为发掘我国车前子的临床新用?合理开发和利用这一自然资源?笔者对5中国药典6记载作为药用的车前和平车前的种子中的多糖含量进行了比较研究∀1 实验材料样品?江西吉安产大粒车前子和东北产小粒车前子?由江西省医药保健品进出口公司提供?均经江西中医学院范崔生教授鉴定?仪器???分光光度计?上海第三分析仪器厂? ?ƒ?????电子天平?上海精天电子仪器厂? ?电子恒温不锈钢水浴锅?上海宏兴机械仪器实业制造公司? ?旋转蒸发器?上海申生科技有限公司? ? ??? ???型真空干燥箱?上海实验仪器总厂? ? ? ?÷ ? ?型离心沉淀机?上海医用分析仪器厂? ?试剂无水乙醇!丙酮!乙醚!氯仿!正丁醇?均为国产分析纯∀2 实验方法与结果2 ? 1 车前子多糖的提取与精制称取已干燥的车前子?? ??置索氏提取器中?加入石油醚?沸程?? ∗ ?? ε ???? ??? ?? ε回流提取? ?脱脂?抽滤?滤渣挥干溶剂后?加?? ?乙醇??? ??? ?? ε水浴回流? ??重复提?次?双层滤布过滤?滤渣加??? ??蒸馏水?沸水浴回流提取? ??间歇搅拌?双层滤布过滤?滤渣加??? ??蒸馏水?沸水浴再回流提取? ??间歇搅拌?过滤?合并?次滤液?离心分离?? ??? ? #?? ?? ?? ?? ?? ?? ? ≥? √? ? ?法除蛋白?反复进行?次至无蛋白?然后用流动自来水透析?? ??蒸馏水透析????透析液真空浓缩??? ε ? ?? ? #?? ?? ??真空度? ? ??? ?°? ?至??? ???浓缩液中加入无水乙醇使乙醇浓度达?? ? ?于? ε冰箱中醇沉过夜?再离心分离?? ??? ? #?? ?? ?? ?? ?? ?? ?滤渣≈收稿日期? ????2??2??≈通讯作者? 3谢明勇?×? ?? ?????????????依 次用无水乙醇!丙酮!乙醚各洗?次?真空干燥??? ε?? ? ??? ?°? ?至恒重?即得精制车前子多糖∀以江西吉安产大粒车 前 子???制 得 精 制 车 前 子 多 糖? ?????? ?得 率 为? ? ?? ? ∀留待备用∀2 ? 2 标准曲线的绘制≈??2 ? 2 ? 1 标准溶液的配制 精密称取??? ε干燥至恒重的葡萄糖标准品? ? ??? ? ??置于??? ??容量瓶中?加蒸馏水溶解并稀释至刻度?配成? ? ??? ? ? #?? ?的标准溶液?精确移取此溶液取? ? ? ? ? ? ?? ? ?? ? ?? ??分别置于??? ??容量瓶中稀释至刻度?摇匀?配成系列标准溶液∀2 ? 2 ? 2 蒽酮∃硫酸试液的配制 称取? ? ?? ?蒽酮?加?????浓硫酸?置于棕色瓶中?混合摇匀置于冰箱中?现配现用? ∀2 ? 2 ? 3 标准曲线的制备 分别准确移取? ??系列标准溶液于具塞试管中?以? ??蒸馏水作空白?每管再加入? ??蒽酮2硫酸试液?立即摇匀?置于冰水浴中?然后一起置于沸水浴中加热? ?? ??之后用流动自来水迅速冷却至室温?放置?? ?? ?后?于??? ??处测定吸光度?以吸光度? Α?对葡萄糖浓度? Χ?作回归处理?得回归方程?Χ? ? .????? ? ? .??? Α,ρ? ? ? ??? ? ∀2 ? 2 ? 3 换算因子的测定 精密称取?? ε真空干燥至恒重的精制车前子多糖?? ???置于?? ??容量瓶中?加蒸馏水溶解并稀释至刻度?摇匀?制得车前子多糖贮备液?蒽酮2硫酸比色法测定其吸光度? Α? ?由回归方程求出此精制车前子多糖贮备液中葡萄糖浓度?测得其葡萄糖含量?按下式计算换算因子∀φ? Ω?? Χ# ∆? ??2??式中?Ω为称取多糖的重量???Χ为精制车前子多糖贮备液中葡萄糖浓度? #?? ??∆为多糖的稀释因素??∀因车前子多糖干燥后溶解性降低?故按2 ? 2 ? 1中的方法制得多糖透析液真空浓缩后取等量?? ??浓缩液?份?经醇沉洗涤后?一份直接加蒸馏水溶解?复水性稍好? ?定容?比色?测定多糖含量?另一份真空干燥至恒重?称得精制车前子多糖的干重?由二者计算平均换算因子∀对江西吉安产大粒车前子?将真空干燥的多糖溶于水?测得换算因子φ? ? ? ??? ?利用等体积多糖提取液?醇沉洗涤后?一份直接加蒸馏水溶解?另一份真空干燥至恒重?测得换算因子分别为φ ? ? ? ??? ?则φ ? ? ? ??? ∀其他车前子多糖的#???#第??卷第?期????年?月中 国 中 药 杂 志Χηινα ϑουρνα λ οφ Χηινε σ ε Ματερ ια Μεδιχα∂? ?? ?? ?? ? ? ∏ ? ?? ∏ ???????换算因子φ?结果吉安大粒车前子为? ? ??? ?东北小粒车前子为? ? ??? ? ∀2 ? 2 ? 4 样品中车前子多糖含量的测定2 ? 2 ? 4 ? 1 样品溶液的制备 精密称取车前子样品? ??加入?? ?乙醇??? ??? ?? ε水浴回流? ??趁热抽滤?滤渣用?? ?热乙醇洗?次??? ??≅ ?? ?再重复?次∀挥干溶剂后?滤渣连同滤纸置于烧杯中?加??? ??蒸馏水?? ε水浴温浸? ??提取?次直至提取液中多糖含量用蒽酮2硫酸比色法检测时非常低时为止?合并滤液?离心分离?? ??? ? #?? ?? ?? ?? ?? ?? ?上清液置于??? ??容量瓶中?用少量蒸馏水洗涤残渣?洗液与上清液合并以蒸馏水定容至刻度?用移液管移取?? ??溶液置于?? ??容量瓶中?以蒸馏水定容至刻度?摇匀备用∀2 ? 2 ? 4 ? 2 样品中多糖含量的测定 精密吸取2 ? 2 ? 4 ? 1所得样品溶液? ??于具塞试管中?按照2 ? 2 ? 2 ? 3下的方法测定吸光度? Α? ?由回归方程计算供试液中葡萄糖浓度? Χ? ?按下式计算样品中车前子多糖的含量∀样品中车前子多糖的含量? ? ? ? Χ# ∆#φ/ Ω≅ ??? ??2??式中? ≤为供试液中葡萄糖浓度??? #??? ?? ?∆为多糖的稀释因素? φ为换算因子?Ω为供试车前子的质量??? ? ∀2 ? 2 ? 5 重现性试验 精密称取?份江西吉安产大粒车前子各? ??按照2 ? 2 ? 4 ? 1下的方法同时制备?份样品溶液∀精密移取各样品溶液各? ???分别置于具塞试管中?按照2 ? 2 ? 2 ?3下的测定方法测定吸光度? Α? ?计算车前子多糖的含量?检验此测定方法的重现性?结果车前子多糖含量的平均值为? ? ??? ? ?相对标准偏差?≥⁄? ? ? ?? ? ? ν ? ?? ∀2 ? 2 ? 6 稳定性试验 精密吸取按2 ? 2 ? 4 ? 1中样品溶液制备方法制备的江西吉安产大粒车前子提取液? ??于具塞试管中?按照2 ? 2 ? 2 ? 3下的测定方法测定吸光度? Α? ?每隔? ?时测定?次?连续? ?时考察其稳定性∀结果提取液显色后吸光度在? ?内无明显变化?其吸光度平均值为? ? ??? ? ?相对标准偏差?≥⁄? ? ? ?? ? ∀2 ? 2 ? 7 加样回收率试验 精密称取?份江西吉安产大粒车前子各? ? ? ??加入精制车前子多糖约??? ???按照2 ? 2 ? 4 ? 1样品溶液的制备和2 ? 2 ? 2 ? 3下的测定方法操作?测定吸光度? Α? ?据2 ? 2 ? 5的结果?该车前子中多糖的平均含量为? ? ?? ? ?计算回收率∀结果见表? ∀2 ? 2 ? 8 不同样品的车前子中多糖含量的比较 精密称取所采集的各种车前子样品?各?份?按2 ? 2 ? 4 ? 1样品溶液的制备和2 ? 2 ? 2 ? 3下的测定方法操作?测定吸光度? Α? ?从回归方程中计算供试液中葡萄糖浓度? Χ? ?据式??2??和式??2??计算出样品中多糖的含量∀结果见表? ∀表? 加样回收率测定结果?ν ? ??取样量??原含量??加样量??测得量??回收率? ?平均值? ??≥⁄? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ??? ? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ??? ? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ??? ? ??? ? ?? ? ??? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ??? ? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ?? ? ??? ??? ? ?表? 不同车前子中多糖含量的比较?ν ? ??产地含量? ??≥⁄? ?吉安大粒车前?生品?? ? ??? ? ??吉安大粒车前?盐炒?? ? ??? ? ??东北小粒车前?生品?? ? ??? ? ??东北小粒车前?盐炒?? ? ??? ? ??3 小结3 ? 1 多糖含量的测定有苯酚2硫酸法!地衣酚2硫酸法!≥??? 2? ? ? 2? ? ? ? ??法蒽酮2硫酸法等多种方法∀本实验是利用多糖在浓硫酸作用下?水解生成单糖?并迅速脱水生成羟甲基糠醛?羟甲基糠醛与蒽酮缩合成蓝色化合物?该化合物颜色深浅与糖的浓度成正比∀实验表明?此法简便?且供试液在? ?内显色稳定?重现性较好∀但要注意实验前必须先用?? ?乙醇回流提取除去样品中的单糖!双糖!低聚糖!苷类!生物碱及醇溶性蛋白等干扰性成分∀3 ? 2 测定结果表明?车前子多糖是车前子中含量较高的一种成分∀同属不同品种的车前子其多糖含量存在较大差异?吉安大粒车前?生品?的多糖含量为?? ? ?? ? ? ? ???? ? ?东北小粒车前?生品?的多糖含量为?? ? ?? ? ? ? ???? ? ?由此可见?大粒车前的含量高于小粒车前∀从表?结果也可以看出?车前子中多糖含量因盐炒后下降?其原因有待进一步考察∀3 ? 3 车前在我国分布广泛?资源丰富∀江西省的吉安!吉水!泰和一带是的大粒车前子的主产地≈???漫山遍野都可生长?原料易得?可作为开发植物多糖的主要原料之一∀≈参考文献?≈?? 候宽昭?中国种子植物科属辞典?北京?科学出版社? ???? ? ??? ?≈?? 郑太坤?王 华?王秀英?中药车前的研究概况?辽宁中医杂志? ???? ? ??? ? ?? ?≈?? 中国药典?一部? ???? ? ?? ?≈?? 张惟杰?糖复合物生化研究技术?第二版?杭州?浙江大学出版社? ???? ? ?? ?≈?? 李 诚?车前子现象剖析?中药事业报? ????2??2????版? ?≈责任编辑 王康正?#???#第??卷第?期????年?月中 国 中 药 杂 志Χηινα ϑουρνα λ οφ Χηινε σ ε Ματερ ια Μεδιχα∂? ?? ?? ?? ? ? ∏ ? ?? ∏ ???????。