海带中甘露醇提取.doc

中南民族大学工商学院生物制药工程技术实验论文系： 环境与生命科学系 专业： 生物工程 年级： 08 题目: 海带提取物中甘露醇技术条件研究 学生： 徐晶 学号：20081659 指导教师： 邓秋红 2011年9月24日目 录摘 要 2关键词 2Abstract 2Keywords 2前 言 31. 材料与方法 41.1 材料，仪器及试剂 41.1.1 材料与主要试剂 41.1.2 主要仪器 51.2 实验方法 51.2.1 试剂配法 51.2.2 甘露醇标准溶液的制备 51.2.3 甘露醇标准曲线的制备 51.2.4 甘露醇提取条件研究实验 52. 结果与分析 62.1 标准曲线的绘制 62.2 溶剂种类对甘露醇提取的影响 62.3 提取次数对甘露醇提取的影响 73. 讨论 7参考文献 8海带提取物中甘露醇技术条件研究摘 要：为了探究海带中甘露醇的提取工艺及其含量，充分利用海带资源提取甘露醇，使甘露醇在医药、食品及其他方面得以更为广泛的应用本实验采取水浴法提取甘露醇，研究了提取溶剂种类和不同提取次数对甘露醇得率的影响。

采用分光光度法测定样品中甘露醇的含量并计算得率实验结果表明，在95%乙醇、无水乙醇、水三种提取溶剂中，95%乙醇提取条件是最佳的，且第一次提取的效果比第二次提取的效果要好关键词：水浴法提取；海带；甘露醇；含量检测Study on extract condition of mannitol from kelpAbstract: To explore the kelp in the extraction process and the content of mannitol, mannitol full use of seaweed extract resources, to mannitol in the pharmaceutical, food and other aspects can be more widely used. The water bath method to extract mannitol experiment to study the extraction solvent type and different extraction times the yield of mannitol. Spectrophotometry using mannitol content of samples and calculate the yield. The results showed that in 95% ethanol, ethanol, water, species of three extraction solvent, 95% ethanol is the best extraction conditions, and the effect of extraction time is better than the extraction of the two effects.Keywords: Water bath extraction; Kelp; Mannitol; Content detection.前 言海带，是海藻类植物之一，是一种在低温海水中生长的大型海生褐藻植物。

为大叶藻科植物，因其生长在海水，柔韧似带而得名它生长于水温较低的海中，分布于我国北部沿海及朝鲜、日本和俄罗斯太平洋地区沿岩我国北部及东南沿海有大量养殖海带有“长寿菜”、“海上之蔬”“含碘冠军”的美誉[1]海带是一种褐藻，藻体褐色，一般长2～4米，最长达7米叶片狭长，带形海带性味咸寒，具有软坚、散结、消炎、平喘、通行利水、祛脂降压等功效，并对防治矽肺病有较好的作用海带胶质能促使体内的放射性物质随同大便排出体外，从而减少放射性物质在人体内的积聚，也减少了放射性疾病的发生几率[2]海带营养丰富，含有较多的碘质、钙质，有治疗甲状腺肿大之功效海带中还含有大量的甘露醇，而甘露醇具有利尿消肿的作用，可防治肾功能衰竭、老年性水肿、药物中毒等[3]甘露醇与碘、钾、烟酸等协同作用，对防治动脉硬化、高血压、慢性气管炎、慢性肝炎、贫血、水肿等疾病，都有较好的效果[4]甘露醇在医药上[5]是良好的利尿剂，降低颅内压、眼内压及治疗肾药、脱水剂、食糖代用品、也用作药片的赋形剂及固体、液体的稀释剂[6]作为片剂用赋形剂，甘露醇无吸湿性，干燥快，化学稳定性好，而且具有爽口、造粒性好等特点在食品方面，该品在糖及糖醇中的吸水性最小，并具有爽口的甜味，用于麦芽糖、口香糖、年糕等食品的防粘，以及用作一般糕点的防粘粉。

在工业上，甘露醇可用于塑料行业，制松香酸酯及人造甘油树脂、炸药、雷管（硝化甘露醇）等在化学分析中用于硼的测定，生物检验上用作细菌培养剂等[7]目前，世界上工业生产甘露醇主要有二种工艺[8]，一种是以海带为原料，在生产海藻酸盐的同时，将提碘后的海带浸泡液，经多次提浓、除杂、离交、蒸发浓缩，、冷却结晶而得；一种是以蔗糖和葡萄糖为原料，通过水解、差向异构与酶异构，然后加氢而得利用海带提取甘露醇的工艺简单易行，在我国已有几十年历史，但由于受到原料资源、提取收率、气候条件、能源消耗等限制，长期以来，其发展受到制约[9]本实验采用水浴提取法，以海带为原料，提取分离其中的甘露醇，研究了海带中甘露醇的提取工艺[10]，为海带的开发与充分利用提供了依据1 材料与方法1.1 材料，仪器及试剂1.1.1 材料与主要试剂市售海带；浓硫酸，分析纯（AR），平煤开封东大化工有限公司试剂厂集团；无水乙醇，分析纯，天津市凯通化学试剂有限公司；高碘酸钠，分析纯，上海山浦化工有限公司；乙酸铵，分析纯，上海山浦化工有限公司；冰醋酸，分析纯，天津市凯通化学试剂有限公司；甘露醇，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；乙酰丙酮，分析纯，天津市红岩化学试剂厂；甲醇，分析纯，天津市凯通化学试剂有限公司。

1.1.2 主要仪器恒温水浴锅；721分光光度计，上海光谱仪器有限公司制造；电子天平，上海精密科学仪器有限公司；电冰箱，美的集团电冰箱制造有限公司1.2 实验方法1.2.1 试剂配法 配置0.015 mol/L NaIO4[11]溶液的方法：精密称取NaIO4 0.323 g溶于250 mL浓度为0.12 mol/L的盐酸溶液中，定容配置Nash试剂[1]的方法：称取75.054 g的NH4Ac固体并加蒸馏水溶解，再加入1 mL冰乙酸和1 mL乙酰丙酮，混合加水定容至500 mL用无水乙醇分别配置95%乙醇溶液和80%乙醇溶液1.2.2 甘露醇标准溶液的制备精密称取甘露醇50 mg溶于蒸馏水中，定容至500 mL，得到浓度为0.1 mg/mL的甘露醇溶液分别移取5 mL、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL上述甘露醇溶液于5个50 mL的容量瓶中，并依次编为1号、2号、3号、4号、5号，定容至刻度即可得到浓度分别为0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL的不同浓度甘露醇溶液[12]1.2.3 甘露醇标准曲线的制备分别移取1 mL不同浓度的甘露醇对照品溶液加入试管中，空白对照管中加入蒸馏水1 mL，加入0.015 mol/L NaIO4溶液1 mL。

混合均匀后在室温下放置10 min，然后在每支试管中加入Nash试剂4 mL，之后在53℃水浴保温15 min使其显色，放入冰箱中即刻冷却，然后取出，至室温后用分光光度计在413 nm处测吸光度，以浓度(mg/mL)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标绘制标准曲线，得出回归方程和R2值1.2.4 甘露醇提取条件研究实验 以甘露醇的得率[2]作为参考指标1.2.4.1 溶剂种类对甘露醇得率的影响准确称取1 g海带粉末，在50℃分别加50 mL无水乙醇、95%乙醇、水作溶剂回流提取2 h在4000 r/min离心5 min后将上清液转移进50 mL的容量瓶内，再用相应的溶剂定容至刻度，得到粗甘露醇溶液[6]然后将上述粗甘露醇溶液稀释10倍，方法为：分别移取5 mL上述粗甘露醇溶液于另一50 mL容量瓶内，用对应的溶剂定容至刻度分别准确移取1 mL上述稀释后的甘露醇溶液于试管中，编号，按照1.2.3的步骤测定其相应的吸光度通过标准曲线计算出不同溶液中甘露醇的质量浓度，然后计算出相应甘露醇的得率1.2.4.2 提取次数对甘露醇得率的影响准确称取1 g海带粉末，加入95%乙醇50 mL，在室温下回流提取1 d[2]。

按1.2.4.1中的方法制得稀释10倍后的甘露醇第一次提取液将第一次提取后的海带残渣继续加入95%乙醇50 mL，在室温下回流提取1 d按上述相同的方法制得稀释10倍后的甘露醇第一次提取液对比一次提取和两次提取的效果分别准确移取1 mL上述稀释后的甘露醇溶液于试管中，编号，按照1.2.3的步骤测定其相应的吸光度通过标准曲线计算出不同溶液中甘露醇的质量浓度，然后计算出相应甘露醇的得率2 结果与分析2.1 标准曲线的绘制表2-1 甘露醇标准曲线编号甘露醇浓度（mg/mL）A413 nm10020.010.09330.020.14940.030.23650.040.34160.050.442图2-1 甘露醇标准曲线由图2-1知：标准曲线为y=8.6886x-0.0070 可得 k=8.68862.2 溶剂种类对甘露醇提取的影响提取条件：50℃水浴提取2 h表2-2 不同溶剂提取甘露醇效果溶剂种类水95%乙醇无水乙醇A413 nm0.0470.2010.116甘露醇含量/mg3.1211.977.08甘露醇得率0.31%1.12%0.71%图2-2 不同溶剂提取甘露醇效果由图2-2可知：在本实验所选取的95%乙醇、无水乙醇、水三种提取溶剂中，95%乙醇提取条件是最佳的，无水乙醇其次，水作提取溶剂时效果最差。

2.3 提取次数对甘露醇提取的影响以95%乙醇作为提取溶剂，一次提取时间为1 d，温度为室温表2-3 不同提取次数提取甘露醇效果不同提取次数第一次第二次A413 nm0.2280.113甘露醇含量/mg13.526.91甘露醇得率1.35%0.69%图2-3 不同提取次数提取甘露醇效果由图2-3知：第一次提取的效果要远大于第二次提取的效果，两次提取所得甘露醇得率相加后高达2.04% 3 讨论我国有着非常丰富的海洋资源，其中海带是最为常见的一种[12]海带具有散结、消炎、平喘、通行利水、祛脂降压等功效，有多方面的生物活性，特别是海带中富含甘露醇甘露醇具有利尿消肿的作用，可防治肾功能衰竭、老年性水肿、药物中毒等[13]还可用于治疗高胆固醇血症、动脉硬化、脑膜炎、急性休克等顽固疾病和糖尿病的代用糖[14]食品方面。