实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测.ppt

ABO血型鉴定、血型鉴定、Rh血型鉴定血型鉴定临床检验基础与输血教研室唾液中唾液中HAB血型物质测定血型物质测定 实验实验一一 ABO ABO、、RhRh血型血型鉴鉴定定目的：目的：目的：目的：掌握掌握ABOABO正反定型的原理、方法及正反定型的原理、方法及RhRh血型鉴定血型鉴定原理：原理：原理：原理：通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反通常利用红细胞凝集试验，通过正定型和反定型鉴定定型鉴定ABOABO血型正定型正定型是用已知血型特异性抗体（抗是用已知血型特异性抗体（抗-A-A、抗、抗-B-B、抗、抗- -D D……等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；等分型血清）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型反定型是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相是用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体应的抗体器材器材: :小试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、记号笔、显微镜试剂试剂: :1. ABO血型抗体：抗A、抗B；Rh血型抗体： 抗D、抗C、抗c、抗E、抗e2．3％～5％A型、B型及O型试剂红细胞 3. 生理盐水标本标本: :抗凝静脉血 操作操作（试管法）(1)(1)标记试管：标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管分别标记Ac、Bc、Oc。

2)(2)配配5%5%悬浮红细胞：悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，2500r/min离心3分钟，弃上清；重复3次取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红3)(3)加样：加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞4 4）离心：）离心：3000r／min离心15秒（1000g） (5)(5)结果：结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象操作：玻片法操作：玻片法( (鉴定纸板鉴定纸板) ) (1)(1)洁净玻片洁净玻片( (鉴定纸板鉴定纸板) )一张标－一张标－A A、－、－B B，分别用，分别用滴管滴加－滴管滴加－A A、－、－B B试剂试剂1 1滴，再加受检者滴，再加受检者3 3％～％～5 5％红％红细胞悬液细胞悬液l l滴，混匀滴，混匀 (2)(2)另取洁净玻片另取洁净玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) )一张标AcAc、、BcBc、、OcOc，各加受检血清，各加受检血清2 2滴，再分别滴加滴，再分别滴加AcAc、、BcBc、、OcOc悬红悬红1 1滴 (3)(3)室温轻转动玻片室温轻转动玻片( (或鉴定纸板或鉴定纸板) ) ，使血清与细胞充，使血清与细胞充分混匀连续约分混匀连续约2min2min，肉眼观察凝集，肉眼观察凝集( (溶血溶血) )反应。

玻片反应玻片试验时可用低倍镜观察结果试验时可用低倍镜观察结果 表表l ABOl ABO血型正反定型血型正反定型结结果果试剂血清试剂血清试剂血清试剂血清+ +受检红细胞受检红细胞受检红细胞受检红细胞 受检血清受检血清受检血清受检血清+ +试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞试剂红细胞 （正定型）（正定型）（正定型）（正定型） （反定型）（反定型）（反定型）（反定型） -A -B -A -B 受检血型受检血型受检血型受检血型 Ac Ac BcBc OcOc ＋＋＋＋ －－－－ A A 　　－　　－　　－　　－ ＋＋＋＋ －－－－－－－－ ＋＋＋＋ B B 　　＋　　＋　　＋　　＋ －－－－ －－－－－－－－ －－－－ OO 　　＋　　＋　　＋　　＋ 　＋　＋　＋　＋ －－－－＋＋＋＋ ＋＋＋＋ ABAB 　　－　　－　　－　　－ －－－－ －－－－注意事项注意事项1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染作业作业简述ABO血型鉴定正反不一致的原因 4+ 4+ 4+ 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

红细胞凝集成一大块，血清清晰透明红细胞凝集成一大块，血清清晰透明红细胞凝集成一大块，血清清晰透明 3+ 3+ 3+ 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰红细胞凝集成大小块，血清清晰红细胞凝集成大小块，血清清晰红细胞凝集成大小块，血清清晰 2+ 2+ 2+ 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰 l+ l+ l+ l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞±±±± 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞mf mf mf mf 混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（混合凝集外观（mixed fieldmixed fieldmixed fieldmixed field）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布－－－－ 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准 目的目的目的目的 掌握掌握RhRh血型鉴定的原理、方法血型鉴定的原理、方法 原理原理原理原理 RhRh血型系统，包括四十几个抗原，通常使用血型系统，包括四十几个抗原，通常使用相应的抗相应的抗C C、抗、抗c c、抗、抗D D、抗、抗E E、抗、抗e e五种五种RhRh分型血清来分型血清来检查红细胞抗原检查红细胞抗原　　　在临床输血中一般只做　　　在临床输血中一般只做D D抗原的鉴定，被检红抗原的鉴定，被检红细胞和抗细胞和抗D D血清凝集者为血清凝集者为RhRh阳性，不凝集者为阳性，不凝集者为RhRh阴性二二 、、 Rh血型鉴定血型鉴定器材器材 小试管、滴管、试管架、记号笔、载小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机玻片、显微镜、离心机。

试剂试剂1.Rh1.Rh抗血清：常用的为抗血清：常用的为IgMIgM抗抗D D2.2.己知己知RhRh阳性和阴性的阳性和阴性的5 5％红细胞悬液各％红细胞悬液各1 1份份3.3.盐水溶液盐水溶液标本标本 静脉血静脉血操作操作( (盐水试管测试法盐水试管测试法) )1.1.取单克隆抗取单克隆抗-D-D（（IgMIgM））-C-C、、-c-c、、-E-E、、-e-e试试剂各剂各1 1滴到滴到5 5支试管中支试管中2.2.每管各加每管各加1 1滴滴3 3％～％～5 5％待检红细胞悬液％待检红细胞悬液3.3.充分混匀，以充分混匀，以1000 g1000 g离心离心1515秒4.4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集用肉眼观看凝集5.5.判定结果判定结果注意事项注意事项1 1．如临床上只检查是否为．如临床上只检查是否为RhRh阳性，只需用抗阳性，只需用抗D D血清血清进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查进行鉴别，如结果为阴性，应进一步检查排除排除排除排除DuDuDuDu型2 2．因抗．因抗e e血清难以得到，故临床上常用四种血清难以得到，故临床上常用四种RhRh抗血抗血清来定型。

清来定型3 3．．RhRh血型鉴定应严格控制温度与时间，因血型鉴定应严格控制温度与时间，因RhRh抗原、抗原、抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应抗体凝集反应块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻摇动试管，不可用力振摇轻轻摇动试管，不可用力振摇4 4．如鉴定结果只与抗．如鉴定结果只与抗D D血清起反应，而与抗血清起反应，而与抗C C、、-c-c、、-E-E、、-e-e都不凝集，则受检者为都不凝集，则受检者为RhRh缺失型，以缺失型，以- -D-D-表示唾液中唾液中HAB血型物质测定血型物质测定  【【【【目的目的目的目的】】】】了解唾液了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法血型物质测定的原理、方法 【【【【原理原理原理原理】】】】 HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中唾液中血型物质也存在于某些人的分泌液中唾液中HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集所以利合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集所以利用凝集抑制试验，可测定唾液中用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它血型物质，它有助于有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定【【器材器材】】小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机【【试剂试剂】】1. ５％A、B和O型红细胞盐水悬液。

2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清） 【【标本标本】】受检者唾液1.被检者漱口后留取自然流出的唾液被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取，将留取的唾液的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮离心，取上清液置于大试管中，煮沸沸10min，再离心，再离心10min，留取上清液备用留取上清液备用 2.排列试管排列试管3支，分别标明支，分别标明-A、、-B、、-H，，3管各加唾管各加唾液液1滴，每管加相应滴，每管加相应标化血清标化血清标化血清标化血清1滴3.混匀，置室温，中和混匀，置室温，中和10min4.每管加相应悬红每管加相应悬红1滴滴.5. 混匀，离心混匀，离心15秒，观察结果秒，观察结果.标化血清标化血清 1.标记标记试管试管：：3排排18支，分别抗支，分别抗A、、抗抗B及抗及抗H每排再标每排再标2、、4、、8、、16…… ２２.稀释稀释：：每管加盐水每管加盐水50μl每排第1管管对应对应加抗加抗A抗抗B及抗及抗H血清血清50μl，倍量稀释成，倍量稀释成2、、4、、8、、16……稀释液 ３３.加加3％％悬红：悬红：每每排各管排各管对应对应加加悬红悬红50μl，，振摇混匀，振摇混匀，1000g，离心，离心15秒。

秒 ４４.结果：结果：以３以３+为标化血清的最适稀释度为标化血清的最适稀释度操作步骤操作步骤反应物反应物抗Ａ管抗Ａ管抗Ｂ管抗Ｂ管抗Ｈ管抗Ｈ管受检唾液受检唾液１１d１１d１１d标化抗Ａ标化抗Ａ１１d标化抗Ｂ标化抗Ｂ１１d标化抗Ｈ标化抗Ｈ１１d混匀，室温中和混匀，室温中和10min３３%Ａ红细胞Ａ红细胞１１d３３%Ｂ红细胞Ｂ红细胞１１d３３%Ｏ红细胞Ｏ红细胞１１d混匀室温放置混匀室温放置10min，离心后观察，离心后观察抗抗抗抗A A管管管管抗抗抗抗B B管管管管抗抗抗抗H H管管管管非分泌型非分泌型非分泌型非分泌型4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +A A A A型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型——4 4 4 4+ + + +1— 4+ 1— 4+ B B B B型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型4 4 4 4+ + + +——1— 4+ 1— 4+ 0 0 0 0型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型4 4 4 4+ + + +4 4 4 4+ + + +——ABABABAB型分泌型型分泌型型分泌型型分泌型————1— 3+ 1— 3+ 结果判定结果判定6.取试管两支分别作阳性及阴性对照管，取试管两支分别作阳性及阴性对照管，各加分泌型和非分泌型唾液各加分泌型和非分泌型唾液l滴．再加滴．再加抗抗H最适稀释度血清最适稀释度血清l 滴，以滴，以3％％0型红型红细胞作指示，同时进行试验，阳性对照细胞作指示，同时进行试验，阳性对照应不凝集，阴性对照应凝集。

应不凝集，阴性对照应凝集【【注意事项注意事项】】1．如果加热前不离心并如果加热前不离心并除去沉淀除去沉淀，任何可能存在的，任何可能存在的细胞可释放细胞可释放H物质，使非分泌导致假阳性物质，使非分泌导致假阳性2．欲得到清晰的．欲得到清晰的不含粘液的液体不含粘液的液体，最好的办法是将，最好的办法是将唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰唾液冰冻保存数天融化后离心，除去细胞碎屑，冰冻唾液的活性可保留几年冻唾液的活性可保留几年3．可用．可用5%白蛋白白蛋白代替盐水标化代替盐水标化４４.为防止弱分泌型漏检，同时为防止弱分泌型漏检，同时盐水对照试验盐水对照试验，比较二，比较二者凝集强度者凝集强度 思考题请列表比较红细胞血型系统中的主要抗请列表比较红细胞血型系统中的主要抗原及产生抗体的异同点．原及产生抗体的异同点．简述ＡＢＯ正反定型不一致的原因简述ＡＢＯ正反定型不一致的原因。