高效液相色谱法测定水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的方法优化.docx

高效液相色谱法测定水产品中诺氟沙星、环丙沙星、诺沙星的方法优化作者：王嘉权，刘成文来源：《现代食品》2018年第22期摘要：本文采用高效液相色谱法测定水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的残留量 以农业部738号公告-2-2006检测方法为基础，优化前处理步骤，称5 g样品，用酸化乙腈提 取，正己烷去油，过自制无水硫酸钠柱，提取液50 °C旋转蒸发至干用2 mL流动相充分溶解 定容，移至离心管，10 000 r・minT离心5 min，过0.45 um滤膜上机测定结果表明，诺 氟沙星标准曲线的相关系数r=0.999 9，环丙沙星的r=0.999 9，恩诺沙星的r=0.999 8；诺 氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的回收率在73.0%〜87.3%，精密度在4.93%〜7.59%试验结 果符合标准和体系文件要求关键词：水产品；诺氟沙星；环丙沙星；恩诺沙星；高效液相色谱法诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星同属于喳诺酮类抗生素，是一类人畜通用的药物其因具 有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性和毒副作用小等特点，被广泛应用于 畜牧、水产等养殖业中，包括在鸡、鸭、鹅、猪、牛、羊、鱼、虾和蟹等的养殖中用于疾病防 治。

喳诺酮类抗生素具有抗菌谱广、杀菌力强、作用迅速、体内分布广泛及与其他抗生素之间 无交叉耐药性等特点，预防和治疗畜禽的细菌性感染及支原体病有良好的效果［1-2］该类药物 的不良反应主要有：①胃肠道反应恶心、呕吐、不适、疼痛等②中枢反应头痛、头晕、 睡眠不良等，并可致精神症状③该类药物可抑制Y-氨基丁酸（GABA）的作用，因此可诱发 癫痫，有癫痫病史者慎用④影响软骨发育，孕妇、未成年儿童应慎用⑤可产生结晶尿，尤 其在碱性尿中更易发生⑥大剂量或长期应用本类药物易致肝损害目前，诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星常用的液相色谱检测方法有农业部783号公告-2- 2006，但该方法的前处理过程繁琐，加标回收率低本文对该方法的前处理过程进行优化，特 点是用自制的无水硫酸钠柱进行净化处理最终结果回收率和精密度都能达到检测标准的要求1材料与方法1.1材料准备1.1.1仪器Waters e2695高效液相色谱仪配2475荧光检测器，色谱柱SunFireTMC18，分析天平，旋 涡振荡器，高速冷冻离心机，旋转蒸发仪1.1.2 试剂乙腈（色谱纯），正乙烷（分析纯），四丁基漠化铵（分析纯），盐酸（分析纯），无水硫酸 钠（分析纯，经640C灼烧4 h后存于密闭容器中备用），诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星标 准品（纯度高于99%）。

①酸化乙月青：乙腈：50%盐酸水溶液（10 000 : 8）②四丁基漠化铵溶液：精确称 取3.22 g四丁基漠化铵，用水溶解磷酸调pH到3.1并定容至1 000 mL,过0.45 nm滤膜 ③流动相：四丁基漠化铵溶液：乙青=95 : 51.1.4标准曲线配制用流动相分别配制浓度为5、10、20、50、100ug・L-1和200 ug・L-11.1.5自制无水硫酸钠柱准备20 mL注射器、分析滤纸和已经灼烧后的无水硫酸钠，将滤纸剪成注射器口径大小 （如图1）,再将剪好的滤纸放到注射器的最底部，最后将无水硫酸钠放进注射器内（如图2）, 自制无水硫酸钠柱完成1.2实验方法1.2.1样品前处理!■ ' »'■ mu ' tia , iu»"""ui ic> iJa -du~~iiS"""itU4tt nMU 点 F ・X J .U-flAi圈】所■/£技正岫M称取5 g样品于50 mL离心管中，加5〜6粒玻璃珠，加入20 mL酸化乙青后立即振荡 （防止样品结块），再加入10 mL正己烷振荡，以4 000 r・minT离心5 min，去上层取下 清层过自制无水硫酸钠柱再加入20 mL酸化乙青和10 mL正己烷再提取一次，去上层取下清 层过自制无水硫酸钠柱，再加10 mL酸化乙青冲洗自制柱。

收集液于50 °C旋转蒸发至近干 用2 mL流动相充分溶解定容后，10 000 r・minT高速冷冻离心5 min，下清液过0.45 um 滤膜上机流动相：乙腈：四丁基漠化铵溶液=5 : 95 ；流速：1.5 mL-min-1 ；检测波长：激发波长 280 nm、发射波长450 nm；柱温：40 °C；进样量：20 uL2结果与分析2.1校正曲线及色谱图诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星校正曲线如图3〜5所示，标准品色谱图如图6所示2.2回收率和精密度分别在空白的草鱼样品中加入0.250、0.500 mL质量浓度为100 Ug・L-1的诺氟沙星、 环丙沙星、恩诺沙星的混合标准溶液（5.00、10.00ug・kg-1浓度水平），0.100 mL质量浓 度为1 000 ug・L-1的诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的混合标准溶液（20.0 ug・kg-1浓 度水平），按本文方法进行测定，平行测定6次，方法的回收率在73.0%〜87.3%,相对标准 偏差为4.93%〜7.59%，结果见表1从结果表1可以看出，使用本文优化后的方法进行检测，诺氟沙星的回收率为78.2%〜 87.3%，相对标准偏差为4.93%〜6.95%；环丙沙星的回收率为75.0%〜82.1%，相对标准偏 差为5.93%〜7.54%；恩诺沙星的回收率为73.0%〜84.2%，相对标准偏差5.93%〜7.59%。

符合标准要求Ub ' 'kca ' IBiaI： CBLiMBTlH3结论本方法的特点是使用了自制的无水硫酸钠柱对样品进行吸水和净化，与农业部738号公告 -2-2006标准方法相比起来步骤更为简便，减少在实验中提取液转移的次数，从而既能降低时间成本又能保证较高的回收率，提高检测效率本次试验结果证明，优化后的检测方法能满足 日常检测工作需求，可用于水产品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星药物残留量的测定山诺财d厢炸.愚醐斜^罪33农I 格昂中野丙汕城、幽蜗诞星的加侨回收甲椎痣站smtt叵1收廖 必恩％MU玷】7S.210.00B.23心4.的2D Ddl17.4AB7.36.^5或电口1.7S7S.U白.廿坏周也星了.皿7V.&2U.0-0I <5.43眩15.